李实骞
- 作品数：15 被引量：23H指数：4
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人巨细胞病毒UL23基因编码蛋白的B细胞表位预测
- 2009年
- 目的预测人巨细胞病毒UL23基因编码蛋白的B细胞表位。方法应用互联网软件分析Hopp&Woods亲水性(Hydrophilicity)、可及性(Accessibility)、极性(Polarity)及柔韧性(Flexibility)、Welling抗原性(Antigenicity)和二级结构(Secondary structures)等参数,用吴玉章等建立的B细胞表位预测法综合评价。结果多种预测法重复了人巨细胞病毒UL23开放阅读框编码蛋白的N端第27～43、104～119、125～160位氨基酸区域内或附近,该区域含有β转角和无规卷曲结构,极可能是B细胞识别表位。结论为应用合成肽或原核表达大片断蛋白制备抗人巨细胞病毒UL23基因编码蛋白的抗体提供了依据。
- 朱峰李弘剑李月琴何智强李实骞张欣周天鸿
- 关键词：人巨细胞病毒B细胞表位
- Prosaposin基因哺乳动物细胞表达质粒的构建及稳定转染细胞系的建立
- 2010年
- 目的构建前凋亡因子prosaposin的哺乳动物细胞表达质粒,转染NIH3T3细胞,建立稳定转染prosaposin的细胞系。方法采用PCR方法扩增prosaposin的开放阅读框,酶切后的PCR扩增产物和退火后的人工合成的c-Myc抗原表位标签,共同克隆至pcDNA3.1(+)哺乳动物细胞表达载体中,构建pcDNA-Psap-Myc融合表达质粒。用脂质体将经过验证、测序的pcDNA-Psap-Myc质粒转染NIH3T3细胞,通过G418筛选建立稳定过表达prosaposin的NIH3T3细胞系。采用RT-PCR和western blotting方法,检测prosaposin在稳定转染的NIH3T3细胞系中的表达。结果成功构建了pcDNA-Psap-Myc融合表达质粒,建立了稳定过表达prosaposin的NIH3T3细胞系。RT-PCR和Western blotting结果表明,构建的稳定细胞系中成功表达prosaposin-Myc融合蛋白。结论Prosaposin哺乳动物细胞表达质粒的成功构建和稳定转染NIH3T3细胞系的建立,为进一步体外研究prosaposin蛋白的功能及其与其他分子间的相互作用奠定了基础。
- 郭芬李月琴李实骞罗志文张欣周天鸿
- Identification the Interaction of HCMV Tugment Protein pUL23 and Human CLIC1
- The Human cytomegalovirus(HCMV) Towne strain UL23 ORF deletion mutant exhibited enhanced growth in HFF cells,s...
- 李实骞姚伙旺周天鸿李弘剑
- 含外显子8的prosaposin蛋白亚型与Rhox5蛋白间的相互作用被引量：1
- 2010年
- 研究含外显子8的prosaposin蛋白亚型(PsapE8)与同源异型框蛋白Rhox5蛋白间的相互作用.重叠延伸PCR法扩增PsapE8的cDNA序列,将其按照通读框方式分别克隆至pGBKT7和pGADT7酵母双杂交载体中构建pGBKT7-PsapE8和pGADT7-PsapE8重组质粒.酵母双杂交实验检测PsapE8与Rhox5蛋白在酵母体内的结合;体外转录翻译S35标记的PsapE8蛋白,GSTpull-down实验检测PsapE8与Rhox5蛋白在体外的结合情况.成功地构建了pGBKT7-PsapE8和pGADT7-PsapE8重组质粒,酵母双杂交实验表明PsapE8蛋白在酵母体内可以结合Rhox5蛋白;GST pull-down实验再次验证了两者在体外的结合;表明含有外显子8的prosaposin蛋白亚型PsapE8可以与Rhox5蛋白相结合.
- 郭芬李月琴李实骞罗志文张欣周天鸿
- 关键词：蛋白相互作用
- 小鼠RHOX5蛋白两种截短型突变体的原核表达及其与MDFIC互作的鉴定被引量：3
- 2009年
- 目的:表达和纯化两种小鼠RHOX5蛋白的截短型突变体,确定完整的RHOX5蛋白及其两种截短型突变体与MDFIC蛋白结合的能力。方法:生物信息学分析小鼠同源异型框蛋白RHOX5的cDNA序列,分别对RHOX5的两种截短型片段RHOX5 N和RHOX5 C进行PCR、分别扩增RHOX5的两种截短型片段RHOX5 N和RHOX5 C并将其克隆至pGEX4T3原核表达载体,构建重组表达质粒。用重组表达质粒分别转化大肠杆菌RosettaTM2(DE3)菌株,经IPTG诱导后,使用Glutathione-Sepherase 4B颗粒对融合蛋白进行小批量亲和纯化,通过SDS-PAGE电泳分离目标蛋白,确定融合蛋白的表达。进行GST-pull down实验,检测完整的RHOX5蛋白及其两种截短型突变体与MDFIC蛋白结合的能力。结果:在大肠杆菌RosettaTM2(DE3)中有效地实现了GST-RHOX5、GST-RHOX5 N和GST-RHOX5 C 3种融合蛋白的可溶性表达;经Glutathione Sepherase 4B颗粒亲和纯化后,获得了纯化后GST融合蛋白;GST-pull down实验证实,含有homeodomain的RHOX5蛋白和RHOX5C截短型突变体可以与MDFIC蛋白相结合,而RHOX5N截短型突变体则丧失了与MDFIC蛋白结合的能力。结论:实现了RHOX5及其两种截短型突变体的原核表达和纯化,证实RHOX5蛋白的homeodomain结构域是其与MDFIC结合的关键部位。
- 郭芬李实骞欧淑芳初彦辉李月琴张欣周天鸿
- 关键词：原核表达和纯化
- mPem蛋白相作用分子的筛选与鉴定被引量：8
- 2006年
- mPem是同源异型框基因,其C末端编码同源异型域。为进一步研究mPem蛋白在胚胎发育和生殖组织发育过程中的作用,利用GAL4酵母双杂交系统筛选小鼠7d胚胎cDNA文库,共获得3个与mPem蛋白相作用的分子。其中之一为Mdfic,一种新的转录调控因子。进一步的酵母双杂交和体外GST_Pulldown试验再次确认两者之间的相互作用。Mdfic与mPem蛋白之间的相互作用暗示两者有可能组成转录调控复合体,共同参与胚胎分化的调控,为两种蛋白功能的研究提供新的思路。
- 罗志文郭芬李月琴李实骞张欣李弘剑周天鸿
- 人DNAJB6蛋白与人巨细胞病毒皮层蛋白pUL23相互作用的鉴定被引量：7
- 2009年
- pUL23是人巨细胞病毒(HCMV)UL23基因编码的皮层蛋白.HCMV皮层蛋白与病毒颗粒的形成、病毒转移、免疫调控等病毒生活过程相关.利用GAL4酵母双杂交系统筛选人胚肾cDNA文库,获得与人巨细胞病毒皮层蛋白pUL23相互作用的宿主蛋白分子DNAJB6[DnaJ(Hsp40)homolog,subfamily B,member 6].回复酵母双杂交、体外GST-Pull down和免疫共沉淀试验再次确认两者之间的相互作用.该结果为进一步研究pUL23蛋白在HCMV生活周期中的作用机制提供依据.
- 姚伙旺李实骞胡嘉淼陈业志邹奕张欣李月琴周天鸿李弘剑
- 关键词：人巨细胞病毒酵母双杂交蛋白质相互作用
- 酵母双杂交系统筛选与HCMV pUL23蛋白相互作用的蛋白质被引量：7
- 2009年
- 将UL23基因的ORF序列克隆到酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒pGBKT7-UL23,用酵母双杂交技术筛选人胚肾cDNA文库中与人巨细胞病毒pUL23相互作用的宿主蛋白分子,再通过回复酵母双杂交再次确认两者之间的相互作用.结果表明:酵母双杂交,回复酵母双杂交试验证明宿主蛋白分子eIF3e(eukaryotic trans-lation initiation factor3,subunit E interacting protein)能够与人巨细胞病毒UL23蛋白相互作用.宿主蛋白分子eIF3e能够与人巨细胞病毒UL23蛋白相互作用,这为进一步研究pUL23蛋白在HCMV生活周期中的作用机制提供依据.
- 赵振岭李实骞姚火旺周天鸿李弘剑
- 关键词：人巨细胞病毒酵母双杂交蛋白质相互作用
- 氧化固醇结合蛋白家族相互作用蛋白组的鉴定和功能研究
- 一类含有与氧化固醇结合蛋白(OSBP)相关的配体结合域的蛋白家族已经在真核生物中被鉴定出来,这些蛋白,被命名为OSBP相关蛋白(OSBP-related proteins (ORPs))或者OSBP样蛋白(OSBP-li...
- 李实骞
- 文献传递
- mPem蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及其抗血清的制备
- Pem cDNA编码一段210个氨基酸的多肽，其第116到175个氨基酸残基序列与同源异型域极为相似。Pem基因的表达具有明显的时间和空间特异性：在鼠胚发育的第6天，即可检测到Pem转录本的表达;第7-8天，Pem表达量...
- 李实骞
- 关键词：蛋白表达蛋白纯化
- 文献传递
