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抗凋亡基因bcl-2在原发性胆囊癌中的表达及其临床意义被引量：2: 1998年; 为探讨抗凋亡基因ｂｃｌ２与胆囊肿瘤发生、分化及临床预后的关系，采用免疫组织化学方法对４５例原发性胆囊癌和３９例胆囊腺瘤抗凋亡基因ｂｃｌ２的表达进行了观察。结果显示：ｂｃｌ２在原发性胆囊癌和胆囊腺瘤的表达率分别为７１．１％和８７．２％，两者比较无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；ｂｃｌ２在原发性胆囊癌高、中、低分化型的表达率分别为８２．３％、８２．４％和５０．０％，彼此间存在显著性差异（Ｐ＜０．０１）；ｂｃｌ２表达在原发性胆囊癌临床Ⅰ～Ⅱ期与Ⅲ期的阳性率分别为８１．３％、６５．３％，彼此间无显著性差异，表明ｂｃｌ２表达可能与原发性胆囊癌临床分期无直接关系。; 徐宏勇王文勇阎庆国李开宗; 关键词：原发性胆囊癌凋亡免疫组织化学胆囊肿瘤

一种特异性靶向性淋巴细胞对荷瘤裸鼠的治疗观察被引量：1: 2018年; 目的观察癌胚抗原(CEA)阳性靶向性淋巴细胞对胃癌细胞体内及体外靶向性治疗作用。方法从健康人外周血中分离单个核细胞(PBMC),通过脂质体lipofectamine 2000介导的细胞转染将重组真核表达载体anti-CEA-sc Fv-CD3ζ-pc DNA3.0介导的细胞转染导入PBMC,以获取CEA阳性靶向性淋巴细胞(以下简称靶淋巴细胞);将不含anti-CEA-sc Fv-CD3ζ-pc DNA3.0融合基因片段的pc DNA3.0真核表达载体转染入PBMC,获取的淋巴细胞简称为空载体淋巴细胞。将上述两种淋巴细胞分别与CEA阳性KATOⅢ胃癌细胞和CEA阴性BGC-823胃癌细胞共培养,观察不同靶淋巴细胞与胃癌细胞共培养(24 h或36 h)后的识别情况或其对胃癌细胞凋亡的影响。并将上述已获取的两种淋巴细胞分别通过尾静脉注入荷CEA阳性KATOⅢ胃癌细胞裸鼠和荷CEA阴性BGC-823胃癌细胞裸鼠体内,以观察其对荷胃癌裸鼠肿瘤生长情况的影响。结果 (1)靶淋巴细胞与胃癌细胞共培养24 h时,靶淋巴细胞对KATOⅢ胃癌细胞的识别率为72.3%,淋巴细胞对KATOⅢ胃癌细胞的识别能力较强;其对BGC-823胃癌细胞识别率为7.8%,其对BGC-823胃癌细胞识别能力较弱。(2)当靶淋巴细胞、空载体淋巴细胞分别与KATOⅢ和BGC-823胃癌细胞分别共培养36 h时,靶淋巴细胞+KATOⅢ胃癌细胞组的凋亡率明显高于空载体淋巴细胞+KATOⅢ胃癌细胞组(P=0.032),而靶淋巴细胞+BGC-823胃癌细胞组和空载体淋巴细胞+BGC-823胃癌细胞组的凋亡率比较差异无统计学意义(P=0.118)。(3)在观察40 d内,靶淋巴细胞+KATOⅢ胃癌细胞组的肿瘤体积明显小于空载体淋巴细胞+KATOⅢ胃癌细胞组(F=5.010,P<0.01)和空白对照组(F=7.560,P<0.01);靶淋巴细胞+BGC-823胃癌细胞组与空载体淋巴细胞+BGC-823胃癌细胞组间比较差异无统计学意义(F=1.210,P>0.05)。靶淋巴细胞+KATOⅢ胃癌细胞组的肿瘤体积明显小于靶淋巴细胞+BGC-823胃癌细胞组(F=4.982,P<0.01)。结论 CEA�; 徐宏勇徐立; 关键词：癌胚抗原裸鼠淋巴细胞

雌激素受体和凋亡相关基因bcl-x及bax在人原发性胆囊癌中表达的临床意义被引量：9: 2002年; 目的　研究凋亡相关基因bcl x、bax和雌激素受体 (ER)在原发性胆囊癌 (PGC)中表达的意义。方法　应用免疫组织化学LDP法检测石蜡包埋的PGC标本中ER和凋亡相关基因bcl x及bax的表达。结果　bcl x、bax和ER在 47例PGC中表达阳性率分别为 72 .3 % (3 4/4 7)、66.0 % (3 1/4 7)和 5 9.6% (2 8/4 7) ,在 15例胆囊不典型增生中表达阳性率分别为 40 .0 % (6/15 )、93 .3 % (14 /15 )和 93 .3 % (14 /15 )。bax和ER在PGC中的表达显著低于胆囊不典型增生(P<0 .0 5 ) ,而bcl x则高于后者 (P<0 .0 5 )。ER和bax的表达在高分化型PGC显著高于中、低分化型 (P<0 .0 5 ) ,而bcl x则低于后者 (P<0 .0 5 ) ;ER和bax的表达在男性PGC患者显著低于女性患者 (P<0 .0 1) ,而bcl x的表达则男性显著高于女性 (P<0 .0 5 ) ;ER表达在肿瘤直径 ≤2cm者显著高于 >2cm者 (P<0 .0 5 ) ,而bcl x及bax的表达则差异均无显著性意义 (P >0 .0 5 )。bcl x、bax和ER的表达在PGC的Nevin临床分期Ⅰ～Ⅲ期和Ⅳ～Ⅴ期间差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论　凋亡相关基因ER和bcl x及bax的表达与PGC的分化程度、性别等因素有关。; 徐宏勇李开宗付由池窦科峰阎庆国王映梅李景梦; 关键词：原发性胆囊癌 BCL-X基因 BAX基因雌激素受体

抗TAG-72抗原单链抗体的原核表达及对人肝癌的检测被引量：2: 2010年; 目的探讨抗肿瘤相关糖蛋白-72(TAG-72)单链抗体的原核表达及与4种肝癌细胞系和肝癌组织的特异性亲和力。方法将抗TAG-72单链抗体的cDNA片段插入噬菌粒载体pCANTAB5E,获得噬菌粒载体TAG-72-scFv-pCANTAB5E。将后者转化入E.coliHB2151,经β,D异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达获得抗TAG-72单链抗体蛋白。采用细胞培养及免疫细胞/组织化学方法 ,检测4种肝癌细胞系及石蜡包埋的肝癌组织中TAG-72抗原的表达。结果 SDS-PAGE及Western blot法证实,抗TAG-72单链抗体蛋白分子得以正确表达。抗TAG-72单链抗体可与肝癌细胞系SMMC7721、HepG2和HHCC结合,表明这3种细胞表达了特异性肿瘤抗原;抗TAG-72单链抗体不能结合BEL7402细胞。40例肝癌组织中TAG-72抗原表达阳性率Ⅰ期、Ⅱ～Ⅲ期分别为23.08%(3/13)和62.96%(17/27),在正常肝组织标本中无TAG-72抗原表达,TAG-72抗原在正常肝组织及肝癌组织中表达的差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TAG-72抗原在肝癌细胞或肝癌组织中有特异性表达,有可能成为判断肝癌的标志物。; 徐宏勇徐立李开宗窦科峰; 关键词：肝细胞癌单链抗体原核表达

氯离子通道阻断剂对肺血管内皮细胞氧化损伤的保护作用被引量：1: 2003年; 目的:研究氯离子通道阻断剂在肺血管内皮细胞氧化损伤中的作用。方法:以肉联厂检疫合格的健康小牛为研究对象,过氧化氢(H2O2)诱导体外培养的牛肺动脉内皮细胞损伤,观察Cl-通道阻断剂对受损细胞细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)释放量、三磷酸腺苷(ATP)含量、细胞内钙离子浓度犤Ca2+犦i和DNA降解程度的影响。结果:Cl-通道阻断剂可使受损细胞的细胞活力得到提高,NPPB组和NFA组分别恢复到0.449±0.015和0.535±0.023;LDH释放量下降,分别为(12.4±0.4)%,(6.4±0.6)%。ATP含量分别回升为18.22nmol/mg蛋白质和21.96nmol/mg蛋白质,犤Ca2+犦i下降和DNA降解程度减轻。结论:Cl-通道参与了氧化剂对肺血管内皮细胞损伤的病理过程,Cl-通道阻断剂对肺血管内皮细胞的损伤具有保护作用。; 薛军张丙芳贾敏招明高晏伟付勇徐宏勇梅其炳戚好文; 关键词：氯离子通道阻断剂肺血管内皮细胞乳酸脱氢酶三磷酸腺苷

一种新型胃肠道癌特异性单链抗体的表达及其在胃癌中的检测被引量：1: 2011年; 目的通过原核可溶性表达将我们制备的抗胃肠道肿瘤特异性单链抗体(single chain antibody variable fragment,scFv)基因表达出单链抗体蛋白,初步鉴定并检测其在几种胃癌细胞中的表达。方法通过基因原核表达、Western blot、ELISA等方法检测单链抗体的表达;通过免疫细胞化学方法检测其对几种胃癌细胞的肿瘤相关抗原的识别。结果获得的单链抗体分子量31 KD,与理论分子量基本一致,并通过Western blot、ELISA加以证实;免疫细胞化学方法证明该单链抗体可识别胃癌细胞KATOⅢ、HGC-27、肝癌细胞SMMC7721等细胞,不能识别SGC7901。结论通过对单链抗体的原核表达,明确了单链抗体对胃癌细胞的识别能力,为进一步临床应用提供理论基础。; 徐宏勇徐立李开宗; 关键词：胃肠道癌单链抗体基因表达

嵌合锚定T细胞致癌胚抗原阳性胃癌细胞的凋亡效应被引量：11: 2007年; 目的探讨 CEA 靶向性嵌合锚定 T 细胞的制备方法,并检测其活化功能及诱导 CEA阳性胃癌细胞的杀伤活性。方法分离外周血单个核细胞(PBMC),然后用免疫磁珠分离得到 CD^+_8T 细胞。将重组真核表达载体抗-CEA-scFv-CD3 zeta-pcDNA3.0采用脂质体转染上述 T 细胞以制备CEA 靶向性的嵌合锚定 T 细胞;用流式细胞仪检测其 CD69的表达,以检测嵌合锚定 T 细胞活化功能;将嵌合锚定 T 细胞与胃癌细胞 HGC-27、SGC-7901共培养,检测后者膜联蛋白 V 的表达,分析嵌合锚定 T 细胞致胃癌细胞的凋亡效应。结果将已制备的 CEA 靶向性嵌合锚定 T 细胞培养12 h、24 h后,检测 T 细胞的活化信号 CD69表达率分别为40.5%±3.4%、48.3%±2.8%,证明嵌合锚定 T 细胞具备活化功能。检测与嵌合锚定 T 细胞共培养的胃癌细胞 HGC-27、SGC-7901,凋亡率分别为47.8%±4.2%、18.7%±2.8%,两者之间有统计学意义(P<0.05)。结论 CEA 靶向性嵌合锚定T细胞可特异性识别 CEA 阳性胃癌细胞并促使后者凋亡,这种治疗策略将为胃癌的临床诊治提供一种有希望的途径。; 徐宏勇徐立高建宏李开宗窦科峰; 关键词：胃肿瘤 T淋巴细胞癌胚抗原

肝癌特异性血管抑制疗法的真核表达载体的构建及其表达: 2007年; 目的构建受甲胎蛋白(AFP)增强子和白蛋白(Alb)启动子调控的含有血管抑制素(angiostatin)K5序列的真核表达载体,通过基因转染,将angiostatinK5基因导入肝癌细胞,观察angiostatinK5的表达。方法用RT-PCR法从正常人真核细胞扩增出angiostatinK5基因,将AFP增强子和Alb启动子调控序列定向克隆入真核表达载体pcDNA3.1,并将angiostatinK5cDNA置于上述调控序列之下,从而构建得到重组真核表达载体pcDNA3.1-AFAB-angiostatinK5-His。利用细胞培养、脂质体介导的细胞转染,将angiostatinK5基因导入肝癌细胞。利用SDS-PAGE和Westernblot法检测肝癌细胞中angiostatinK5的表达。结果通过酶切鉴定及DNA测序证实目的真核表达载体pcDNA3.1-AFAB-angiostatinK5-His与预期的结果相同。SDS-PAGE及Westernblot分析证明,angiostatinK5在肝癌细胞中得以表达。结论构建的肝癌特异性重组真核表达载体可增加对AFP阳性肝癌细胞的治疗的特异性,并用于实现对肝癌的特异性血管抑制作用。; 徐宏勇徐立高建宏李开宗窦科峰; 关键词：肝细胞癌血管抑制素

肝细胞癌临床病理学特征与凋亡相关基因bcl-x表达的关系: 2000年; 目的:研究凋亡相关基因bcl-x在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其与HCC临床病理学特征的关系。方法:使用免疫组织化学检测石蜡包埋的HCC标本中凋亡相关基因bcl-x的表达。结果:免疫组织化学检测40例HCC中bcl-x阳性19例;14例肝硬变bcl-x阳性11例;bcl-x在HCC中表达低于肝硬变(P<0.05);bcl-x表达在高中分化型HCC高于低分化型,在AFP≤400μg/L的患者高于AFP>400μg/L的患者,在临床分期Ⅰ～Ⅱ期HCC高于Ⅲ期,其间均有显著性差异(分别为P<0.005,P<0.01,P<0.05)。结论:凋亡相关基因bcl-x在HCC中的表达对肝癌细胞凋亡起调节作用,并与HCC分化程度、临床分期、AFP水平有关。; 徐宏勇李开宗毕红丽付由池窦科峰李景梦; 关键词：肝细胞瘤病理学

癌胚抗原嵌合锚定T细胞对胃癌的体内外抑癌效应观察被引量：3: 2008年; 增强免疫水平对提高胃癌疗效十分重要，我们利用共刺激信号CD3ζ对T细胞的活化作用和抗癌胚抗原（CEA）单链抗体的识别功能，构建真核表达载体。在此基础上制备CEA阳性嵌合锚定T细胞，观察其对CEA阳性胃癌裸鼠的抑癌效应，以期探讨嵌合锚定T细胞对消化道肿瘤的治疗作用。; 徐宏勇徐立李开宗高建宏岳树强王昕欣; 关键词：T细胞胃癌嵌合体内外 CEA阳性

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