刘小群
- 作品数：6 被引量：34H指数：3
- 供职机构：复旦大学附属金山医院肿瘤科更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- siRNA沉默ATM增强CpG ODN 7909对肺癌A549细胞的放射增敏作用被引量：1
- 2013年
- 目的:研究siRNA沉默毛细血管扩张—共济失调突变(atxia-telangiectasia mutated,ATM)基因的表达增强胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡脱氧核苷酸(cytosine-phophate-guanine oligodeoxynucleotide,CpG ODN)7909对人非小细胞肺癌A549细胞的放射增敏作用。方法:将ATM-siRNA转染至A549细胞中,Western blotting检测A549细胞中ATM蛋白的表达。A549细胞随机分为6组:对照组、CpG组、X射线(IR)组、CpG+IR组、ATM-siRNA+CpG+IR组和NC-siRNA+CpG+IR组,克隆形成分析法检测各组细胞克隆形成率,Graphpad prism 5.0软件进行单击多靶模型和L-Q线性模型拟合辐射后A549细胞的生存曲线,以D0、Dq、N、α/β及SF2等参数分析A549细胞辐射损伤修复能力,流式细胞术检测A549细胞的凋亡。结果:ATM-siRNA转染可明显抑制A549细胞中ATM蛋白的表达(P<0.01)。X射线可剂量依赖性抑制A549细胞的克隆形成能力(P<0.05);且CpG+IR组A549细胞的克隆形成能力进一步降低(P<0.01);ATM-siRNA转染后,CpG处理的A549细胞克隆形成能力再度降低[10 Gy时,(0.05±0.00)%vs(0.71±0.00)%,P<0.01]。辐射损伤剂量生存曲线结果显示,ATM-siRNA转染后,ATM-siRNA+CpG+IR组较CpG+IR组A549细胞的α/β值明显增大(1.48 vs 0.97,P<0.05),对放射损伤修复能力明显减弱。CpG+IR组较IR组细胞凋亡率显著升高[(9.18±0.16)%vs(6.56±0.33)%,P<0.01];ATM-siRNA+CpG+IR组A549细胞凋亡率进一步升高[(10.45±0.40)%vs(9.18±0.16)%,P<0.05]。结论:siRNA沉默ATM的表达可增强CpGODN 7909对A549细胞的放射增敏作用,ATM可作为肺癌治疗的潜在靶点。
- 袁素娟乔田奎刘小群陈伟
- 关键词：ATM
- 靶向沉默ATM基因对人肺腺癌A549细胞放射敏感性影响被引量：5
- 2014年
- 目的探讨质粒介导RNA干扰抑制ATM基因表达对人肺腺癌A549细胞放射敏感性影响。方法构建ATM基因小分子干扰RNA（siRNA）真核表达质粒pSilencer2．1-ATM并转染A。细胞（阳性组），转染pSilencer2．1-nonspecific质粒为阴性组，未转染为对照组。RT—PCR和蛋白印迹法分别检测ATM基因mRNA及蛋白表达，细胞克隆形成实验观察细胞放射敏感性变化，流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。结果成功构建了ATM基因siRNA真核表达质粒。RT—PCR和蛋白印迹法证实阳性组细胞ATM基因表达下调，阳性组、阴性组的放射增敏比（D0值比）分别为1．50、1．01，流式细胞仪检测显示阳性组G1、G2＋M期细胞比例减少[51．27％：61．85％（P=0．012）、6．34％：10．91％（P=0．008）]，细胞凋亡率则高于对照组、阴性组[49．31％：13．58％（P=0．000）、49．31％：13．17％（P=0．000）]。结论ATM基因沉默可增加A549细胞的放射敏感性，其机制可能与细胞周期变化及凋亡有关。
- 刘小群乔田奎
- 关键词：肺腺癌
- ATM与肿瘤的关系研究进展被引量：11
- 2011年
- 共济失调毛细血管扩张征突变基因(ataxia-telangiectasia mutated gene,ATM gene)属于一种DNA修复基因,定位于染色体11q22-q23。ATM基因的胚系突变或基因多态性导致个体对多种肿瘤易感,包括淋巴样肿瘤和实体瘤。ATM基因编码产物——ATM蛋白属于一种自动磷酸化蛋白激酶,在DNA损伤修复、细胞周期阻滞和细胞凋亡过程中发挥着关键的调控作用。体外实验发现,许多肿瘤的发生和治疗过程涉及了ATM蛋白表达或活性的改变,提示ATM基因或许能成为肿瘤治疗过程中一个新的潜在作用靶点。
- 刘小群乔田奎
- 关键词：肿瘤DNA损伤细胞周期凋亡
- 厄洛替尼对人肺腺癌A549细胞的放射增敏作用被引量：3
- 2013年
- 目的探讨厄洛替尼对人肺腺癌A549细胞的放射增敏作用及机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定厄洛替尼对细胞的抑制作用，计算半数抑制浓度（IC50）。采用细胞克隆形成实验分析厄洛替尼对A549细胞的放射增敏作用。采用流式细胞仪分析厄洛替尼对细胞周期分布和凋亡的影响。结果厄洛替尼作用48h后，A549细胞生长受到抑制，且细胞抑制率随药物浓度的升高而增加，IC50为19．26μmol／L。厄洛替尼与不同剂量的X线照射A549细胞后，与单纯照射组比较，厄洛替尼照射组的细胞存活分数（SF）下降，而且随着厄洛替尼作用时间的延长和照射剂量的增加，SF明显下降。单纯照射组、厄洛替尼24h照射组和厄洛替尼48h照射组的平均致死剂量（D0）分别为3．01、2．58和2．45Gy，准域剂量（Dq）分别为2．16、1．94和1．61Gy；厄洛替尼24h照射组和厄洛替尼48h照射组的放射增敏比（SERD0）分别为1．17和1．23。流式细胞仪检测结果显示，厄洛替尼作用A549细胞24和48h后，q／M期细胞比例增加，细胞凋亡率升高，与对照组比较，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论厄洛替尼对肺腺癌A549细胞有抑制作用和放射增敏作用，其放射增敏作用机制可能与抑制细胞亚致死损伤修复、阻滞细胞于G2／M期和诱导细胞凋亡有关。
- 刘小群乔田奎
- 关键词：肺肿瘤厄洛替尼放射增敏细胞周期
- 含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸7909对X射线诱导人肺腺癌A549细胞周期阻滞和凋亡的影响与ATM激酶的关系被引量：3
- 2012年
- 目的探讨含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸（unmethylatedcytosine-phosphate．guanineoligodeo。ynucleotides，CpGODN）7909对X射线诱导人肺腺癌A549细胞周期阻滞和凋亡的影响及毛细血管扩张共济失调突变（ATM）激酶磷酸化在这一过程中的作用。方法人肺腺癌A549细胞用随机表法分为5组，对照组、CpG组、单纯照射组、CpG＋x射线组和ATMsiRNA＋CpG＋x射线组。采用集落形成法观察细胞存活率。流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。Westernblot检测ATM激酶及其下游底物周期检测点激酶2（checkpointkinase2，Chk2）和P53蛋白的表达。结果A549细胞经CpGODN7909预处理后，在x射线照射下生长缓慢，集落形成明显减少，与单纯照射组比较，差异有统计学意义（t=13．41，P〈0．05）；增强了X射线诱导的人肺腺癌A549细胞G2／M期阻滞和凋亡，与单纯照射组比较，差异有统计学意义（t=17．32和7．71，P〈0．05）；明显增加了X射线诱导的ATM、Chk2及P53蛋白磷酸化水平；小分子干扰RNA暂时性抑制ATM的表达后，CpGODN7909对x射线诱导G2／M期阻滞及凋亡的作用减弱，与CpG＋X射线组比较，差异有统计学意义（f=26．84和2．98，P〈0．05）。结论CpGODN7909在体外增强了X射线诱导的人肺腺癌A549细胞ATM激酶磷酸化，这一作用可能参与G2／M期阻滞和凋亡的调节。
- 刘小群乔田奎陈伟袁素娟
- 关键词：X射线凋亡
- ATM蛋白激酶依赖性信号转导通路研究进展被引量：12
- 2012年
- 毛细血管扩张共济失调突变基因(ataxia-telangiectasia mutated gene,ATM基因)变异导致遗传性毛细血管扩张共济失调症(ataxia-telangiectasia,A-T)。ATM基因编码产物———ATM蛋白激酶主要分布于增殖细胞核中。根据ATM蛋白激酶在细胞周期中作用底物如检测点激酶2(checkpoint kinase 2,Chk2)、奈梅亨断裂综合症蛋白1(Nijmegen breakage syndrome protein 1,Nbs1)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38mitogen activatedprotein kinase,p38MAPK)等不同,形成了不同的ATM蛋白激酶依赖性信号转导通路。最近研究发现,ATM蛋白激酶依赖性信号转导通路参与细胞周期多个检测点的调控,在DNA双链断裂(DNA double-strand break,DSB)损伤修复过程中发挥着至关重要的作用,暗示了ATM蛋白激酶或将成为恶性肿瘤放射治疗增敏新靶点。
- 刘小群乔田奎陈伟袁袁素娟
- 关键词：信号
