刘良专
- 作品数：58 被引量：144H指数：5
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- 鹦鹉热衣原体CPSIT0580蛋白的克隆表达
- 2018年
- 目的:CPSIT0580蛋白的克隆表达,为进一步研究其结构与功能奠定基础。方法:构建重组质粒pGEX-6P-1/CPSIT0580,经PCR、测序鉴定后将其转化至表达宿主菌E.coli BL21中。结果:构建了重组质粒pGEX-6P-1/CPSIT0580,并在E.coli BL21菌中高效表达出Mr约为28kDa的GST-CPSIT0580目的蛋白,表达了相对分子量(Mr)与预测分子量相近的可溶性蛋白。重组蛋白经GST树脂成功纯化。结论:成功克隆表达了CPSIT0580蛋白,为进一步研究其结构与功能奠定了基础。
- 彭菁伍海英刘良专吴移谋
- 关键词：克隆
- IFN-γ抗鹦鹉热衣原体急性感染保护作用研究被引量：3
- 2017年
- 目的探讨IFN-γ对鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci,Cps)的抗感染作用,为进一步阐明机体抗衣原体免疫机制提供参考数据。方法不同浓度的重组人IFN-γ(5ng/mL、25ng/mL和50ng/mL)作用于感染Cps 6BC的HeLa细胞,48h后计数包涵体数量,并观察包涵体形态的改变。2×10~6 IFUs Cps 6BC滴鼻感染C57BL/6J小鼠,于感染前、后24h腹腔内注射10μg重组鼠IFN-γ,观察小鼠体重、活动状态、生存率等一般指标,分别于感染后5d和10d处死小鼠,取肝、肺组织进行HE染色检测其病理变化;并取感染后5d的肺组织,匀浆,计数其中Cps包涵体数量。结果感染48h后,Cps 6BC在5ng/mL、25ng/mL、50ng/mL重组人IFN-γ处理的HeLa细胞中包涵体数量低于对照组(包涵体数分别为(23.8±5.1)×10~6,(10±3.58)×10~6,(8.0±2.22)×10~6,(43.3±11.05)×10~6,衣原体包涵体形状不规则,体积变小。小鼠实验显示,腹腔注射IFN-γ可明显提高Cps 6BC感染小鼠生存率,并减轻急性临床表现及脏器病变。结论 IFN-γ可发挥早期抗Cps感染的保护作用。
- 唐国芳陈丽丽刘良专王川卢兰芬吴移谋
- 关键词：干扰素-Γ鹦鹉热衣原体急性感染免疫保护
- 环介导等温扩增技术在检测妊娠期女性沙眼衣原体感染中的应用
- 2014年
- 目的:评价酶联免疫吸附试验(ELISA)和环介导等温扩增方法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)在检测妊娠期女性沙眼衣原体(Chlamydiae trachomatis,Ct)感染中的应用价值。方法:根据Genebank公布的Cpn基因序列设计6条LAMP引物(2条内引物,2条外引物,2条环引物),优化并建立LAMP检测体系。收治Ct感染患者80例,进行LAMP法检测Ct DNA,同时用ELISA检测Ct特异性脂多糖抗原。结果:80例患者中,ELISA检测出阳性46例(57.5%),而LAMP检测出阳性56例(70.0%),两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。80例患者中有51例服用过大环内酯类抗生素,ELISA检测出阳性26例(50.9%),而LAMP检测出39例(76.5%),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:LAMP检测泌尿生殖道Ct感染方法简便、快捷,尤其是对服用过抗生素的患儿也具有较高的检出率。
- 刘玮刘良专王华丽何璐
- 关键词：沙眼衣原体环介导等温扩增技术泌尿生殖道感染
- 沙眼衣原体pORF5蛋白激活NALP3炎性复合体和p38MAPK通路诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18
- 目的探讨沙眼衣原体pORF5蛋白对IL-1β和IL-1 8等促炎性细胞因子的诱生作用,并初步分析其分子机制。方法采用分子生物学方法制备、纯化沙眼衣原体pORF5蛋白,用36μg/mL不同浓度刺激THP-1细胞,并于0h、...
- 曹文娟杨晓玉戴文婷粟盛梅陆春雪周洲唐双阳刘良专李忠玉
- 文献传递
- 梅毒螺旋体膜蛋白Tp0971经TLR2/NF-κB诱导巨噬细胞分泌细胞因子被引量：10
- 2017年
- 目的:探讨梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)膜蛋白Tp0971诱导巨噬细胞分泌细胞因子的分子机制。方法:以Tp Nichols株基因组为模板,PCR扩增Tp0971基因并构建重组质粒p ET28a(+)/Tp0971,随后将其转化至表达宿主菌E-.coli Rosseta中,IPTG诱导表达,Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白。经去除Tp0971重组蛋白中的内毒素后,将其刺激巨噬细胞,ELISA检测细胞因子IL-8、IL-1β和IL-6的分泌水平。并采用Toll样受体2(TLR2)中和抗体或TLR2 siRNA,以及核转录因子κB(NF-κB)抑制剂PDTC处理细胞,观察TLR2和NF-κB在介导细胞因子分泌中的作用。结果:成功构建p ET28a(+)/Tp0791原核表达载体,并表达出一相对分子量为29 k D的重组蛋白。ELISA结果显示,0.5~10μg/ml Tp0791能以剂量依赖性方式诱导巨噬细胞分泌IL-8、IL-1β和IL-6。采用siRNA沉默TLR2表达,或用TLR2中和抗体封闭后,IL-8、IL-1β和IL-6分泌明显减少。此外,Tp0791也能增加细胞核中NF-κB p65的表达水平,采用NF-κB抑制剂PDTC处理后,细胞因子分泌水平也显著降低。结论:Tp0971经TLR2/NF-κB可诱导巨噬细胞分泌细胞因子。
- 张跃军蒋传好刘良专蒋最明顾敏吴移谋
- 关键词：梅毒螺旋体膜蛋白细胞因子TOLL样受体2
- 鹦鹉热嗜衣原体蛋白酶样活性因子免疫优势区基因重组蛋白的诊断应用研究被引量：3
- 2011年
- 目的检测鹦鹉热嗜衣原体（Chlamydophila psittaci，c加）蛋白酶样活性因子（cMamydial protease-likeactivity factor，CPAF）免疫优势区基因在E．coli B121中高效表达的产物在印5感染诊断中的应用，为建立印s感染的快速诊断奠定实验基础。方法利用生物信息学软件筛选出CpsCPAF免疫优势区基因序列（CPAFm，A196～A450），设计特异性引物，PCR扩增目的基因，将其克隆入pGEX6p-2载体后转化E．coliB121，利用IPTG诱导表达重组蛋白，Westernblot鉴定重组蛋白。以纯化的重组蛋白作为包被抗原，建立血清学诊断的间接ELISA法；同时用商品ELISA试剂盒与建立的间接ELISA法检测180份可疑Cps感染的病鸭血清标本，将检测结果进一步用Westernblot方法验证。结果构建原核重组质粒pGEX6p-2／Cps CPAFm，表达相对分子质量约为54×10^3的目的蛋白产物。以纯化的重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA法检测Cps参考血清，其阴、阳性符合率均为100％；与肺炎嗜衣原体（C．pneu-moniae，印n）、沙眼衣原体（C．trachomatis，Ct）无交叉反应。对180份可疑病鸭血清标本进行检测，与商品Birds Chlamydia Psittaci IgG ELISA试剂盒比较，以Westernblot方法作对照，自建的ELISA法符合率均为100％，Birds Chlamydia Psittaci IgG ELISA Kit符合率为77．5％～95．0％。结论以Cps CPAF免疫优势区（A196～A450）作为诊断抗原，建立血清学诊断的间接ELISA法具有较好的临床诊断价值。
- 王绍胜吴移谋陈丽丽曾焱华刘良专
- 关键词：免疫活性血清学诊断
- 鼠衣原体在不同遗传背景小鼠感染模型中病变差异性与主要炎症细胞动态变化的研究
- 周洲陈浩刘良专邹燕陈丽丽李忠玉吴移谋
- 分层次开放实验室,结合案例导入教学,提升独立学院医学生实践创新能力
- 2015年
- 独立学院医学人才培养模式应注重学生实践技能与创新能力的系统培养,这也是我国医学高等教育改革的重要发展趋势。通过分析我国独立学院医学生人才培养现状,进一步拓展省级示范实验室教学职能,分层次开放实验室,优化实验教学内容,改革传统实验教学方法,调动学生自主学习积极性,切实提升独立学院医学生实践创新能力。
- 唐双阳李乐李忠玉余敏君刘良专王可耕
- 关键词：医学生
- CPSIT＿0271的定位、表达时相及其诱导THP-1细胞产生促炎症因子被引量：1
- 2013年
- 目的：研究鹦鹉热嗜衣原体（ Chlamydophila psittaci，Cps） CPSIT＿0271蛋白的定位和表达时相，及其重组蛋白对人单核细胞（ THP-1）产生促炎症因子的诱生作用。方法原核表达、纯化GST-CPSIT＿0271重组蛋白，免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，ELISA分析血清抗体滴度。间接免疫荧光法初步观察内源性CPSIT＿0271的定位，并通过Western blot 分析CPSIT＿0271在Cps感染HeLa细胞8 h、18 h、24 h、36 h和48 h后的表达情况。用不同浓度GST-CPSIT＿0271刺激THP-1细胞，ELISA检测IL-6、IL-1β和TNF-α水平。结果在Cps感染的HeLa细胞中，CPSIT＿0271分布于衣原体包涵体内。 CPSIT＿0271在Cps感染HeLa细胞后36 h开始表达，在48 h时表达量增加。 GST-CPSIT＿0271免疫小鼠，产生较强的免疫应答，小鼠血清特异性抗体效价为1∶16000。当GST-CPSIT＿0271蛋白浓度为2～5μg/ml时，刺激THP-1细胞产生IL-6、IL-1β和TNF-α的水平与CPSIT＿0271呈明显的剂量依赖关系。5μg/ml的GST-CPSIT＿0271蛋白刺激THP-1细胞，TNF-α和IL-1β在24 h时达到高峰，IL-6在48 h时达到高峰。结论 CPSIT＿0271蛋白分布于包涵体内，CPSIT＿0271基因可能为Cps晚期表达基因；GST-CPSIT＿0271具有较好的免疫原性，并能促进THP-1细胞分泌促炎症因子IL-6、TNF-α和IL-1β。
- 黎知青刘良专伍海英彭菁陈丽丽贺庆芝吴移谋
- 关键词：细胞定位促炎症因子
- 肺炎嗜衣原体热休克蛋白10经ERK、NF-κB信号通路调控HUVEC分泌炎症因子
- 目的探讨ERK与NF-κB信号通路在肺炎嗜衣原体(Chlamydophila pneumoniae,Cpn)热休克蛋白10(Heatshock protein,HSP10)诱导HUVEC细胞分泌炎症因子中的作用。方法以制...
- 周洲李忠玉陈丽丽刘良专吴移谋
- 关键词：肺炎嗜衣原体热休克蛋白10ERKNF-ΚB炎症因子
