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一种快速鉴定RNA质量的方法被引量：36: 2002年; 目的　建立一种快速鉴定RNA完整性的方法。方法　在常规琼脂糖凝胶电泳的基础上 ,结合甲醛变性琼脂糖凝胶电泳加以改进而成。结果　提取的总RNA用此方法电泳后可得到 2 8S、18S、5 .8S(5S)三条清晰的rRNA条带。结论　此方法可以达到对RNA完整性进行快速鉴定的目的。; 曹廷兵叶治家巩燕彭家和; 关键词：琼脂糖凝胶电泳法 RNA 分子生物学

人IL-16在大肠杆菌中的融和表达: 2002年; 目的　将人IL 16cDNA克隆至原核融合表达载体PinpointTMXa 3上 ,并进行表达研究。方法　含IL 16cDNA的质粒IL 16/PGEM 3ZF(+ )和PinpointTMXa 3原核融合表达载体经酶切消化、目的DNA片段的分离、重组连接、筛选、序列分析等系列操作 ,获得重组质粒PinpointTMXa IL 16,将质粒PinpointTMXa IL 16转化至大肠杆菌JM10 9,用IPTG诱导表达JM10 9工程菌 ,Westernblotting检测表达产物。结果　IL 16cDNA成功克隆至融合表达载体PinpointTMXa 3 ,Westernblotting检测经诱导含有PinpointTMXa IL 16质粒的JM10 9细菌 ,有IL 16融合蛋白的表达 .结论　成功地表达了IL 16融合蛋白。; 曹廷兵叶治家甘立霞钟小林巩燕彭家和; 关键词：IL-16 克隆大肠杆菌

人PPARγ-LBD cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达纯化被引量：2: 2004年; 从正常中国人的面部脂肪组织分离总RNA,采用RT-PCR获得人的PPARγ-LBD cDNA,然后克隆至原核表达载体pET28a,构建高效原核表达质粒pET28a-PPARγ-LBD,序列分析表明正常中国人的PPARγ-LBD cDNA序列与Gene Bank报道的序列一致。把构建的pET28a-PPARγ-LBD质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG进行诱导表达,Western blot检测表达产物,在相对分子质量34kDa处有特异的蛋白表达条带,表达蛋白以可溶性和包涵体方式存在。在N末端融合6×His纯化标签的表达产物用Ni^(2+)-NTA离子交换树脂进行纯化,纯化蛋白进行SDS-PAGE纯度分析大于90％以上。因此,获得了正常中国人的PPARγ-LBD cDNA序列,并且在E.Coli中成功表达和纯化了PPARγ-LBD蛋白。; 曹廷兵叶治家巩燕彭家和江渝; 关键词：克隆大肠杆菌 RT-PCR 过氧化物酶体增生物激活受体

核受体PPARγ-LBD在原核系统的最适表达及纯化被引量：1: 2003年; 目的　探索诱导PPARγ LBD的最适表达条件 ,提高可溶性PPARγ LBD蛋白在大肠杆菌中的表达量 ,然后用Ni2 + NTA离子交换树脂对表达蛋白进行分离纯化。方法　PPARγ LBD在大肠杆菌BL2 1(DE3 )中进行诱导表达时 ,以不同IPTG浓度、不同温度 ( 3 7℃ ,3 0℃ ,2 0℃ ) ,确定可溶性PPARγ LBD蛋白表达的最适条件 ;然后用Ni2 + NTA离子交换树脂进行分离纯化 ,其产物进行SDS PAGE纯度分析和Westernblotting鉴定。结果　建立了重组蛋白PPARγ LBD的最适诱导条件 ,即 0 .5mmol LIPTG浓度 ,2 0℃诱导 14h其可溶性表达蛋白的量最高 ;纯化产物经SDS PAGE纯度分析大于 90 %以上 ;Westernblotting检测 ,纯化产物为PPARγ LBD目的蛋白 ,其分子质量约 3 4× 10 3。结论　重组蛋白PPARγ LBD在E .coli中进行了成功表达和纯化 ,并且降低温度可提高可溶性蛋白PPARγ LBD表达量达 5 0; 曹廷兵叶治家彭家和巩燕江渝; 关键词：PPARΓ 纯化

孤儿受体与胆固醇及胆汁酸的代谢调节被引量：6: 2002年; 30多年前 ,已经发现体内胆固醇及胆汁酸在转录水平受反馈激活或反馈抑制的调节 ,其机理不清楚 .最近 ,随着孤儿受体LXR基因的克隆及其功能的研究 ,逐步认识到包括LXR在内的几种孤儿受体作为体内胆固醇及胆汁酸的感受器 ,在转录水平调节体内胆固醇及胆汁酸的代谢平衡 .这 4类孤儿受体在胆固醇及其代谢产物与自身代谢平衡之间建立了直接的联系 .综述了 4类孤儿受体的研究进展。; 叶治家巩燕汤玲; 关键词：孤儿受体胆固醇胆汁酸代谢调节

一种用Tripure试剂从冻存组织分离纯化RNA的方法被引量：6: 2003年; 目的　探索一种使提取的冻存组织RNA纯度和完整性均较高的方法。方法　在Tripure分离试剂说明书基础上 ,结合异硫氰酸胍等提取RNA的方法 ,对提取组织RNA的操作步骤进行调整、改进。结果　用此法提取的冻存组织RNA ,经电泳鉴定及进一步RT PCR检测 ,显示RNA的纯度及模板性较好。结论　用此法提取的冻存组织RNA质量稳定可靠。; 曹廷兵彭家和巩燕叶治家江渝; 关键词：纯化 RNA

人PPARγ2 cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达纯化: 2004年; 目的　克隆中国人的PPARγ2cDNA ,并在大肠杆菌中进行表达纯化。方法　从正常人面部脂肪组织分离总RNA ,采用RT PCR及序列测定等方法获得人的PPARγ2cDNA ,然后克隆至原核表达载体pET2 8a ,转化至大肠杆菌BL2 1(DE3 ) ,IPTG进行诱导表达 ;在N末端融合了 6×His纯化标签的表达产物进行Westernblot分析和用Ni2 + NTA离子交换树脂进行纯化 ;纯化蛋白进行SDS PAGE纯度分析。结果　获得了正常中国人的PPARγ2cDNA ,并成功构建了高效原核表达质粒pET2 8a PPARγ2 ;Westernblot结果表明 ,经IPTG诱导 ,在大肠杆菌中表达了分子量为 5 6× 10 3 的PPARγ2目的蛋白 ;表达产物经Ni2 + NTA离子交换树脂纯化 ,PPARγ2蛋白的纯度大于 90 %以上。结论　克隆得到正常中国人PPARγ2cDNA的序列与Genebank报道的序列一致 ,并且在E .coli中成功表达和纯化了PPARγ2蛋白。; 曹廷兵叶治家彭家和巩燕黄刚; 关键词：PPARΓ CDNA 克隆

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巩燕