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新型灭生性除草剂草铵膦对柑桔园杂草的防效研究被引量：11: 2010年; 随着转基因抗草铵膦作物的研发和推广应用,草铵膦新型灭生性除草剂市场前景看好。试验结果表明,150 g/L草铵膦水剂(AS)以有效成分含量750～2 100 g/hm2(制剂用量333～933mL/667 m2)防除柑桔园杂草的除草速度快、药效优异,持效期长,能够有效防除柑桔园常见禾本科、阔叶类和其他类杂草,且对柑桔无任何明显不良影响;与410 g/L草甘膦异丙胺盐水剂相比,草铵膦水剂除草速度较快,可用于防除柑桔园杂草。; 李珣陈永曾勇钟国华; 关键词：草铵膦柑桔园杂草

小菜蛾气味受体蛋白PlxyOr83b基因的克隆及表达被引量：2: 2011年; 【目的】克隆小菜蛾Plutella xyostella气味受体Or83b基因,并进行原核表达,为研究小菜蛾寄主选择行为的分子机理,开发昆虫行为调节剂提供基础。【方法】提取小菜蛾的总RNA,反转录获得总cDNA,采用RT-PCR方法扩增目的基因,将其克隆至T载体并测序,然后将目的基因克隆到大肠杆菌Escherichia coli表达载体pET-32a(+)中表达。经酶切、PCR及测序鉴定正确后转化BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE,Western印迹鉴定表达蛋白。【结果】获得了编码小菜蛾Or83b的cDNA序列,该基因阅读框长1 413 bp,编码471个氨基酸,预测的等电点为7.19,命名为PlxyOr83b(GenBank登录号为GQ923610);成功构建了pET-PlxyOr83b原核表达重组质粒,目的基因获得高效表达,其融合蛋白分子量为32.0 kD,Western blot检测结果进一步表明PlxyOr83b在大肠杆菌DE3中得到正确表达。【结论】成功克隆和表达了小菜蛾气味受体基因PlxyOr83b,该基因与其他昆虫Or83b基因基本一致。; 李珣刘晶晶龚亮陈永钟国华; 关键词：小菜蛾气味受体基因克隆原核表达

重叠延伸PCR法构建小菜蛾化学感受蛋白1基因突变体研究被引量：3: 2011年; 【目的】探索重叠延伸PCR法在昆虫化学感受蛋白基因点突变上的应用,研究半胱氨酸(Cys32)对小菜蛾(Plutella xylostella)化学感受蛋白1(PlxyCSP1)结合特性的影响。【方法】用计算机软件模拟PlxyCSP1上Cys32突变前后的蛋白三级结构以及与配体化合物的结合情况,确定点突变位点。根据扩增得到的PlxyCSP1序列设计并合成重叠引物,利用重叠延伸PCR法,将PlxyCSP1上的Cys32突变成色氨酸(Trp32),获得突变体PlxyCSP1-M。将突变后的基因与载体pET-32a(+)连接,转化大肠杆菌BL21(DE3)。【结果】分子对接图显示,配体可以顺利进入PlxyCSP1的结合口袋,而无法进入PlxyCSP1-M的结合口袋。结合能预测显示,配体化合物与PlxyCSP1的结合能均为正值,与PlxyCSP1-M的结合能均为0。突变后的重组质粒测序结果表明,Cys32(TGC)已突变为Trp32(TGG),经IPTG诱导,该菌表达了分子质量约为36 ku的融合蛋白。【结论】Cys32是影响PlxyCSP1结构和功能的重要氨基酸残基。Cys32突变为Trp32后,PlxyCSP1-M结合特性发生了变化,不能与配体化合物正常结合。; 任珍珍刘晶晶柳晓磊陈永李珣胡美英; 关键词：小菜蛾重叠延伸PCR

我国生物农药剂型的研发现状: 生物农药由于其高效、广谱、对人畜安全及生态环境相容等特点，前景十分广阔。本文简要介绍了目前国内生物农药剂型的研发现状，指出为了能使其更好的发挥作用，满足生产实践需要，生物农药剂型的加工和研制有着十分重要的意义。; 李珣黄劲飞黄文文钟国华; 关键词：生物农药生产工艺安全控制; 文献传递

小菜蛾PlxyOr83b基因的克隆及表达研究: 气味受体(odorant receptors)是嗅觉系统的关键成分之一,对气味受体的研究是了解昆虫化学信号分子识别机制的重要基础。昆虫气味受体基因分为两类,一类是编码传统气味受体(conventional recepto...; 李珣; 关键词：小菜蛾气味受体基因克隆原核表达嗅觉系统

小菜蛾泛素延伸蛋白基因的克隆与原核表达被引量：3: 2011年; 利用RT-PCR和RACE技术,以小菜蛾(Plutella xylostella)3龄幼虫的cDNA为模板,克隆获得泛素延伸蛋白基因Px-ubi(GenBank No.FJ527489),核苷酸序列全长537 bp,其中开放阅读框全长387 bp,编码129个氨基酸残基,预测分子质量为16.7 ku,等电点为9.1,与已知真核生物泛素延伸蛋白的同源性为92%～98%。RT-PCR结果显示Px-ubi在小菜蛾不同生长发育时期均有表达,其中卵期、3龄期和预蛹期含量较高,而成虫期含量较低。同源建模显示,Px-ubi的3D结构主要由1个α螺旋、4个β折叠以及β转角和不规则卷曲组成,4个β折叠两两反向平行排列在α螺旋的一侧。将该基因重组到表达载体pET-32a(+)中,获得重组载体pET32a-Px-ubi,并转入原核细胞中表达。SDS-PAGE和Western blot分析表明,经IPTG诱导后,Px-ubi能在大肠杆菌BL21中高效表达,电泳检测到1条约16.7 ku的外源蛋白,与预测的蛋白分子质量吻合。; 李晓梅陈永李珣钟国华; 关键词：小菜蛾泛素基因克隆原核表达

噬菌体展示技术在蛋白质研究中的应用被引量：7: 2009年; 噬菌体展示技术所展示的外源蛋白质可以保持相对独立的空间结构和生物活性,并实现基因和表达蛋白质的体外转换,是蛋白质研究的重要工具。目前用于构建展示文库的噬菌体主要有丝状噬菌体、λ噬菌体、T4噬菌体和T7噬菌体,且在展示功能蛋白结构域、确定核酸结合蛋白质及其相互作用、蛋白质相互作用、蛋白质定向设计和空间结构改造、新受体和配体的发现、筛选酶抑制剂、细胞信号转导、抗原表位分析等方面应用广泛,应用前景良好。; 李珣任珍珍钟国华; 关键词：噬菌体展示技术蛋白质

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李珣