李晋
- 作品数：9 被引量：33H指数：3
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 人OAZ-ORF2基因真核表达载体的构建及在Hela细胞中的表达被引量：1
- 2007年
- 目的克隆人鸟氨酸脱羧酶抗酶蛋白OAZ-ORF2基因,重组至真核表达载体,并在Hela细胞中表达。方法以pET32a-OAZ质粒为模板,PCR法扩增OAZ-ORF2序列,测序鉴定后重组入真核表达载体pEGFP-N1,转染Hela细胞,表达重组蛋白。结果PCR产物经琼脂糖电泳证实与目的基因长度一致,测序结果与GenBank公布的OAZ基因的ORF2序列一致。重组载体在Hela细胞中表达OAZ-ORF2蛋白,Western blotting分析在相对分子质量44.5×103左右出现新的蛋白条带。结论成功构建人OAZ-ORF2基因真核表达载体,并获得表达。
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- 关键词：真核表达HELA细胞
- 外源性antizyme 1基因转染对SH-SY5Y细胞的生物学影响
- 2007年
- 目的研究antizyme1(AZ1)基因对成人神经廇SH-SY5Y细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法将构建好的AZ1基因重组真核表达载体pAZ1m稳定转染SH-SY5Y细胞。通过MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞术分析AZ1转染对细胞周期及凋亡的影响。RT-PCR与Western blotting检测AZ1基因转染对cyclin D1和caspase-3表达的影响,caspase-3试剂盒检测酶活性变化。结果稳定转染SH-SY5Y细胞后,检测结果显示AZ1基因转染能够减慢SH-SY5Y细胞增殖速度,并使细胞停滞于G0/G1期。在cyclin D1基因表达抑制的同时,caspase-3基因表达上调。酶活性测定显示Caspase-3活性上升。结论AZ1基因能够抑制SH-SY5Y细胞增殖,通过降低cyclin D1的表达阻滞细胞周期于G0/G1期,并上调caspase-3表达促进SH-SY5Y细胞凋亡。
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- 关键词：抗酶
- Antizyme1基因转染对K562细胞增殖与凋亡的影响被引量：1
- 2007年
- 目的:研究鸟氨酸脱羧酶抗酶蛋白对人红白血病K562细胞增殖、三氧化二砷(As2O3)诱导凋亡时的影响。方法:定点突变技术构建缺失frameshift位点的pEGFP-N1-AZ1-mutation重组表达载体。脂质体法转染K562细胞,通过G418筛选获得稳定表达antizyme1的K562pAZ1m细胞系。采用不同浓度的As2O3处理细胞,通过MTT法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期及凋亡变化。并通过RT-PCR方法检测antizyme1转染对cyclinD1和survivin基因表达的影响。结果:获得稳定表达antizyme1的K562pAZ1m细胞株后,其增殖能力明显减慢。cyclinD1基因表达降低,细胞主要停滞于G0/G1期。在As2O3的诱导作用下,细胞凋亡增多,survivin基因表达降低。结论:AZ1基因能够抑制K562细胞增殖,通过对cyclinD1的负调控使细胞周期停滞于G0/G1期。并可能通过下调survivin表达来加强As2O3对其的诱导凋亡作用。
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- 关键词：抗酶细胞增殖细胞周期凋亡
- 抗酶1基因转染对HeLa细胞增殖及细胞周期的抑制作用被引量：6
- 2007年
- 研究抗酶(antizyme)1对人宫颈癌HeLa细胞增殖与细胞周期的影响,并分析抗酶1对细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达影响.采用定点突变技术,将抗酶1的frameshift位点缺失,随后将突变基因重组至真核表达载体pEGFP-N1中,鉴定后转染HeLa细胞.通过MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞术分析抗酶1对细胞周期的影响.RT-PCR和Western印迹检测抗酶1转染对细胞周期蛋白D1基因表达的影响.酶切结果显示,抗酶1突变基因成功克隆至pEGFP-N1中.成功转染HeLa细胞后,检测结果显示,抗酶1能够减慢HeLa细胞增殖速度,并使细胞停滞于G0/G1期,细胞周期蛋白D1基因的表达同时受到抑制.实验说明,抗酶1基因能够抑制HeLa细胞增殖,通过降低细胞周期蛋白D1的表达阻滞细胞周期.
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- 关键词：抗酶细胞增殖细胞周期细胞周期素D1
- 研究生课程中的分子生物学教学探索与实践被引量：3
- 2008年
- 研究生教育是医学院校中的最高层次教育,随着分子生物学在生命科学领域内占据越发重要的位置,如何在研究生层次把握好分子生物学知识的再教育就成为教研室的工作重心所在。本教研室为适应高教改革的需要,从教学思路、教学内容、教学模式等方面进行了有益的探索与实践,以期能更加完善医学研究生分子生物学课程的教学。
- 姜立李晋冯春琼陈士良马文丽
- 关键词：分子生物学教学
- 生物化学精品课程的建设与实践被引量：20
- 2007年
- 生物化学是基础医学里的主干学科,研究所通过近几年的课程建设,在优化课程内容、改善教学方法、加强教育技术、强化师资队伍等环节上进行了诸多有益的改革,起到了很好的教学效果,并被评为2005年度国家级精品课程。
- 姜立马文丽南方医科大学基因工程研究所李晋陈士良朱利娜冯春琼
- 关键词：生物化学精品课程教学改革
- 雪旺氏细胞共培养对成肌细胞基因表达谱的影响
- 随着骨骼肌相关疾病如骨骼肌损伤，肌营养不良，肌萎缩和肌肥大等的发病率越来越高，有关骨骼肌损伤后修复、再生和重建的细胞和分子水平的机制研究日益受到研究者的高度关注。应用组织工程学原理和技术方法研究复合型的骨骼肌重建，进而修...
- 李晋
- 关键词：雪旺氏细胞成肌细胞共培养基因表达谱骨骼肌损伤
- 文献传递
- 人OAZ突变基因的克隆构建及重组蛋白表达被引量：2
- 2007年
- 目的 构建人鸟氨酸脱羧酶抗酶(OAZ)突变基因,重组至原核表达载体中并表达出重组蛋白.方法 采用基因定点突变技术在OAZ基因TCCTGATG(199～206)位置造成第202位碱基T碱基缺失,使核糖体的阅读框+1移位,连续表达OAZ基因的ORF2部分.测序鉴定后,重组质粒转化BL21菌,进行突变基因的蛋白表达.结果 重组质粒经测序后确认202位碱基T缺失,其余碱基序列无变化.重组的突变基因转入BL21后在IPTG诱导下表达OAZ全长蛋白,SDS-PAGE分析在相对分子质量45 900左右出现新的蛋白条带.结论 成功构建人OAZ突变基因重组质粒,转化BL21后表达出融合的OAZ全长蛋白,为进一步研究其临床应用打下基础.
- 姜立马文丽柯杰兵彭翼飞李晋徐兵郑文岭
- 关键词：突变蛋白表达
- 生物化学精品课程的建设与实践被引量：2
- 2006年
- 生物化学是基础医学里的主干学科,研究所通过近几年的课程建设,在优化课程内容、改善教学方法、加强教育技术、强化师资队伍等环节上进行了诸多有益的改革,起到了很好的教学效果,并被评为2005年度国家级精品课程。
- 姜立李晋陈士良马文丽
- 关键词：生物化学精品课程
