周凯
- 作品数:8 被引量:24H指数:3
- 供职机构:中国农业科学院棉花研究所更多>>
- 发文基金:国家科技支撑计划转基因生物新品种培育专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域:农业科学生物学更多>>
- 陆地棉干旱胁迫响应基因GhGR的克隆及特征分析被引量:12
- 2012年
- 【目的】克隆陆地棉干旱胁迫谷胱甘肽还原酶基因(GhGR),并对其序列进行生物信息学分析和表达分析。【方法】利用RACE和RT-PCR技术克隆陆地棉谷胱甘肽还原酶基因的全长序列,应用生物信息学软件对获得的基因序列及编码的蛋白序列进行分析;通过基因枪转化和实时荧光定量PCR表达对该基因表达部位和表达模式进行分析。【结果】从陆地棉(Gossypium hirsutum L.)中克隆了谷胱甘肽还原酶基因GhGR,cDNA全长1 035 bp,其中,ORF为792 bp,编码263个氨基酸。氨基酸序列比对和同源性分析显示该基因与杨树(XP_002299276.1)、蓖麻(XP_002518118.1)、葡萄(CAN74593.1)同源性最高,分别为90%、91%和91%。系统发育树结果显示,GhGR与葡萄中该蛋白的亲缘关系最近。基因枪转化和实时荧光定量PCR分析表明GhGR定位于洋葱的细胞膜和细胞核膜,并且其表达量受干旱胁迫诱导上调表达。【结论】从陆地棉克隆得到谷胱甘肽还原酶基因GhGR,初步认为该基因对干旱胁迫有一定响应。
- 宋贵方樊伟丽王俊娟王德龙王帅周凯叶武威
- 关键词:陆地棉氧化胁迫干旱胁迫上调表达
- 陆地棉质体转录活性因子基因GhPTAC的克隆及其耐盐性分析
- 2011年
- 为了挖掘新的耐盐基因及调控途径,利用基因芯片技术及抑制性差减文库技术筛选到质体转录活性因子,通过RACE及RT-PCR技术克隆到该基因的cDNA全长,命名为GhPTAC。该cDNA全长1564bp,其中ORF1038bp,推测编码345个氨基酸残基的多肽。生物信息学分析表明GhPTAC为拟南芥PTAC13同源基因,同源性60.6%。编码蛋白为转录活跃的染色体(TAC)的一个组分,参与叶绿体基因组转录终止/抗终止调节。real-timePCR分析结果表明,GhPTAC受盐胁迫诱导上调表达,在耐盐材料中9806中表达水平明显高于盐敏感材料中S9612,这与芯片结果一致。
- 周凯叶武威王俊娟王德龙樊保香王帅
- 关键词:陆地棉盐胁迫PTAC
- 棉花抗逆种质鉴定及其研究
- <正>棉花是我国的主要经济作物。棉花分布区域广,生产周期长,受非生物胁迫和生物胁迫影响大。当前,全球性的干旱、盐碱等逆境已成为农作物生产的主要限制因子。据统计,全世界盐碱地面积达4000万hm2,约占农田灌溉面积的三分之...
- 叶武威张丽娜宋丽艳周凯王俊娟樊保香王德龙阴祖军王帅
- 关键词:棉花抗逆性耐盐基因抗旱基因
- 文献传递
- 陆地棉耐盐相关基因(GhPTAC、GhGnT)克隆及其表达分析
- 土地盐碱化已成为一个世界关注的焦点问题,解决土地盐碱化问题已成为全球性难题。在轻度或部分中度盐碱地上种植比较耐盐的作物,是一种简便、快捷、经济有效的改良措施。棉花作为重要的经济作物和盐碱的先锋作物,已成为盐碱地改良及其相...
- 周凯
- 关键词:酵母表达
- 文献传递
- 陆地棉干旱胁迫相关基因GhTrx的克隆及表达被引量:1
- 2011年
- 采用RACE和RT-PCR技术,克隆了陆地棉干旱胁迫硫氧还蛋白基因,利用荧光定量PCR技术分析该基因在不同组织和不同时期的表达情况.结果表明,陆地棉硫氧还蛋白基因(GhTrx)的cDNA全长1 340 bp,其中ORF 864 bp,推测编码288个氨基酸.该基因编码蛋白与杨树、蓖麻、拟南芥的相似性分别为70%、72%和76%,系统发育树分析显示,GhTrx与蓖麻中该蛋白的亲缘关系最近.RT-PCR分析显示,GhTrx基因表达受干旱胁迫诱导,在干旱诱导下,该基因在抗旱材料中H177中上调表达,在根中的表达量明显高于叶.研究表明,GhTrx基因在干旱胁迫时根部进行大量表达,对抵御外界的干旱威胁起到关键作用,可能对提高陆地棉抗旱性方面具有一定的作用.
- 宋贵方周凯王俊娟樊伟丽王德龙王帅叶武威
- 关键词:陆地棉干旱胁迫上调表达
- 陆地棉(G.hirsutum L.)N-乙酰氨基葡萄糖转移酶基因(GhGnT)的克隆及耐盐性功能分析被引量:3
- 2011年
- 在耐盐相关基因芯片基础上,我们筛选到盐诱导显著上调表达(Ratio>2)的N-乙酰氨基葡糖转移酶基因。选取耐盐材料中9806为材料,根据耐盐性抑制消减文库EST序列设计引物,利用RACE及RT-PCR技术获得该基因cDNA全长1970bp,命名为GhGnT。通过Blast比对,发现该基因与蓖麻乙酰氨基葡萄糖转移酶基因相似性最高,达到82%,认为GhGnT与该基因属于同类基因。利用TargetP1.1和toppred分析,GhGnT蛋白跨线粒体膜。由Real-time分析发现,该基因受盐胁迫诱导上调表达,在耐盐材料中9806的表达水平明显高于盐敏感材料中S9612,与芯片结果一致。有研究发现在小麦中发现糖基转移酶TaUGT1和TaUGT2受盐诱导上调表达,而且转化糖基转移酶亚基STT3a基因的杜氏盐藻耐盐性得到提高。因此,我们认为该基因与耐胁迫密切相关,并推测GhGnT的高表达对提高陆地棉耐盐性有一定作用。GhGnT基因的克隆及分析为以后的功能验证及耐盐种质的创新奠定基础。
- 周凯宋丽艳王俊娟王德龙樊保香王帅叶武威
- 关键词:REAL-TIME耐盐陆地棉
- 棉花耐盐性鉴定及其研究进展
- 棉花作为盐碱地的先锋作物,其耐盐性鉴定及其相关研究已成为国际前沿课题。全世界盐碱地面积约占农田灌溉面积的三分之一以上。我国现有盐渍土面积为34.7×106hm2,且尚有17.33×106hm2左右潜在盐渍化土壤,面积仅次...
- 叶武威王俊娟樊宝相王德龙王帅张丽娜宋丽艳周凯
- 关键词:棉花耐盐性差异表达基因
- 文献传递
- 陆地棉耐盐相关基因GhSAMS的克隆及表达被引量:7
- 2011年
- 为了挖掘棉花耐盐相关基因,根据陆地棉耐盐性抑制消减文库中的一个S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的同源EST设计引物,利用RACE结合RT-PCR技术克隆陆地棉S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的cDNA全长,命名为GhSAMS。该cDNA全长1576bp,ORF为1182bp,编码393个氨基酸的多肽。生物信息学分析表明GhSAMS蛋白与拟南芥、盐地碱蓬、水稻中该蛋白的相似性分别为91%、93%和93%。系统发育树结果显示GhSAMS与盐地碱蓬中该蛋白的亲缘关系最近。Real-time PCR分析结果表明,GhSAMS的表达受盐胁迫诱导,在盐敏感材料中诱导被推迟,而且,该基因表达水平在耐盐材料中9835中明显高于在盐敏感材料中S9612中。构建了原核表达载体pET28-GhSAMS,经IPTG诱导,实现了GhSAMS在大肠杆菌中的表达,为进一步开展GhSAMS的遗传转化工作奠定了有益基础。
- 周凯宋丽艳叶武威王俊娟王德龙樊保香
- 关键词:陆地棉盐胁迫原核表达