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陆地棉干旱胁迫响应基因GhGR的克隆及特征分析被引量：12: 2012年; 【目的】克隆陆地棉干旱胁迫谷胱甘肽还原酶基因(GhGR),并对其序列进行生物信息学分析和表达分析。【方法】利用RACE和RT-PCR技术克隆陆地棉谷胱甘肽还原酶基因的全长序列,应用生物信息学软件对获得的基因序列及编码的蛋白序列进行分析;通过基因枪转化和实时荧光定量PCR表达对该基因表达部位和表达模式进行分析。【结果】从陆地棉(Gossypium hirsutum L.)中克隆了谷胱甘肽还原酶基因GhGR,cDNA全长1 035 bp,其中,ORF为792 bp,编码263个氨基酸。氨基酸序列比对和同源性分析显示该基因与杨树(XP_002299276.1)、蓖麻(XP_002518118.1)、葡萄(CAN74593.1)同源性最高,分别为90%、91%和91%。系统发育树结果显示,GhGR与葡萄中该蛋白的亲缘关系最近。基因枪转化和实时荧光定量PCR分析表明GhGR定位于洋葱的细胞膜和细胞核膜,并且其表达量受干旱胁迫诱导上调表达。【结论】从陆地棉克隆得到谷胱甘肽还原酶基因GhGR,初步认为该基因对干旱胁迫有一定响应。; 宋贵方樊伟丽王俊娟王德龙王帅周凯叶武威; 关键词：陆地棉氧化胁迫干旱胁迫上调表达

陆地棉质体转录活性因子基因GhPTAC的克隆及其耐盐性分析: 2011年; 为了挖掘新的耐盐基因及调控途径,利用基因芯片技术及抑制性差减文库技术筛选到质体转录活性因子,通过RACE及RT-PCR技术克隆到该基因的cDNA全长,命名为GhPTAC。该cDNA全长1564bp,其中ORF1038bp,推测编码345个氨基酸残基的多肽。生物信息学分析表明GhPTAC为拟南芥PTAC13同源基因,同源性60.6%。编码蛋白为转录活跃的染色体(TAC)的一个组分,参与叶绿体基因组转录终止/抗终止调节。real-timePCR分析结果表明,GhPTAC受盐胁迫诱导上调表达,在耐盐材料中9806中表达水平明显高于盐敏感材料中S9612,这与芯片结果一致。; 周凯叶武威王俊娟王德龙樊保香王帅; 关键词：陆地棉盐胁迫 PTAC

棉花抗逆种质鉴定及其研究: ＜正＞棉花是我国的主要经济作物。棉花分布区域广,生产周期长,受非生物胁迫和生物胁迫影响大。当前,全球性的干旱、盐碱等逆境已成为农作物生产的主要限制因子。据统计,全世界盐碱地面积达4000万hm2,约占农田灌溉面积的三分之...; 叶武威张丽娜宋丽艳周凯王俊娟樊保香王德龙阴祖军王帅; 关键词：棉花抗逆性耐盐基因抗旱基因; 文献传递

陆地棉耐盐相关基因（GhPTAC、GhGnT）克隆及其表达分析: 土地盐碱化已成为一个世界关注的焦点问题,解决土地盐碱化问题已成为全球性难题。在轻度或部分中度盐碱地上种植比较耐盐的作物,是一种简便、快捷、经济有效的改良措施。棉花作为重要的经济作物和盐碱的先锋作物,已成为盐碱地改良及其相...; 周凯; 关键词：酵母表达; 文献传递

陆地棉干旱胁迫相关基因GhTrx的克隆及表达被引量：1: 2011年; 采用RACE和RT-PCR技术,克隆了陆地棉干旱胁迫硫氧还蛋白基因,利用荧光定量PCR技术分析该基因在不同组织和不同时期的表达情况.结果表明,陆地棉硫氧还蛋白基因(GhTrx)的cDNA全长1 340 bp,其中ORF 864 bp,推测编码288个氨基酸.该基因编码蛋白与杨树、蓖麻、拟南芥的相似性分别为70%、72%和76%,系统发育树分析显示,GhTrx与蓖麻中该蛋白的亲缘关系最近.RT-PCR分析显示,GhTrx基因表达受干旱胁迫诱导,在干旱诱导下,该基因在抗旱材料中H177中上调表达,在根中的表达量明显高于叶.研究表明,GhTrx基因在干旱胁迫时根部进行大量表达,对抵御外界的干旱威胁起到关键作用,可能对提高陆地棉抗旱性方面具有一定的作用.; 宋贵方周凯王俊娟樊伟丽王德龙王帅叶武威; 关键词：陆地棉干旱胁迫上调表达

陆地棉(G.hirsutum L.)N-乙酰氨基葡萄糖转移酶基因(GhGnT)的克隆及耐盐性功能分析被引量：3: 2011年; 在耐盐相关基因芯片基础上,我们筛选到盐诱导显著上调表达(Ratio>2)的N-乙酰氨基葡糖转移酶基因。选取耐盐材料中9806为材料,根据耐盐性抑制消减文库EST序列设计引物,利用RACE及RT-PCR技术获得该基因cDNA全长1970bp,命名为GhGnT。通过Blast比对,发现该基因与蓖麻乙酰氨基葡萄糖转移酶基因相似性最高,达到82%,认为GhGnT与该基因属于同类基因。利用TargetP1.1和toppred分析,GhGnT蛋白跨线粒体膜。由Real-time分析发现,该基因受盐胁迫诱导上调表达,在耐盐材料中9806的表达水平明显高于盐敏感材料中S9612,与芯片结果一致。有研究发现在小麦中发现糖基转移酶TaUGT1和TaUGT2受盐诱导上调表达,而且转化糖基转移酶亚基STT3a基因的杜氏盐藻耐盐性得到提高。因此,我们认为该基因与耐胁迫密切相关,并推测GhGnT的高表达对提高陆地棉耐盐性有一定作用。GhGnT基因的克隆及分析为以后的功能验证及耐盐种质的创新奠定基础。; 周凯宋丽艳王俊娟王德龙樊保香王帅叶武威; 关键词：REAL-TIME 耐盐陆地棉

棉花耐盐性鉴定及其研究进展: 棉花作为盐碱地的先锋作物,其耐盐性鉴定及其相关研究已成为国际前沿课题。全世界盐碱地面积约占农田灌溉面积的三分之一以上。我国现有盐渍土面积为34.7×106hm2,且尚有17.33×106hm2左右潜在盐渍化土壤,面积仅次...; 叶武威王俊娟樊宝相王德龙王帅张丽娜宋丽艳周凯; 关键词：棉花耐盐性差异表达基因; 文献传递

陆地棉耐盐相关基因GhSAMS的克隆及表达被引量：7: 2011年; 为了挖掘棉花耐盐相关基因,根据陆地棉耐盐性抑制消减文库中的一个S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的同源EST设计引物,利用RACE结合RT-PCR技术克隆陆地棉S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的cDNA全长,命名为GhSAMS。该cDNA全长1576bp,ORF为1182bp,编码393个氨基酸的多肽。生物信息学分析表明GhSAMS蛋白与拟南芥、盐地碱蓬、水稻中该蛋白的相似性分别为91%、93%和93%。系统发育树结果显示GhSAMS与盐地碱蓬中该蛋白的亲缘关系最近。Real-time PCR分析结果表明,GhSAMS的表达受盐胁迫诱导,在盐敏感材料中诱导被推迟,而且,该基因表达水平在耐盐材料中9835中明显高于在盐敏感材料中S9612中。构建了原核表达载体pET28-GhSAMS,经IPTG诱导,实现了GhSAMS在大肠杆菌中的表达,为进一步开展GhSAMS的遗传转化工作奠定了有益基础。; 周凯宋丽艳叶武威王俊娟王德龙樊保香; 关键词：陆地棉盐胁迫原核表达

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周凯