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一种改善转录通读的慢病毒载体及其应用: 本发明公开了属于生物技术领域的一种改善转录通读的慢病毒载体及其应用。所述载体是在HIV-1慢病毒载体的LTR区域制备慢病毒载体△U3与泡沫病毒(foamy？virus)R-U5区形成嵌合体LTR(FH？LTR)，或者在H...; 曾凡一张敬之高越何佳平方彧聃; 文献传递

在宿主细胞内仅有部分慢病毒载体发生了功能性整合: 2015年; 目的研究慢病毒在感染细胞后，是否全部整合入染色体。方法用慢病毒载体的假病毒感染293T细胞后．抽提培养2d和10d的细胞基因组DNA。通过定量PCR检测细胞基因组中LTR拷贝数，计算出整合率。分别取病毒感染3d和11d的细胞，离心重悬后取部分细胞放在荧光显微镜下拍照，在蛋白水平上验证此结论。结果①慢病毒载体在宿主细胞基因组内的平均整合率（47±16）％（n=10）；②细胞感染慢病毒后3d和11d的GFP照片也证实了慢病毒在宿主细胞基因组内部分整合。结论慢病毒载体的假病毒感染293T细胞后，仅有部分的载体骨架是整合人基因组中的，整合入293T细胞基因组中的外源基因能够较长时间稳定表达。; 张丽萍高越檀硕张敬之; 关键词：慢病毒载体基因治疗转染

仅有部分慢病毒载体在宿主细胞内发生了功能性整合: 目的:慢病毒载体是以慢病毒为基本骨架,经功能性删减和拆分制备而成只具备一次性感染和整合能力的病毒载体。因此,理论上慢病毒载体的基本生理特性应遗传了其来源病毒的特征。一般认为,慢病毒在感染细胞后,仅有部分骨架是以整合入染色...; 张丽萍高越蔡勤张敬之; 文献传递

慢病毒载体安全性改进的研究: 近年来,以HIV-1(Human Immunodeficiency Virus Type 1)为骨架的慢病毒载体(LVV)作为一种有效的基因表达和导入系统,正愈来愈广泛地被运用到临床基因和细胞治疗中。与MLV载体的临床运...; 何佳平高越方彧聃王娟任兆瑞曾凡一张敬之; 文献传递

乳腺生物反应器特异高效表达载体的构建: 2014年; 乳腺生物反应器具有广阔的开发前景,而提高目的基因的表达量是该领域一个重要的研究课题。因此,选用强的非特异性启动子pCAG,而不是乳腺特异性启动子来实现高效表达;通过Cre/loxP系统和山羊β-乳球蛋白启动区(pBLG)表达Cre重组酶来实现载体的自删除以达到乳腺特异表达的目的。方法:构建含PolyA终止信号的Cre乳腺特异表达元件PolyA-pBLG-cre,插至强启动子pCAG驱动的报告基因lacZ表达载体中,构建成乳腺特异表达载体pCBCZ(pCAG-loxPPolyA-pBLG-cre-loxP-lacZ)。转染细胞实验结果:PCR鉴定确认pCBCZ载体在小鼠乳腺上皮细胞(HC11)中发生Cre-loxP同源重组。X-Gal染色表明载体能驱动lacZ在HC11细胞中高效表达β-半乳糖苷酶,而在NIH 3T3细胞中仅少量表达。结论:构建的pCBCZ载体能高效驱动外源基因在乳腺细胞中表达,且具有较好的乳腺特异性,为研发乳腺生物反应器表达载体提供新的方法。; 张斯敏高越方彧聃张金脉张敬之; 关键词：乳腺生物反应器 CRE 特异表达

原位染色检测慢病毒载体转录通读方法的建立被引量：1: 2015年; 慢病毒载体作为基因导入系统已被多次应用于基因治疗试验当中,近年来受到了广泛关注。转录通读是慢病毒载体应用过程中存在的潜在不安全因素之一。为了进一步完善慢病毒载体转录通读的检测方法,使检测结果更加直观准确,在已建立的在转录水平检测其转录通读的基础上,进一步模拟病毒载体整合入基因组的状态,于原病毒载体3'-LTR后插入经密码子优化的Lac Z报告基因。经转染细胞后进行原位染色,发生通读现象的细胞会被染成蓝色,从而在蛋白质水平直观地体现慢病毒载体的通读情况,说明所建立的方法是准确可行的。所得结论与q RTPCR方法在转录水平检测的结果是平行相一致。原位染色检测法的建立为慢病毒载体转录通读的检测、提高慢病毒载体生物安全性的研究提供了技术支持。; 高越檀硕任兆瑞张敬之; 关键词：慢病毒载体

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