张海
- 作品数：16 被引量：21H指数：3
- 供职机构：南京医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏高校优势学科建设工程项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- EP2受体介导的前列腺素E_2影响胆管细胞癌细胞HuCCT1细胞间黏附因子-1表达和侵袭的研究
- 2012年
- 目的 :探讨前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)通过EP2受体影响人胆管细胞癌细胞HuCCT1细胞间黏附因子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的表达及癌细胞的侵袭能力。方法:用PGE2、EP1～4四种受体激动剂(17-phenyltrinorProstaglandin E2、Butaprost、Sulprostone和Prostaglandin E1 Alcohol)、EP2受体抑制剂AH6809、腺苷酸环化酶(AC)抑制剂SQ22536和蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89处理HuCCT1细胞,通过Western blot、划痕试验等方法检测ICAM-1的蛋白表达水平以及HuCCT1细胞侵袭能力的变化。结果:PGE2明显提高HuCCT1细胞ICAM-1蛋白的表达水平,5μmol/L PGE2处理HuCCT1细胞24 h后,ICAM-1蛋白表达水平与对照组相比上升了66.17%(P<0.05),并呈浓度依赖性和时间依赖性;5μmol/L PGE2处理HuCCT1细胞24 h后,HuCCT1细胞的侵袭能力较对照组增强了43.29%(P<0.01)。10μmol/L EP1～4受体激动剂处理HuCCT1细胞24 h后,ICAM-1蛋白的表达水平与对照组相比明显增高,其中EP2受体激动剂上升了257.88%(P<0.05),10μmol/L EP2受体激动剂处理HuCCT1细胞24 h后,HuCCT1细胞的侵袭能力较对照组增强了56.99%(P<0.01);10μmol/LEP2受体抑制剂AH6809处理后ICAM-1蛋白的表达水平与PGE2组相比下降了49.14%(P<0.05),细胞侵袭能力下降了52.06%(P<0.01)。25μmol/L AC抑制剂SQ22536、10μmol/L PKA抑制剂H89处理HuCCT1细胞后,ICAM-1蛋白的表达水平较EP2受体激动剂处理组分别下降了72.87%(P<0.05)和80.78%(P<0.05)。结论:PGE2可通过EP2受体激活cAMP-PKA信号转导通路上调HuCCT1细胞ICAM-1的表达,从而促进HuCCT1细胞的侵袭转移。
- 许燕白小明张丽马娟张海汪亦品冷静
- 关键词：胆管细胞癌前列腺素E2CAMP-PKA细胞间黏附因子-1
- PGE_2上调AREG表达促进胆管癌细胞生长的机制研究
- 2012年
- 目的:探讨AREG蛋白在前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)促进人胆管上皮癌细胞CCLP1增殖能力中的作用和机制。方法:用PGE2、4种EP受体激动剂(17-phenyltrinor Prostaglandin E2、Butaprost、Sulprostone和Prostaglandin E1 Alcohol)、EP2受体拮抗剂AH6809、PKA抑制剂H89、AC抑制剂SQ22536处理CCLP1细胞,通过Western blot、WST等实验检测AREG蛋白表达水平以及CCLP1细胞增殖能力的变化。结果:10μmol/L PGE2处理CCLP1细胞后,AREG蛋白的表达水平与对照组相比升高了44.2%(P<0.05);20μmol/L AREG中和抗体Mab262和SAB1402118分别处理1 h后的WST实验结果显示,PGE2诱导的CCLP1细胞增殖可被AREG中和抗体抑制,分别下降了18%、20%(P<0.01)。10μmol/L 4种EP受体激动剂处理CCLP1细胞的结果表明,EP2受体激动剂具有明显促进AREG蛋白表达的作用(表达水平上调了20.1%,P<0.05),而EP1、EP3、EP4无明显促进表达作用;10μmol/L EP2受体拮抗剂AH6809处理CCLP1细胞后,AREG蛋白的表达水平较EP2受体激动剂处理组下调了20%(P<0.05)。用PKA抑制剂H89处理后,AREG蛋白的表达水平和CREB蛋白的磷酸化水平较PGE2处理组分别下降了54.4%、45%(P<0.05);用CMV500-DN-CREB质粒转染CCLP1细胞抑制了CREB的表达和磷酸化后,AREG的表达量较对照组明显下降约65%(P<0.01)。结论:PGE2可通过EP2受体激活cAMP-PKA-CREB信号转导通路上调CCLP1细胞AREG的表达,从而促进CCLP1细胞的增殖。
- 郭燕马娟张海白小明张丽冷静
- 关键词：PGE2胆管细胞癌
- PGE2通过EP2受体激活cAMP-PKA-CREB信号通路上调SnoN的表达而促进CCLP1细胞的增殖被引量：3
- 2011年
- 目的:探讨前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)对人胆管上皮癌细胞CCLP1增殖能力影响的作用机制。方法:用PGE2、EP1～4 4种受体激动剂、AC激动剂Forskolin、PKA抑制剂H89、cAMP拟似物db-cAMP处理CCLP1细胞,通过RT-PCR、Western blot、WST等实验检测SnoN mRNA、SnoN蛋白等表达水平、CREB蛋白磷酸化水平以及CCLP1细胞增殖能力的变化。结果:10μmol/L PGE2处理CCLP1细胞24 h后,SnoN mRNA的表达水平与对照组相比上升了22.5%(P<0.01),SnoN蛋白的表达水平上升了35.6%(P<0.05);10μmol/L EP受体激动剂处理CCLP1细胞24 h后,SnoN蛋白的表达水平与对照组相比明显增高,其中以EP2受体激动剂的作用最明显,上升了64.9%(P<0.05),细胞增殖能力上升了26.5%;10μmol/L AC激动剂Forskolin处理CCLP1细胞24 h后,SnoN蛋白的表达水平及CREB蛋白的磷酸化水平较对照组分别上升了25.1%、71.3%(P<0.05),细胞增殖能力也上升了4.4%(P<0.05);用500μmol/L cAMP拟似物dbcAMP处理CCLP1细胞24 h后,SnoN蛋白的表达水平较对照组上升了90.1%(P<0.05);而PKA抑制剂H89阻断Forskolin的作用后,SnoN蛋白的表达水平和CREB蛋白的磷酸化水平较Forskolin处理组分别下降了9.1%、14.1%,20μmol/L H89处理CCLP1细胞后,细胞增殖能力较对照组下降了45.7%(P<0.05)。结论:PGE2可通过EP2受体激活cAMP-PKA-CREB信号转导通路上调CCLP1细胞SnoN的表达,从而促进CCLP1细胞的增殖。
- 黄文勇张丽束为彭韬张海马娟白小明冷静
- 关键词：胆管上皮癌PGE2SNON
- E-cadherin表达下调致GSK-3β磷酸化失活的分子机制研究被引量：3
- 2012年
- 目的:探讨E-cadherin表达下调在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中诱导GSK-3β磷酸化失活信号通路的调控机制。方法:运用RNA干扰技术建立E-cadherin表达缺失的稳定细胞株。Western blot实验检测稳定株细胞(HepG2-E-cadherin-shRNA)E-cadherin的表达水平以及GSK-3β与Akt的磷酸化水平;用10μmol/L PI3K抑制剂(LY294002)处理HepG2-E-cadherin-shRNA细胞,Western blot检测细胞GSK-3β磷酸化水平,RT-PCR检测HepG2-E-cadherin-shRNA细胞PTEN和Egr-1的mRNA水平,Western blot检测细胞PTEN的蛋白表达水平。结果:Western blot实验结果表明,HepG2-E-cadherin-shRNA稳定株细胞E-cadherin表达水平较空白对照组下调约82.54%,GSK-3β磷酸化水平较空白对照组上升约298.93%,Akt磷酸化水平较空白对照组上升约218.98%;LY294002作用4 h后,GSK-3β磷酸化水平与空白对照组相比下降至48.13%;RT-PCR结果显示,下调HepG2细胞E-cadherin表达水平后,细胞PTEN的mRNA水平下降至76.14%,Egr-1的mRNA水平下降至66.89%,PTEN的蛋白表达水平下降至53.77%。结论:人HCC细胞中E-cadherin抑制性表达导致细胞内GSK-3β磷酸化失活很可能是通过PI3K/Akt的信号通路实现的。
- 马修平张海汪亦品张丽马娟彭韬冷静
- 关键词：E-钙黏蛋白肝细胞肝癌糖原合酶激酶3Β
- PGE2通过cAMP-PKA信号转导通路促进肝癌细胞VEGF表达被引量：2
- 2010年
- 目的:探讨PGE2对人肝癌细胞HuH7VEGF表达的影响及其可能涉及的信号转导通路。方法:用PGE2、EP1-4四种受体激动剂、SQ22536+PGE2、H89+PGE2处理HuH7细胞,Real-time PCR、Western blot、ELISA等检测VEGFmRNA、蛋白表达的变化。结果:10μmol/L PGE2处理HuH7细胞24h后,VEGFmRNA的表达水平上升了264%(P<0.01)、细胞培养上清中VEGF蛋白表达水平上升了24%(P<0.01);10μmol/L PGE2处理HuH7细胞6、12、24h后,胞浆中VEGF蛋白的表达水平分别上升了13.6%、25.7%、39.6%(P<0.01);10μmol/L EP2受体激动剂处理HuH7细胞24h后,胞浆、细胞培养上清中VEGF蛋白表达水平与对照组相比分别上升了32.3%、20.1%(P<0.01),而10μmol/L EP1、EP3、EP4受体激动剂处理HuH7细胞24h后,VEGF的表达水平无明显改变;30μmol/L PKA抑制剂(H89)、500μmol/L腺苷酸环化酶抑制剂(SQ22536)处理HuH7细胞24h后,胞浆VEGF的表达水平分别为对照组的91.6%、89.6%,细胞培养上清中VEGF的表达水平分别为对照组的98.3%、91.9%,与PGE2组相比均有统计学差异(P<0.01)。结论:PGE2可上调HuH7细胞VEGF的表达,其作用机制可能是通过EP2受体激活cAMP-PKA信号转导通路所致。
- 王耀辉马娟束为彭韬张海白小明张丽冷静
- 关键词：PGE2
- COX-2选择性抑制剂valdecoxib对LPS刺激牙龈成纤维细胞生成PGE2的影响被引量：1
- 2010年
- 目的:观察valdecoxib对细菌脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)生成前列腺素(prostaglandin E2,PGE2)水平的变化。方法:采用ELISA法定量检测LPS及valdecoxib处理后对体外培养的HGFs生成PGE2水平的改变。结果:1～100ng/ml LPS处理可明显促进HGFs产生PGE2,其作用效果呈浓度依赖和时间依赖关系;6.25～100μmol/L valdecoxib能够明显抑制LPS促HGFs产生PGE2的作用,且其抑制作用呈剂量依赖性关系。结论:valdecoxib能明显抑制LPS促HGFs产生PGE2的作用。
- 束为白小明张丽张海陈武徐艳
- 关键词：牙龈成纤维细胞细菌脂多糖VALDECOXIB
- PGE_2通过EP1-Snail信号转导通路增强肝癌细胞侵袭性的分子机制研究
- 研究背景： 前列腺素E2(Prostaglandin E2, PGE2)是一种炎性介质,对肿瘤细胞的生长与侵袭能力有显著的促进作用。在肝细胞癌细胞中,PGE2与细胞膜上的四种EP受体(E prostanoid recep...
- 张海
- 关键词：前列腺素SNAIL
- 文献传递
- PGE<sub>2</sub>通过EP1-Snail信号转导通路增强肝癌细胞侵袭性的分子机制研究
- 研究背景：前列腺素E2(Prostaglandin E2, PGE2)是一种炎性介质,对肿瘤细胞的生长与侵袭能力有显著的促进作用。在肝细胞癌细胞中,PGE2与细胞膜上的四种EP受体(E prostanoid recept...
- 张海
- 关键词：前列腺素SNAIL
- PGE_2通过Wnt/β-catenin信号通路促进子宫内膜癌细胞生长的研究被引量：4
- 2011年
- 目的:探讨PGE2对子宫内膜癌细胞生长的促进作用及分子机制。方法:免疫组织化学(EnVision)法检测正常子宫内膜与子宫内膜癌组织中β-catenin的表达;用PGE2、EP2受体激动剂Butaprost、EP2受体拮抗剂AH6809处理子宫内膜癌Ishikawa细胞株,以WST-8细胞增殖实验检测各实验组细胞的增殖率;用Western blot方法分别检测β-catenin、p-β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β在未处理组、PGE2处理组、EP2受体激动剂处理组和EP2受体拮抗剂处理组中的表达;免疫荧光技术检测β-catenin在未处理组和PGE2处理组中表达定位的情况。结果:免疫组织化学法结果显示β-catenin在正常子宫内膜组织中仅存在膜表达,而子宫内膜癌组织中为胞浆和胞核的表达。WST-8实验结果显示:经PGE2、Butaprost和AH6809处理后,细胞的增殖率相对于对照组分别为183.9%、151.9%、72.1%。Western blot实验结果显示:PGE2处理后,β-catenin蛋白表达上升至235.7%而p-β-catenin水平下降至76.8%,p-GSK-3β水平升高至204.3%;EP2受体激动剂+PGE2处理组显示β-catenin蛋白表达上升至279.7%而p-β-catenin水平下降至33.6%,p-GSK-3β水平升高至236.7%;EP2受体拮抗剂+PGE2处理组显示β-catenin蛋白表达上升至185.2%而p-β-catenin水平下降至73.9%,p-GSK-3β水平升高至116.2%。免疫荧光技术探测结果表明:PGE2处理子宫内膜癌细胞后,β-catenin蛋白在癌细胞胞浆中的表达信号明显强于未处理组,并出现明显核内表达信号。结论:PGE2能促进子宫内膜癌细胞的增殖,并伴有β-catenin蛋白的过表达和入核,其机制可能涉及到EP2受体激活和Wnt/β-catenin信号转导通路。
- 张静渊白小明张丽张海马娟冷静
- 关键词：PGE2子宫内膜癌细胞WNT/Β-CATENIN信号转导通路
- 前列腺素E2对人肝癌细胞β1-integrin表达调控及相关机制的研究被引量：1
- 2013年
- 目的:阐明前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)通过EP1受体上调肝癌细胞Huh-7中β1-integrin的表达及其相关的信号转导通路。方法:用PGE2、EP1受体激动剂(17-PT-PGE2)、EP1受体抑制剂SC19220、NF-κB抑制剂PDTC处理Huh-7细胞,通过Western blot、免疫荧光组织化学实验等方法检测β1-integrin蛋白表达水平和NF-κB的活性。结果:5μmol/L的PGE2处理Huh-7细胞24 h后,β1-integrin的表达水平与对照组相比上升了129.48%(P<0.01),5μmol/L EP1受体激动剂17-PT-PGE2处理使细胞β1-integrin的蛋白表达水平升高了216.34%(P<0.01)。10μmol/L的EP1受体抑制剂SC19220处理后β1-integrin表达水平与PGE2组相比下降了34.51%(P<0.05)。免疫荧光组织化学实验显示17-PT-PGE2处理Huh-7细胞120 min后,NF-κB核表达水平明显增加;Western blot实验显示5μmol/L 17-PT-PGE2处理Huh-7细胞120 min后,磷酸化NF-κB-p65上升了209.27%(P<0.01)。NF-κB抑制剂PDTC处理Huh-7细胞后β1-integrin蛋白表达水平与EP1受体激动剂组相比降低了63.49%(P<0.01)。结论:PGE2可通过EP1受体上调Huh-7细胞中β1-integrin的表达,此调节作用可能与NF-κB信号转导通路有关。
- 王洁白小明张海汪亦品张丽马娟冷静
- 关键词：前列腺素E2Β1-INTEGRINNF-ΚB
