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李涛

作品数：5 被引量：10H指数：2
供职机构：中南大学湘雅医院更多>>
发文基金：湖南省科技厅科技计划项目更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

合作作者

文献类型

  • 5篇中文期刊文章

领域

  • 5篇医药卫生

主题

  • 5篇细胞
  • 4篇病毒
  • 3篇乙型
  • 3篇乙型肝炎
  • 3篇人肝
  • 3篇人肝细胞
  • 3篇肝细胞
  • 3篇肝炎
  • 2篇蛋白
  • 2篇乙肝
  • 2篇乙肝病毒
  • 2篇乙型肝炎病毒
  • 2篇质粒
  • 2篇基因
  • 2篇肝病
  • 2篇肝炎病毒
  • 2篇X蛋白
  • 1篇单个核细胞
  • 1篇移植瘤
  • 1篇乙肝病毒X基...

机构

  • 5篇中南大学

作者

  • 5篇谭德明
  • 5篇刘国珍
  • 5篇李涛
  • 3篇吴传湘
  • 2篇刘洪波
  • 2篇郑芳
  • 1篇刘菲
  • 1篇钟艳丹
  • 1篇徐旭雯

传媒

  • 2篇生命科学研究
  • 1篇中华传染病杂...
  • 1篇中华肝脏病杂...
  • 1篇中国感染控制...

年份

  • 2篇2009
  • 1篇2008
  • 2篇2007
共 5 条 记 录，以下是 1-5
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排序方式：
HBV X基因转化人肝细胞的实验研究被引量：2
2008年
选取已稳定转染HBV X基因的QSG7701细胞(pCMV X/QSG7701),并以稳定转染空质粒pRc/CMV2的QSG7701细胞(pRcCMV2/QSG7701)及未转染的QSG7701细胞为对照,用免疫荧光方法检测pCMV X/QSG7701细胞中HBX蛋白的分布;用RT-PCR方法和免疫细胞化学法分别检测细胞中c-Myc表达;用光镜及电镜观察细胞形态学变化,进一步研究乙肝病毒(HBV)X基因对永生化非瘤性人肝细胞QSG7701的转化作用.研究发现,乙肝病毒X(HBX)蛋白主要分布在细胞膜及细胞浆;c-Myc mRNA及c-Myc蛋白在3种细胞中均有表达,但转染了X基因的细胞中c-Myc的表达水平较其他两组明显升高(P<0.01);光镜和电镜下观察发现pCMV X/QSG细胞的胞核较大,核膜增厚,核仁肥大且增多,核/浆比例失调,可见少量多核巨细胞,pRc-CMV2/QSG7701细胞与QSG7701细胞核浆比正常,染色质分布均匀,胞核大小及形态正常.结果表明,HBVX基因成功转染了QSG7701细胞,HBV X蛋白主要分布于转染细胞的细胞膜和细胞浆中,HBX可能通过上调转染细胞中c-Myc蛋白的表达而使细胞具备恶性化生长的倾向.
吴传湘刘国珍李涛谭德明刘洪波
关键词：乙肝病毒X蛋白人肝细胞
乙肝病毒X基因真核表达质粒及细胞模型的建立被引量：4
2007年
采用聚合酶链反应(PCR)方法扩增HBV X基因,定向亚克隆入真核表达载体pRc/CMV2,构建重组质粒pCMV/X;采用脂质体法转染QSG7701细胞,筛选阳性细胞克隆;RT-PCR法检测HBV X mRNA的表达情况,Western blotting法鉴定HBx蛋白的表达.结果表明,构建的真核重组表达质粒pCMV/X中包含有完整的HBV X基因片断,pCMV/X转染的QSG7701细胞中有HBV X mRNA及HBx蛋白的稳定表达.成功建立了HBV X稳定转染的细胞系,为进一步探讨HBx在HCC的发生发展过程中所起的作用,提供了一个有价值的细胞模型.
李涛刘国珍谭德明吴传湘刘洪波
关键词：HBVX蛋白真核表达细胞模型
乙型肝炎病毒X基因转化人肝细胞QSG7701的体外观察
2009年
目的观察HBVX基因多功能蛋白（HBx）的表达对QSG770l细胞生物学特征的影响及对其的转化作用。方法采用脂质体法分别将重组质粒pCMV／X及真核表达质粒pRc／CMV2稳定转染QSG7701细胞，分别获得pCMVX／QSG7701、pRcCMV2／QSG7701，设未转染的QSG7701细胞为对照组。Western印迹检测细胞中HBx、c-Myc及Bcl-2蛋白的表达，MTT比色法、流式细胞技术、软琼脂克隆形成率实验检测细胞的生物学活性。结果HBx高表达于pCMVX／QSG7701中。pCMVx／QSG7701中c—Myc蛋白的表达水平较其他两组高，Bcl-2蛋白在3组细胞中均有表达，但表达水平差异无统计学意义。在pCMVx／QSG7701、pRcCMV2／QSG7701及未转染的QSG77013组细胞中，pCMVX／QSG7701组S期细胞所占百分比较后两组明显增加[分别为（28．80±2．32）％、（15．50±2．64）％、（21．50±3．66）％，LSD0．05=3．95％，LSD0．01=5．47％，P〈0．01]，其G1期细胞所占百分比较后两组明显减少[分别为（62．30±3．85）％、（78．70±4．12）％、（78．10±4．45）％，LSD0．05=5．63％，I。SD0．01=7．79％，P〈0．01]，其凋亡率明显高于后两组[分别为（14．90±1．01）％、（8．91±0．48）％、（4．03±0．47）％，I．SD0．05=0．94％，LSD0．01=1．31％，P〈0．01]，其细胞株的倍增时间较后两组明显缩短（分别为14h，29h，38h），其软琼脂克隆形成率明显高于后两组[分别为（19．83±1．96）％，（1．76±0．03）％，（1．33±0．18）％，LSD0．05=1．53％，LSD0．01=2．11％，P〈0．01]。结论HBx能够在体外转化人源性非瘤性肝细胞QSG7701，使细胞具有恶性化生长的倾向。
李涛刘国珍谭德明吴传湘郑芳
关键词：基因转变肝细胞质粒
乙型肝炎患者外周血单个核细胞中HBV DNA和HBVcccDNA定量检测被引量：5
2007年
目的通过对外周血单个核细胞（PBMCs）中乙型肝炎病毒（HBV）DNA和HBV共价闭合环状DNA（cccDNA）的检测，证实不同临床类型乙型肝炎患者PBMCs被HBV感染的事实。方法提取PGM-HBV质粒，用双蒸水连续10倍梯度稀释，建立浓度为3×10^2～3×10^5拷贝／mL PGM-HBV标准系列；常规分离全血中的PB-MCs，提取DNA，应用实时荧光定量聚合酶链反应法检测PBMCs中HBV DNA和HBVcccDNA。结果78例慢性乙型肝炎患者，PBMCs中HBVcccDNA阳性31例（39．74％）。HBVcccDNA与血清和PBMCs中HBV DNA阳性率和滴度有良好的一致性。但在不同临床类型的乙型肝炎患者之间，PBMCs中HBVcccDNA的检出率无差别（P〉0．05）。结论根据HBVcccDNA检测结果阳性，进一步证实HBV能感染PBMCs，并在其中复制；PBMCs中HBVcccDNA阳性与疾病的炎症活动和疾病的严重性无关。
钟艳丹谭德明李涛刘国珍徐旭雯刘菲
关键词：共价闭合环状DNA外周血单个核细胞
乙型肝炎病毒X基因转染人肝细胞致裸鼠的成瘤实验
2009年
目的拟在裸鼠体内证实HBVX基因能否转化人肝细胞形成移植瘤。方法利用高表达HBx基因的pCMVX／QSG7701细胞株作为实验组，以表达空白质粒的pRcCMV2／QSG7701细胞株和QSG7701细胞株为对照组接种于裸鼠皮下，观察裸鼠能否成瘤。HE染色、显微镜检查研究移植瘤的组织形态学特征。成瘤率的比较采用Fisher’s精确检验。结果接种pCMVX／QSG7701细胞株的所有6只裸鼠在第2周开始均出现移植瘤生长，周围器官和组织未发现转移灶。对照组至接种后第35天无移植瘤生长（x^2=16．505，P〈0．01）。HE染色证实移植瘤为肝细胞癌组织。结论HBVX基因表达可以直接导致肝细胞癌变。
郑芳刘国珍李涛谭德明
关键词：移植瘤
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