目的从凋亡相关分子Fas(CD95)、Fas相关死亡结构域(Fas associated protein with death domain,FADD)及半胱天冬酶-8(caspase-8)的角度,研究扇贝多肽(polypeptide from Chlamys farreri,PCF)抑制紫外线B(Ultraviolet B,UVB)诱导的人角质形成细胞株(immortalized human keratino,HaCaT)细胞凋亡的作用机制。方法实验设计为6组:对照组、UVB模型组、UVB+5.68mmol·L-1维生素C阳性对照组、UVB+5.69mmol·L-1PCF组、UVB+2.84mmol·L-1PCF组、UVB+1.42mmol·L-1PCF组。以正交实验设计确立UVB诱导的HaCaT细胞凋亡模型;琼脂糖凝胶电泳和荧光染色(Ho-echst33258)分析PCF对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡的影响;琼脂糖凝胶电泳分析caspase-8抑制剂(z-IETD-fmk)对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡的影响;逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测Fas(CD95)mRNA的表达;蛋白质印迹法检测FADD及caspase-8蛋白的表达。结果PCF能明显抑制UVB引起的HaCaT细胞凋亡;z-IETD-fmk对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡有明显抑制作用;1.42～5.69mmol·L-1内的PCF可剂量依赖性抑制UVB引起的Fas,FADD的表达增加及caspase-8的活化。结论PCF可剂量依赖性抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制Fas,FADD的表达及caspase-8的活化有关。
目的从p38MAPK-HSP27通路方面研究扇贝多肽（polypeptide from Chlamys farreri,PCF）抑制中波紫外线（UVB）诱导的HaCaT细胞凋亡的作用机制。方法复制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡模型;实验设计为6组：对照组、UVB模型组、UVB＋5.69mmol.L-1维生素C阳性对照组、UVB＋5.69mmol.L-1PCF组、UVB＋2.84mmol.L-1PCF组、UVB＋1.42mmol.L-1PCF组。PCF预处理30min,荧光染色（Hoechst33258）结合琼脂糖凝胶电泳分析PCF在p38抑制剂（SB203580）存在和不存在两种条件下对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡的影响;蛋白质印迹法检测p38MAPK、HSP27的表达及磷酸化水平的改变,同时分析HSP27在细胞内定位的改变。结果PCF可明显抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡;PCF在1.42~5.69mmol.L-1范围内,可剂量依赖性抑制p38MAPK和HSP27的磷酸化水平,并抑制HSP27由胞质向胞核中的移位。结论PCF通过阻断p38MAPK-HSP27通路来抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制p38MAPK的活化从而阻止HSP27的磷酸化及其细胞内移位有关。
