张秀敏
- 作品数：93 被引量：245H指数：8
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
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- 增强型绿色荧光蛋白与MAGE-n共表达载体的构建及表达
- 2006年
- 目的构建增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)与人黑色素瘤抗原-n(melanomaantigenn,MAGE-n)真核共表达载体,并在小鼠黑色素瘤B16细胞中进行表达。方法采用酶切法从pLXSN-MAGE-n中得到MAGE-n基因片段,克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP中,构建真核共表达质粒pIRES2-EGFP-MAGE-n。用脂质体法转染小鼠黑色素瘤B16细胞,G418筛选阳性克隆,荧光显微镜检测阳性克隆中EGFP的表达,RT-PCR、Westernblot和免疫组化分别检测阳性克隆中MAGE-nmRNA和蛋白的表达水平。结果从pLXSN-MAGE-n重组质粒中酶切获得一条约950bp的片段,成功构建了真核共表达载体pIRES2-EGFP-MAGE-n,转染B16细胞后筛选得到阳性克隆,可见到EGFP的表达,产生明亮的绿色荧光,RT-PCR检测到MAGE-nmRNA的表达,Westernblot和免疫组化检测到MAGE-n蛋白的表达。结论成功构建了共表达质粒pIRES2-EGFP-MAGE-n,获得了稳定共表达EGFP和MAGE-n的小鼠黑色素瘤B16细胞系,为进一步研究MAGE-n在肿瘤免疫治疗中的作用奠定了基础。
- 黄亚渝童卫马加海董海龙叶菁陈广生张秀敏隋延仿
- 关键词：基因转染绿色荧光蛋白基因表达
- 增强型绿色荧光蛋白与MAGE-n共表达载体的构建及表达
- 目的构建增强型绿色荣光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)与人黑色素瘤抗原-n(melanoma antigen n,MAGE-n)真核共表达载体,并在小鼠黑色素瘤B16...
- 黄亚渝马加海董海龙叶菁陈广生张秀敏隋延仿
- 文献传递
- 外伤儿童父母心理反应的质性研究
- :了解儿童眼外伤后其父母的心理反应,为实施针对性护理干预提供依据,最大程度的取得家长与患儿的配合,提高治疗效果.方法:运用质性研究中的深入访谈法对10 例眼外伤儿童父母进行半结构式的深入访谈,并及时进行记录,对资料进行分...
- 张秀敏
- 肿瘤特异性抗原长循环纳米脂质体的制备及其抗肿瘤免疫效应被引量：2
- 2009年
- 目的:制备包裹基因工程MAGE3/HSP70(简称M3H)融合蛋白的长循环纳米脂质体,研究其生物学特性及抗肿瘤免疫效应。方法:采用薄膜分散-超声法,制备包裹M3H的长循环纳米脂质体(简称NL M3H),观察其形态并测量其粒径,凝胶层析法检测纳米乳剂包裹率、载药量、稳定性及体外释药特性。用NL M3H免疫小鼠,运用酶联免疫斑点法(ELISPOT)和细胞毒性杀伤实验(LDH)检测了NL M3H激活机体细胞免疫反应的状况。结果:成功地制备出平均粒径<100 nm的长循环纳米脂质体,包裹率为38%,载药量0.038 g/L,4℃放置6月后性质稳定。体外释药特性显示有74%的蛋白释放在24 h内完成。ELISPOT和细胞毒性杀伤实验显示NL M3H可以激活机体免疫反应产生针对MAGE3的CTL,特异性杀伤表达MAGE3的肿瘤细胞。结论:NL M3H具有良好的包裹率和载药量,性质稳定且具有缓释作用,可以有效激活机体免疫反应产生针对特异性抗原MAGE3的CTL,是一种很有希望的新型抗肿瘤疫苗。
- 胡沛臻佐建锋傅经国李侠司少艳葛伟张秀敏李增山
- 关键词：脂质体肿瘤特异性抗原肿瘤疫苗
- 用酚-氯仿直接从克隆中提取质粒DNA被引量：2
- 2007年
- 目的:对用酚-氯仿直接从克隆中提取质粒DNA的方法进行了研究。方法:采用不同次数的酚-氯仿抽提,在不同RNaseA作用温度及作用时间下提取了三种质粒。结果:用酚-氯仿抽提2次,RNase A45℃作用8min,质粒纯度(OD260/OD280)为1.85左右、产量大于0.8μg/克隆。结论:本法不但快速,且所提质粒均能满足后续实验如酶切鉴定、测序等方面的需要。对于大批量重组克隆的筛选尤为适合。
- 张晓楠黄勇张延凤张秀敏
- 关键词：克隆质粒DNA
- 超抗原SEA对小鼠脾淋巴细胞活化和增殖的影响被引量：3
- 2007年
- 目的观察超抗原SEA体外对小鼠脾淋巴细胞活化和增殖的影响。方法SEA体外诱导小鼠脾淋巴细胞,测定淋巴细胞、T细胞、B细胞的增殖能力,用流式细胞术检测淋巴细胞膜表型的变化,并测定脾淋巴细胞培养上清中IL-2、IL-4、IL-10、INF-γ的水平。结果不同浓度SEA诱导脾淋巴细胞的增殖能力不同,在1～4d内的增殖变化也不完全一样,SEA浓度为103ng/mL时,脾淋巴细胞的活化和增殖能力最强。SEA对T细胞(无APC)和B细胞的增殖无明显影响。细胞培养上清中IL-2和INF-γ的水平显著升高,IL-4和IL-10含量低。结论在APC递呈作用下,SEA能显著诱导初始CD4+T细胞和CD8+T细胞的活化和增殖,促使TH0细胞向TH1细胞分化,分泌IL-2、IFN-γ等细胞因子。
- 黄杨宋祖军张秀敏葛伟司少艳胡沛臻李侠郝路隋延仿
- 关键词：超抗原超抗原SEA淋巴细胞活化增殖
- 小鼠甲胎蛋白基因顺式调控元件的选择性克隆重组及功能研究被引量：2
- 2006年
- 目的构建并选择肝癌特异性甲胎蛋白(AFP)基因启动元件。方法采用PCR方法从小鼠肝脏克隆AFP基因增强子I、抑制子和启动子,经过不同组合构建了两个真核表达载体:pEGFP-1-EP(含调控序列I:增强子I+启动子)和pEGFP-1-ERP(含调控序列II:增强子I+抑制子+启动子)。通过瞬时转染,采用荧光显微镜观察和流式细胞仪检测所构建调控序列分别在小鼠肝癌细胞株Hepa1-6、黑色素瘤细胞株B16和成纤维细胞株NIH3T3的活性。结果所得AFP基因增强子I、抑制子和启动子序列与Genebank中公布的相关序列一致;荧光显微镜下:pEGFP-1-EP和pEGFP-1-ERP转染Hepa1-6细胞呈强阳性反应,pEGFP-1(空载体)转染Hepa1-6和三种质粒转染的B16、NIH3T3细胞均呈阴性反应;流式细胞仪检测结果显示:pEGFP-1-EP转染Hepa1-6阳性细胞率和平均荧光强度高于pEGFP-1-ERP转染Hepa1-6细胞,两者阳性细胞率和平均荧光强度均高于pEGFP-1转染Hepa1-6细胞;pEGFP-1转染Hepa1-6和三种质粒转染B16、NIH3T3阳性细胞率和平均荧光强度均较低。结论我们所构建小鼠AFP基因调控序列I和调控序列II的启动活性均具有肝癌特异性,且前者高于后者,并选择调控序列I在下一步肝癌特异性基因治疗中使用。
- 司少艳隋延仿李增山曹云新黄亚渝张秀敏
- 关键词：甲胎蛋白顺式调控元件靶向性肝癌
- 肝癌相关肿瘤抗原AFP新的HLA-A2/A24限制性CTL表位的预测及分析
- 2009年
- 目的:预测肝癌肿瘤抗原AFP新的HLA-A2/A24限制性CTL表位,为肝癌CTL表位肽的筛选及鉴定提供依据。方法:选择与肝癌密切相关的肿瘤抗原AFP为研究目标,采用NetCTL1.2Server远程预测系统进行HLA-A2/A24限制性CTL表位预测。结果:共预测出与肝癌相关的肿瘤相关抗原AFP的8个HLA-A2限制性CTL表位,13个HLA-A24限制性CTL表位。结论:应用NetCTL1.2Server法预测CTL表位是一种高效准确的预测方法。所预测的肿瘤抗原AFP的HLA-A2/24限制性CTL表位经实验筛选、鉴定后,可为肝癌治疗性疫苗的制备选择合适的CTL表位提供依据。
- 张秀敏王军伟李增山郭风隋延仿
- 关键词：甲胎蛋白细胞毒性T淋巴细胞表位
- 小鼠肝癌细胞系Hepa16 B7.1瘤苗抗肿瘤免疫的实验研究被引量：3
- 2003年
- 目的 :研究小鼠肝癌细胞系Hepa1 6转染B7.1基因后在体内外抗肿瘤免疫的作用 .方法 :采用脂质体介导的方法用pLXSNB7.1转染PA3 17包装细胞 ,经G4 18筛选出高滴度阳性的细胞克隆 ,以流式细胞仪检测B7.1分子的表达情况 ;用所获病毒上清进一步感染Hepa1 6细胞 ,观察转染B7.1基因后Hepa1 6细胞作为肿瘤疫苗在体内外诱发抗肿瘤免疫的情况 .结果 :Hepa1 6/B7.1高表达B7.1分子 ,其致瘤性明显降低 ,接种小鼠后成瘤率为 2 0 % ,而亲代Hepa1 6细胞成瘤率为 10 0 % .转B7.1基因肿瘤细胞疫苗可抑制肿瘤生长速度 ,延长荷瘤小鼠生存期 ;且转B7.1基因肿瘤细胞疫苗具有保护性免疫反应 .结论 :转B7.
- 杨欣伟隋延仿李增山曲萍武文叶菁董海龙张秀敏
- 关键词：小鼠B7.1癌症疫苗
- 骨髓间充质干细胞的植入条件对急性百草枯中毒肺损伤的影响
- 目的通过不同时间、不同数量骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的植入,观察其对急性百草枯(Paraqua,PQ)中毒肺损伤的保护效果,以明确最佳植入条件。方...
- 黄杨尹文张秀敏王玉同余厚友郝璐刘健
- 关键词：急性百草枯中毒骨髓间充质干细胞肺损伤
- 文献传递
