孔凡红
- 作品数：8 被引量：30H指数：4
- 供职机构：山东省寄生虫病防治研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 蛔虫抗菌肽Cecropin P1基因在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达被引量：3
- 2009年
- 目的设计合成蛔虫抗菌肽基因序列,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,以获得重组蛋白。方法根据大肠埃希菌对编码同种氨基酸不同密码子的偏嗜性,对蛔虫抗菌肽Cecropin P1编码基因进行改造,人工合成目的基因,克隆到原核载体PMD-18T,并转化DH5α感受态菌株;构建重组质粒PET-30a-Cecropin P1,并转化BL21感受态菌株;用双酶切鉴定阳性克隆;含有正确重组质粒的阳性菌株经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳鉴定表达产物。结果PCR扩增及构建的两个重组质粒双酶切鉴定,均获得113bp的基因片段,与预期大小一致;SDS-PAGE电泳分析显示,含有重组质粒PET-30a-Cecropin P1的阳性菌株在IPTG诱导下高效表达了分子质量单位为3.4ku的蛋白质。结论成功构建了重组质粒PET-30a-Cecropin P1,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中以包涵体形式高效表达,为进一步研究蛔虫抗菌肽的生物学活性奠定了基础。
- 崔勇仲维霞孔凡红李瑾魏艳彬黄炳成魏庆宽肖婷赵桂华王洪法
- 关键词：CECROPINP1基因原核表达大肠埃希菌
- 新疆喀什地区利什曼原虫人群感染率调查被引量：5
- 2010年
- 目的了解现阶段新疆喀什地区人群利什曼原虫感染现状,为制定防治规划提供依据。比较PCR和ELISA检测利什曼原虫无症状感染的效能。方法选取2009年9月新疆喀什地区黑热病流行严重的1县3乡四个调查点,在当地疾病预防控制中心的帮助下,采集黑热病患者及其家属和邻居的血液样品,分别编号,每份血样分抗凝血和非抗凝血。采用ELISA方法检测血清中利什曼原虫特异性抗体;用两组PCR引物RV1、RV2和KI3A、KI3B检测血样中利什曼原虫特异DNA片段。结果 PCR法阳性检出率为82.67%,ELISA法阳性检出率为69.33%。结论现阶段新疆喀什地区黑热病感染率仍然颇高,尤其表现在与患者密切接触的的患者家属和邻居;PCR是检测无症状感染较敏感的方法。
- 屈金辉王洪法赵桂华仲维霞凯赛尔窦海平崔勇李瑾孔凡红
- 关键词：黑热病感染率ELISAPCR
- 新疆喀什地区人群利什曼原虫感染检测被引量：1
- 2010年
- 目的了解新疆喀什地区人群利什曼原虫感染现状,为制定防治规划提供依据,并比较PCR和ELISA检测利什曼原虫无症状感染的效能。方法选取2009年9月新疆喀什地区黑热病流行严重的1县3乡4个调查点,采集黑热病患者及其家属和邻居的血液样品(每份血样分抗凝血和非抗凝血),采用ELISA检测血清中利什曼原虫特异性抗体;以RV1、RV2和KI3A、KI3B为引物,用PCR检测血样中利什曼原虫特异DNA片段。结果 PCR检测利什曼原虫特异DNA片段的阳性率为82.67%(62/75),ELISA检测利什曼原虫特异性抗体的阳性率为69.33%(52/75)。结论现阶段新疆喀什地区人群利什曼原虫感染率仍然颇高,尤其表现在与患者密切接触的患者家属和邻居;PCR是检测无症状利什曼原虫感染较敏感的方法 。
- 屈金辉王洪法赵桂华仲维霞凯赛尔窦海平崔勇李瑾孔凡红
- 关键词：黑热病感染率ELISAPCR
- 四川省黑水县利什曼原虫家犬感染率的检测被引量：5
- 2010年
- 目的 了解四川省黑水县利什曼病流行区家犬的利什曼原虫感染现状,并比较PCR和ELISA检测利什曼原虫无症状感染的效能.方法 2009年5月在犬源型利什曼病疫区四川省黑水县随机选取的无内脏利什曼病现症的家犬,采集静脉血,采用ELISA方法检测血清中利什曼原虫特异性抗体,用两组PCR引物RV1、RV2和K13A、K13B检测血样中利什曼原虫特异DNA,并比较两种检测方法的敏感性.结果 PCR法检测抗凝静脉血阳性检出率为30.47%（32/105）,ELISA法检测血清阳性检出率为19.05%（20/105）.结论 四川省黑水县存在大量的利什曼原虫无症状感染犬,PCR是检测无症状感染较敏感的方法.
- 屈金辉赵桂华余清顺王洪法仲维霞陈志荣王淮东西格基崔勇李瑾孔凡红
- 关键词：利什曼病感染率PCRELISA
- 蛔虫抗菌肽cecropin P1在毕赤酵母中的表达及生物学活性检测
- 许多传统的抗生素具有毒副作用且能够诱导耐药菌株的产生，甚至出现了能够耐受几乎所有抗生素的“超级细菌”，致使一些抗生索疗效降低，甚至无效。世界卫生组织在1994年就已宣布，抗生素的使用将成为全世界医疗卫生的一个严重问题[l...
- 孔凡红
- 关键词：天蚕素酵母表达抑菌试验毕赤酵母生物学活性检测
- 文献传递
- 生物抗菌肽毕赤酵母表达系统研究进展被引量：3
- 2009年
- 抗菌肽是具有抗菌活性的一类短肽,广泛存在生物界。抗菌肽具有广谱抗菌活性,有良好的应用前景,使其走向临床的最大的挑战是如何用基因工程技术低成本大量生产抗菌肽产品。抗菌肽天然提取资源有限且提取难度大,难以实现规模化生产;人工合成成本太高,难以实现产业化,目前多局限于研究用途。毕赤酵母表达系统适用于多种生物抗菌肽的表达,多种表达策略的采用可以提高表达量,毕赤酵母表达抗菌肽具有良好的应用前景。本文综述了抗菌肽毕赤酵母表达的研究进展。
- 孔凡红仲维霞崔勇王洪法
- 关键词：抗菌肽毕赤酵母
- 我国不同疫区杜氏利什曼原虫ITS-1片段序列的多态性分析被引量：8
- 2010年
- 目的确定rDNA的内转录间隔区Ⅰ(ITS-1)是否可作为我国杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani)分类的分子遗传标记。方法对我国不同疫区杜氏利什曼原虫分离株(L.d.SD1、L.d.SC7、L.d.XJ3、L.d.JS12)的ITS-1进行PCR扩增、克隆、测序,并分析它们的ITS-1序列多态性。结果 4个不同疫区的利什曼原虫分离株(L.d.SD1、L.d.SC7、L.d.XJ3、L.d.JS12)经PCR均扩增出一条约320bp的ITS-1片段,其序列大小分别为:317bp、323bp、317bp、316bp。序列分析表明:序列之间在多处位点发生了不同类型的突变,存在明显的序列多态性,其中伽师县突变的频率最为频繁,序列多态性最为显著。结论 ITS-1可以作为Leishmania donovani种内分类的分子遗传标记,有利于我国内脏利什慢原虫病的防治、诊断和治疗。
- 赵桂华屈金辉王洪法仲维霞李瑾崔勇孔凡红
- 蛔虫抗菌肽在毕赤酵母中的分泌表达及活性鉴定被引量：7
- 2010年
- 目的在毕赤酵母表达系统中表达蛔虫抗菌肽cecropin P1并检测其生物活性。方法根据毕赤酵母的密码子偏好性,人工设计并合成3条cecropin P1基因寡核苷酸片段,通过PCR扩增得到cecropin P1基因,构建重组载体pMD18-T-CecP1。双酶切pMD18-T-CecP1,将cecropin P1基因克隆到载体pPICZα-A信号序列α-因子之后,构建酵母分泌表达载体pPICZα-A-CecP1,用SacⅠ将其线性化后转化毕赤酵母X-33,采用Zeocin抗性筛选阳性菌株并进行诱导表达,发酵上清进行SDS-PAGE分析,抑菌试验鉴定其抑菌活性。结果获得酵母分泌表达载体pPICZα-A-CecP1。SDS-PAGE证实pPICZα-A-CecP1/X-33甲醇诱导产物的分子质量单位为6.3 ku。表达产物对大肠埃希菌DH5α的生长有抑制作用。结论应用毕赤酵母表达系统能表达cecropin P1。该抗菌肽具有抑菌作用。
- 孔凡红仲维霞王洪法崔勇李瑾赵桂华屈金辉
- 关键词：抗菌肽毕赤酵母蛔虫
