余爽
- 作品数：14 被引量：26H指数：2
- 供职机构：首都医科大学基础医学院神经科学研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 胚胎皮层神经元的迁移及其相关分子机制被引量：1
- 2005年
- 在中枢神经系统发育中,皮层神经元的迁移是一个复杂而又被精确调控的过程.胚胎皮层神经元主要有两种迁移方式:来源于背侧端脑的锥体神经元主要采用放射状迁移;而来源于腹侧端脑的中间神经元则采用切线方向迁移进入皮层.其中,在皮层发育早期,锥体神经元直接以胞体位移运动向表面迁移;而在发育晚期,皮层相对较厚时,锥体神经元需借助放射状胶质细胞突起的导向作用迁移到目的部位.
- 余爽徐群渊
- 关键词：皮层神经元
- 免疫磁珠体外纯化人胎脑中CD133阳性干细胞的实验研究被引量：13
- 2004年
- 为了探讨免疫磁珠体外纯化人胎儿脑内 CD13 3阳性细胞的可行性 ,本研究取人胎儿脑室下区并制备单细胞悬液 ,采用磁珠分选法选择 CD13 3阳性细胞群 ,台盼蓝染色观察活力并采用流式细胞仪鉴定纯化前后 CD13 3的阳性表达率。结果显示 ,分选后所得细胞纯度为 ( 85 .5 7± 1.66) % ,回收率为 ( 62 .3± 18) % ,纯化前后细胞活力无显著性差异 ( P>0 .0 5 )。结论 :联合应用CD13 3表面标志及免疫磁珠分选系统可有效地从人胎儿脑组织中直接分离得到高纯度的 CD13 3阳性干细胞 。
- 余爽张京钟张海燕赵春礼徐群渊
- 关键词：免疫磁珠纯化人胎儿CD133细胞活力
- 人Nurr1基因克隆及其在真核细胞中的表达
- 2005年
- 为探讨Nurr1基因治疗Parkinson病的可行性,本研究克隆了中国人核相关受体1(nuclearrelatedreceptor1,Nurr1)基因,并重组携带Nurr1基因的真核表达载体,为该研究提供分子生物学基础。实验采用反转录聚合酶链式反应(RTPCR)方法从人胎儿脑中获取Nurr1cDNA,将其克隆至pGEMTEasy载体中;测序鉴定后,重组携带Nurr1基因的逆转录病毒载体pLNCX2Nurr1;通过脂质体将重组载体转染PT67包装细胞系,用病毒上清感染NIH3T3细胞系以检测病毒滴度。结果发现,RTPCR扩增得到人Nurr1cDNA片段,序列与GenBank登录的序列一致;将Nurr1基因亚克隆至逆转录病毒载体得到插入方向正确的重组载体pLNCX2Nurr1,病毒上清滴度为2×105CFU/ml。结果表明本实验获得人Nurr1基因cDNA序列,检测到Nurr1基因在真核细胞中表达,并得到较高滴度的病毒上清。
- 张京钟余爽段德义赵春礼徐群渊
- 关键词：基因克隆帕金森病基因治疗
- 基因表达谱芯片技术对人胎儿神经前体细胞与神经元之间基因差异表达的初步研究
- 该研究采用了不同的纯化方式分别获得性质相对均一的CDl33阳性神经前体细胞及成熟神经元,并利用基因表达谱芯片技术分别研究了神经前体细胞与神经元之间的基因差异表达,研究结果主要如下:1.人胎儿脑室区CD133阳性神经前体细...
- 余爽
- 关键词：神经前体细胞神经元
- 文献传递
- 帕金森病基因治疗的理论:VMAT_2基因的表达及其对MN9D细胞多巴胺代谢的影响被引量：1
- 2004年
- 目的:获得人Ⅱ型囊泡单胺转运体(vesicularmonoaminetransporter-2,VMAT2)基因,转染至MN9D细胞,通过检测细胞内外单胺类递质含量的变化评价VMAT2基因促进单胺类递质循环利用的效应。方法:从人胎脑中提取总RNA,RT-PCR方法扩增目的cDNA片段并将其重组于pGEM-Easy-T载体中,进行全序列测定。重组真核表达载体pBK-RSV-VMAT2,转染MN9D细胞,免疫细胞化学检测VMAT2的表达,HPLC检测细胞内外单胺类递质含量的变化。结果:RT-PCR扩增到1637bp的带有Kozak序列的cDNA片段。原位杂交证实pAAV-VMAT2能在COS7细胞表达;免疫组化证实转基因的MN9D细胞(实验组)VMAT2免疫着色明显高于对照组。HPLC结果表明实验组中细胞内外的多巴胺含量分别升高至(227.2±20.8)%和(302.6±15.7)%(P<0.01),而细胞外HVA、DOPAC分别降低至(48.1±5.3)%和(55.7±4.9)%(P<0.05),细胞内HVA,DOPAC分别升高至(332.1±28.2)%和(1176.8±82.5)%(P<0.01)。结论:克隆了VMAT2cDNA片断,可在真核细胞中表达。该基因的过表达可促进多巴胺的循环利用,有望用于帕金森病的基因治疗。
- 张京钟余爽赵春礼段春礼徐群渊
- 关键词：帕金森病基因治疗基因表达多巴胺代谢
- 人VMAT_2基因RNA探针制备及其在COS-7细胞中的表达
- 2004年
- 本研究目的在于制备人 型囊泡单胺转运体 (VMAT2 )基因的反义和正义 RNA探针 ,以检测 VMAT2 基因能否在真核细胞表达。从携带 p GEM-Easy-T-VMAT2 克隆载体中通过限制性酶切反应得到 VMAT2 基因 ,与 p BK-RSV载体重组构建真核表达载体 p BK-RSV-VMAT2 ;分别以 T7和 T3聚合酶制备反义和正义探针 ,通过斑点杂交检测探针浓度。转染猴肾成纤维细胞COS-7,原位杂交及免疫荧光细胞化学检测 VMAT2 的表达。结果证明 ,反义和正义探针浓度分别为 80 ng/μl及 12 0 ng/μl;原位杂交及免疫组织化学证实重组的真核表达载体 p BK-RSV-VMAT2 在 COS-7的表达阳性率为 (10 .6± 1.2 ) %。本研究结果表明获得 VMAT2 基因反义链及正义链 RNA探针 ,并检测到 VMAT2
- 张京钟余爽赵春礼段德义徐群渊
- 关键词：RNA探针COS-7细胞帕金森病
- Ⅱ型囊泡单胺转运体基因过表达对多巴胺含量影响的体外研究被引量：2
- 2004年
- 目的 获得人Ⅱ型囊泡单胺转运体 (VMAT2 )基因 ,转染至MN9D细胞 ,通过检测细胞内外单胺类递质含量的变化评价VMAT2 基因促进单胺类递质循环利用的效应。 方法 从人胎脑中提取总RNA ,RT PCR方法扩增目的cDNA片段并将其重组于pGEM Easy T载体中 ,进行全序列测定。重组真核表达载体pBK RSV VMAT2 ,转染MN9D细胞 ,免疫细胞化学检测VMAT2 的表达 ,HPLC检测细胞内外单胺类递质含量的变化。 结果 RT PCR扩增到 16 37bp的带有Kozak序列的cDNA片段。原位杂交证实pAAV VMAT2 能在COS7细胞表达 ;免疫组织化学证实转基因的MN9D细胞 (实验组 )VMAT2 免疫着色明显高于对照组。高效液相色谱结果表明 ,实验组中细胞内外的多巴胺含量均升高 (P <0 0 1) ,细胞外HVA、DOPAC降低 (P <0 0 5 ) ,而胞内升高 (P <0 0 1)。 结论 克隆的VMAT2cDNA片段可在真核细胞中表达 ,该基因的过表达可促进多巴胺的循环利用 ,有望用于帕金森病的基因治疗。
- 张京钟余爽赵春礼段春礼徐群渊
- 关键词：基因表达帕金森病人胎脑
- 基因治疗帕金森病的分子生物学研究:神经营养因子Neurturin基因克隆及其真核表达
- 2005年
- 目的:克隆中国人Neurturin基因,重组携带Neurturin基因的真核表达载体,为研究Neurturin基因治疗帕金森病提供分子生物学基础。方法:实验于2003-03/2004-05在北京市神经再生修复研究重点实验室完成。采用RT-PCR方法从人胎儿脑中获取NeurturincDNA,将其克隆至pGEM-Easy-T载体中。测序鉴定后,重组携带Neurturin基因的反转录病毒载体pLPCX-Neurturin;通过脂质体将重组载体转染PT67包装细胞系,用病毒上清感染NIH3T3细胞系以检测病毒滴度。结果:RT-PCR扩增到人NeurturincDNA片段,序列与Genebank登录的序列一致;将Neurturin基因亚克隆至反转录病毒载体得到插入方向正确的重组载体pLPCX-Neurturin,病毒上清滴度为5×104CFU/mL。结论:获得人Neurturin基因cDNA序列,检测到Neurturin基因在真核细胞中表达,并得到较高滴度的病毒上清。
- 张京钟余爽段德义赵春礼徐群渊
- 关键词：帕金森病
- 人Ⅱ型囊泡单胺转运体基因的克隆被引量：2
- 2002年
- 目的 为获得人Ⅱ型囊泡单胺转运体 (vesicularmonominetransporter 2VMAT2 )以治疗帕金森病 ,克隆添加Kozak序列的VMAT2cDNA ,用于真核细胞表达。方法 从人胎脑中提取总RNA ,逆转录成cDNA ,设计一对引物用PCR方法扩增目的cDNA片段并将其重组于 pGEM Easy T载体中 ,酶切鉴定插入片段后 ,进行全序列测定。结果 RT PCR扩增到 16 37bp的带有Kozak序列的cDNA片段。结论 克隆人VMAT2cDNA片断 。
- 张京钟余爽段德义苏玉金杨慧徐群渊
- 关键词：基因克隆帕金森病
- 胚胎皮层神经元的发育及其相关分子机制被引量：6
- 2005年
- 在胚胎皮层的发育过程中,神经元及胶质细胞先后由同一先祖细胞分化而来.其中,bHLH(basic helix-loop-helix)转录因子NGN1表达水平的改变可能是前体细胞从神经元发生到胶质细胞发生转变过程中的一个关键因素.此外,转录因子EMX2 、PAX6 、MASH1等也与神经元的表型特化及皮层的区域划分密切相关.
- 余爽徐群渊
- 关键词：皮层神经元分化转录因子
