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表达猪瘟病毒E2蛋白重组PRRS病毒基因工程疫苗的构建方法和应用: 本发明提供了一种表达猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组质粒的构建方法，以及根据该重组质粒构建的基因工程疫苗。基于反向遗传操作平台，根据猪瘟石门株和猪瘟兔化弱毒株C株的E2基因，以及高致病...; 童光志高飞姜一峰曲泽慧周艳君李国新虞凌雪李丽薇杨莘郑浩童武夏天奇

猪繁殖与呼吸综合征重组病毒非必需基因区的鉴定: 为鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制的非必需基因区，本研究在高致病性PRRSV细胞致弱株感染性克隆HuN4-F 112的基础上，在其基因组ORF1b和ORF2a之间插入增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因，并在外...; 曲泽慧高飞李丽薇姜一峰虞凌雪周艳君郑海红童光志

猪繁殖与呼吸综合征病毒重组绿色荧光蛋白全长感染性克隆的构建及初步应用: 自2006年爆发高致病性猪繁殖与呼吸综合征(Highly Pathogenic- Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,HP-PRRS)至今,其病原HP-PRRSV一...; 高飞曲泽慧虞凌雪姜一峰李丽薇周艳君童光志; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒重组绿色荧光蛋白

重组猪瘟病毒C株E2蛋白的猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建及鉴定被引量：11: 2015年; 本研究在猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)弱毒株(Hu N4-F112)感染性克隆的基础上,在其基因组ORF1b和ORF2之间插入(classical swine fever,CSF)疫苗毒C株的E2基因,并在E2基因3'端下游插入PRRSV的转录调控序列6(transcription regulatory sequence 6,TRS6),构建成重组全长感染性克隆(p A-C-E2)。用SwaI线性化该质粒,并体外转录后,将RNA转染MARC-145细胞并传代1次,即可拯救出重组病毒vA-C-E2,在至少20代的传代过程中能够保持遗传稳定性。重组病毒与亲本病毒vHu N4-F112在病毒滴度、空斑形态、蛋白表达等方面没有明显差异;多步生长曲线结果显示,该重组病毒与亲本毒具有相似的生长特性。间接免疫荧光(indirect immunofl uorescence,IFA)结果显示,重组病毒不仅能够表达PRRSV N蛋白,也可以表达猪瘟病毒E2蛋白。本研究结果为研制CSF和PRRS新型基因重组疫苗奠定了坚实物质基础。; 高飞曲泽慧姜一峰李丽薇虞凌雪周艳君杨莘夏天奇郑海红童光志; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪瘟病毒重组病毒 E2蛋白

猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒感染猪肺泡巨噬细胞差异蛋白的筛选及验证: 猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS）是猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRS virus, PRRSV）引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸...; 曲泽慧; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒株细胞膜蛋白差异蛋白蛋白筛选; 文献传递

三株与HP-PRRSV疫苗株高度同源的高致病性猪繁殖和呼吸综合征病毒的分离鉴定: 引言 2012年江苏省某未使用过HP-PRRSV疫苗的猪场保育猪群中出现疑似PRRS症状,导致大部分仔猪死亡。从发病猪血清中分离到三株猪繁殖和呼吸综合征病毒,命名为NT1、NT2和NT3,鉴定分析结果显示三株病毒可能来源...; 姜一峰童武童光志夏天奇周艳君虞凌雪杨莘黄勤锋李丽薇高飞曲泽慧

猪繁殖与呼吸综合征病毒感染肺泡巨噬细胞后差异表达膜蛋白的鉴定与分析被引量：3: 2019年; 猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是危害养猪业发展的重要传染病之一。2006年我国首次爆发高致病性PRRS(highly-pathogenicPRRS,HP-PRRS),与经典的PRRS相比,HP-PRRS发病率和死亡率均显著升高。目前,对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(highly-pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV)引起的高发病率和高死亡率的机制仍不清楚。本研究利用1MOI的EGFP标记的HP-PRRSV毒株HuN4(rHuN4-EGFP)和其体外传代致弱毒株HuN4-F112(rHuN4-F112-EGFP)分别感染肺泡巨噬细胞(pulmonaryalveolarmacrophage,PAM),24h后通过流式细胞术,从FITC通道收集被PRRSV强弱毒感染的PAM,提取膜蛋白进行Shotgun质谱分析。试验最终获得82个在强弱毒感染PAM过程中存在差异表达的膜蛋白。感染rHuN4-EGFP的样品与未感染样品相比,有72个蛋白特异表达;感染rHuN4-F112-EGFP的样品与未感染样品相比,有12个蛋白特异表达。通过GO分析发现,这些蛋白主要参与代谢、生物调节与细胞加工过程,大多数蛋白具有结合、催化活性。进一步在MARC-145细胞上过表达部分差异膜蛋白,发现其中前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9(proprotein coverteases subtilism/kexin 9,PCSK9)能明显抑制PRRSV强毒株和弱毒株的复制,Clusterin、Apoliprotein C-II能促进PRRSV强毒株复制。本研究表明利用Shotgun质谱技术鉴定出的差异表达膜蛋白对PRRSV复制有影响,深入分析PRRSV感染后差异表达的膜蛋白变化将有利于进一步明确其致病机制。; 张玉娇高飞曲泽慧曲泽慧姜一峰虞凌雪周艳君虞凌雪李丽薇; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒肺泡巨噬细胞膜蛋白

猪繁殖与呼吸综合征病毒重组猪瘟C株E2蛋白全长感染性克隆的构建及初步应用: 介绍猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)是一种重要的猪传染病病原,像其他套式病毒目成员一样,PRRSV也采用非连续...; 高飞曲泽慧姜一峰李丽薇虞凌雪周艳君童武李国新童光志

PRRSV强弱毒体外诱导IL-10产生差异的分子基础研究被引量：5: 2017年; 猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染后能够引发机体产生免疫抑制,IL-10在病毒介导的免疫抑制中起重要作用。PRRSV HuN4株感染PAM细胞后能够诱导IL-10高水平表达,而其传代致弱毒株HuN4-F112感染PAM细胞后IL-10表达水平很低。本研究以PRRSV HuN4株及HuN4-F112株为研究对象,对其感染PAM细胞后IL-10上游关键因子表达差异进行研究,揭示诱导IL-10产生差异的分子基础。结果显示,PRRSV强弱毒感染PAM细胞后,强毒HuN4株诱导TLR2与TLR4转录水平显著高于弱毒HuN4-F112株,TLR3、TLR7和TLR9转录水平则无显著差异;强毒HuN4株感染PAM细胞后,其p38磷酸化水平显著高于弱毒HuN4-F112株,而ERK磷酸化水平差异不具备显著统计学意义。结果提示,PRRSV强弱毒株感染PAM细胞诱导IL-10表达水平的差异推测是由于强弱毒诱导p38 MAPK磷酸化水平差异造成的。; 夏天奇姜一峰虞凌雪周艳君杨莘高飞李丽薇曲泽慧童光志; 关键词：PRRSV IL-10 P38 MAPK

猪繁殖与呼吸综合征重组病毒非必需基因区的鉴定被引量：2: 2015年; 为鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制的非必需基因区,本研究在高致病性PRRSV细胞致弱株感染性克隆Hu N4-F112的基础上,在其基因组ORF1b和ORF2a之间插入增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因,并在外源基因3'端下游插入该病毒的转录调控序列6(TRS6),构建PRRSV-EGFP感染性克隆。将其体外转录制备的病毒全长RNA转染Marc-145细胞后,拯救获得了表达EGFP的重组病毒(r Hu N4-F112-EGFP)。将r Hu N4-F112-EGFP在Marc-145细胞中进行连续传代至20代,其外源gfp基因仍能够持续表达,表明该重组病毒具有良好的遗传稳定性。与亲本病毒Hu N4-F112相比,重组病毒在病毒滴度、空斑形态等方面差异不显著;病毒生长曲线的结果显示,重组病毒具有良好的增殖能力。本研究结果表明,在PRRSV的ORF1b和ORF2a基因区中插入外源基因并未影响该病毒体外复制,该非必需基因区的鉴定为进一步研究以PRRSV疫苗为活病毒载体多价重组疫苗的研发奠定基础。; 曲泽慧高飞李丽薇姜一峰虞凌雪周艳君郑海红童光志; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒重组病毒

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曲泽慧

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