张乾义
- 作品数：81 被引量：108H指数：6
- 供职机构：中国兽医药品监察所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项北京市科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 绵羊肺源大肠杆菌cyaA基因缺失对小鼠肺泡巨噬细胞感染的影响被引量：1
- 2023年
- 为研究cyaA基因编码的腺苷酸环化酶(AC)在绵羊肺源大肠杆菌XJ10感染小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S)中的作用,本研究以绵羊肺源大肠杆菌XJ10野毒株(XJ10WT)为对照,通过荧光定量PCR检测XJ10 cyaA基因缺失株(XJ10ΔcyaA)在感染MH-S细胞过程中与黏附侵袭相关的motA、crl、fimH、pap基因的m RNA转录水平,结果显示,与XJ10WT相比,XJ10ΔcyaA在感染MH-S细胞过程中与黏附侵袭相关的motA、crl、fimH、pap基因的m RNA转录水平在感染后0和6 h时均极显著降低(P<0.001),crl和pap基因的m RNA转录水平分别在2 h和12 h时均极显著上调(P<0.001)。进一步通过吉姆萨染色观察XJ10WT和XJ10ΔcyaA黏附MH-S细胞情况,采用细胞和细菌共培养方式分析XJ10ΔcyaA对MH-S细胞的黏附及侵袭能力,并通过CCK-8法分析细菌对MH-S细胞增殖的抑制情况。结果显示,XJ10ΔcyaA和XJ10WT在感染后3 h黏附MH-S细胞的活菌数量达峰值并持续至5 h,随后逐渐下降,在感染后1 h~5 h的时间段内,XJ10ΔcyaA黏附MH-S细胞的活菌数量均极显著低于XJ10WT(P<0.001)。XJ10ΔcyaA和XJ10WT侵袭MH-S细胞的活菌数量随着感染时间的延长逐渐升高,5 h时达到峰值,后持续下降,XJ10ΔcyaA在感染后1 h~10 h侵袭MH-S细胞的活菌数量均显著或极显著低于XJ10WT。在感染MH-S细胞后的3 h~6 h,XJ10ΔcyaA对细胞增殖的抑制率均极显著低于XJ10WT(P<0.001)。上述结果首次表明,cyaA基因表达的AC可以显著上调绵羊肺源E.coli与黏附侵袭相关基因的转录水平,并参与绵羊肺源E.coli对MH-S细胞的黏附与侵袭,抑制MH-S细胞增殖。本研究为绵羊肺源E.coli致病机制的研究奠定了基础。
- 操义恒王子杰王巧梅党士荣张丽媛马雪张乾义周霞黄新张星星吴桐忠钟发钢
- 反向遗传学技术在动物RNA病毒研究中的应用进展
- 2024年
- 反向遗传学操作系统的出现为RNA病毒在体外研究提供了一种重要的技术方法,使在精确位置对病毒基因组进行修饰成为可能。病毒的反向遗传系统通常构建在高拷贝数或低拷贝数的质粒中,通过对基因进行改造或插入外源基因等操作实现对病毒改造的目的,被广泛应用于RNA病毒研究的各个领域,从毒力基因到抗病毒筛选和疫苗开发,为研究病毒蛋白的结构与功能、解析其感染致病机制、新型疫苗构建等提供技术平台。本文就反向遗传操作系统的构建方法、面临的问题和解决思路及在动物RNA病毒中的实际应用进行了综述,为新发和再发动物疫病筛选新型药物靶点、新的基因功能挖掘提供技术支撑。
- 关飞虎宋亚芬温立佳王丽华李丹张辉张乾义王静
- 关键词：RNA病毒病毒拯救感染性克隆
- 利用可视化原位杂交技术研究CSFV在猪脾脏和肺脏的分布情况
- 猪瘟又称经典猪瘟(Classical Swine Fever,CSF),是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起猪的高度致死性、接触性传染病。CSFV是单股正链RNA病毒。RN...
- 孙骏翔孙永芳张玉杰徐璐张乾义赵启祖王琴
- 关键词：原位杂交肺脏脾脏
- 对猪瘟野毒及其疫苗、非洲猪瘟病毒进行鉴别诊断的基因芯片以及检测方法
- 本发明涉及一种探针组合物，其是用于对猪瘟野毒及其疫苗、非洲猪瘟病毒进行鉴别诊断的探针组合物；还涉及相应的基因芯片和试剂盒。
- 张乾义夏应菊王琴赵启祖徐璐邹兴启万建青郎洪武李翠朱元源徐嫄王兆
- 猪瘟病毒抗体ELISA检测国家级能力验证结果与分析被引量：2
- 2020年
- 猪瘟疫苗免疫是我国猪瘟防控的核心,猪瘟病毒抗体ELISA检测是进行免疫效果评价的最常用手段。中国兽医药品监察所国家/OIE猪瘟参考实验室(以下简称:参考实验室)承担了国家认证认可监督管理委员会(以下简称“认监委”)组织的A类能力验证项目“猪瘟诊断检测技术”(CNCA-19-A01),全面考察和评价我国动物疫病检测机构对猪瘟病毒抗体的检测能力。参考实验室负责制备检测样品,并进行随机编号。向每个参试实验室发放4份待检盲样,由其采用ELISA方法对各盲样进行定性判断,并向参考实验室提供检验结果及原始检验报告。出现“不满意”结果的单位可参加补测1次,若补测结果仍为“不满意”,则表明该实验室暂不具备该参数的检测能力。参加本次能力验证猪瘟病毒抗体检测的实验室共有103家,初测满意率为92.23%,初测和补测的总体满意率为100%。此次能力验证结果表明,参加此次能力比对试验的猪瘟检测机构均能够提供正确的检测结果,可以满足猪瘟病毒抗体监测的需求。通过本次能力验证项目查找出了存在的问题,参试单位可以及时纠正错误,进一步提升猪瘟抗体的检测能力。
- 徐璐夏应菊张乾义张雯雯王震李翠邹兴启朱元源徐嫄王兆赵启祖王琴
- 关键词：猪瘟免疫抗体ELISA
- 猪瘟病毒C株表位突变毒株的构建及拯救
- 2024年
- 本研究旨在突变猪瘟病毒C株WH303位点,构建感染性克隆,为猪瘟病毒C株标记疫苗的研究提供候选毒株。本试验以猪瘟病毒C株为研究材料,经重叠PCR方法突变WH303位点,再分别连接至C株和C-flag株全长感染性克隆。体外转录RNA,转染PK15细胞,细胞连续传代完成病毒的拯救和增殖。结果显示,经特异性限制内切酶酶切反应验证,感染性克隆构建成功。经RT-PCR、过氧化物酶单层细胞试验检测,表明病毒成功拯救。病毒细胞传代至17代,检测到病毒,表明病毒可以稳定传代。综上,本研究成功构建了C株WH303突变感染性克隆MC和MC-flag,并成功拯救MC株,得到可以稳定传代的病毒株。
- 刘元杰徐璐朱元源徐嫄张乾义李翠李明夏应菊王琴刘业兵赵启祖邹兴启
- 关键词：猪瘟病毒C株感染性克隆
- 致病性大肠杆菌HPI毒力岛及其水平转移的研究进展被引量：1
- 2023年
- 致病性大肠杆菌作为肠杆菌科成员和人兽共患病病原体之一,在一定条件下可通过多种途径引起人和动物感染并引发不同的大肠杆菌病病型。由于致病性大肠杆菌的血清型和毒力因子众多、耐药趋势严峻、存在生物被膜等因素导致大肠杆菌病的流行趋势复杂且疫苗研发困难,给国内外的畜禽养殖业带来一定的经济损失。高致病性岛(high-pathogenicity island,HPI)最早发现于耶尔森菌,被证实是其毒力表型所必需的基因组岛,为强毒力岛。由于细菌的水平转移机制让该毒力岛在其他肠杆菌科中被广泛检出。其中HPI毒力岛也在致病性大肠杆菌如肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhage Escherichia coli,EHEC)、产志贺毒素大肠杆菌(shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)等中被大量检出,被证实影响致病性大肠杆菌毒力,参与致病性大肠杆菌铁元素摄取和介导宿主免疫反应等。为进一步了解HPI毒力岛在致病性大肠杆菌中的铁元素调控机理、致病特性、介导的细胞免疫反应和水平转移途径,现从HPI毒力岛结构、如何调控耶尔森菌素铁载体、HPI毒力岛致病性及调控细胞免疫反应、HPI毒力岛的水平转移进行概述,以期望为大肠杆菌的致病机理及大肠杆菌病的防控提供帮助。
- 邹宏罗干陈玲杜鹏飞张乾义杨承槐田野
- 关键词：致病性大肠杆菌
- 猪瘟病毒抗原表位的研究进展被引量：3
- 2017年
- 猪瘟病毒（CSFV）是黄病毒科瘟病毒属成员，为单股正链RNA病毒，病毒核酸长约为12．3kb，由5’-非编码区（5’UTrt）、一个开放阅读框（ORF）和3’-非编码区（3’-UTR）构成，开放阅读框编码3898个氨基酸的前体蛋白，在合成过程中被病毒自身编码的或宿主细胞内的蛋白酶水解为4种结构蛋白和8种非结构蛋白，迄今为止发现与抗原相关的蛋白有3种，分别为结构蛋白Erns、E2和非结构蛋白NS3。
- 孙永芳徐璐张乾义王琴
- 关键词：猪瘟病毒抗原表位正链RNA病毒非编码区前体蛋白蛋白酶水解
- 一种抗猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体细胞株及其应用
- 本发明涉及一种抗猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体细胞株及其应用。本发明筛选得到了一株稳定分泌抗猪瘟病毒E2蛋白的杂交瘤细胞株，该细胞株所分泌的单克隆抗体CSFV‑1C8与CSFV的E2蛋白能够发生特异性反应，而与牛病毒性腹泻/...
- 王琴徐璐张乾义赵启祖范学政邹兴启朱元源李翠
- 文献传递
- 禽用活病毒载体疫苗的研究进展
- 2024年
- 疫苗接种是家禽疾病防控最有效的策略之一,随着分子生物学的发展,重组DNA技术被广泛用于许多新型家禽疫苗的构建和生产中。就近年来常用的火鸡疱疹病毒、鸭瘟病毒、传染性喉气管炎病毒、禽痘病毒、新城疫病毒等活病毒载体疫苗研究进展进行综述,分析其临床应用、优缺点等,为开发更加安全有效的家禽活病毒载体疫苗提供参考。
- 王丽华王丽华张兵张兵张乾义杨承槐
- 关键词：家禽病毒载体疫苗
