陈昌金 作品数:15 被引量:21 H指数:4 供职机构: 成都中医药大学附属医院 更多>> 发文基金: 四川省卫生厅科研基金 四川省自然科学基金 四川省中医管理局科研基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
益气逐瘀解毒方抗四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的作用研究 被引量:3 2019年 目的:研究益气逐瘀解毒方(YQZYJD)对四氯化碳(CCl_4)诱导的大鼠肝纤维化的治疗作用。方法:将SD雄性大鼠给予CCl_4橄榄油混合液进行皮下注射7周,制备肝纤维化大鼠模型,随机分为YQZYJD高、中、低剂量组、阳性对照组、模型组,给予相应治疗,5周后处死大鼠,检测外周血生化指标ALT、AST和GGT,酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测透明质酸(HA)和层黏连蛋白(LN),肝组织HE、MASSON染色分别检测肝组织损伤及肝纤维化程度,免疫组化法分别检测大鼠肝组织中α-SMA及TGF-β1表达水平。结果:与阳性对照组相比,YQZYJD高剂量组GGT、HA和LN水平显著降低(P<0.05),病理组织学检测发现,YQZYJD治疗各组的肝组织结构回复均优于模型组,而高剂量组优于阳性对照组;YQZYJD各剂量组α-SMA表达均较模型组显著降低(P<0.05),YQZYJD高剂量组TGF-β1的表达较阳性对照组显著降低(P<0.01)。结论:YQZYJD可促进CCl_4诱导肝纤维化大鼠模型的肝组织结构回复,过度沉积的ECM降解,抑制HSCs的活化,降低TGF-β1的表达水平,改善CCl_4诱导肝纤维化大鼠的肝纤维化程度。 李晖 谭勤锐 韩朋丽 杨琪 林俊芝 赵梓亦 陈昌金 陈婧关键词:肝纤维化 四氯化碳 大鼠脂肪干细胞分离培养及细胞表型的研究 被引量:6 2014年 目的分离、培养和冻存大鼠脂肪干细胞,并对其相关的细胞表型进行研究,为利用脂肪干细胞治疗梗阻性肾病肾纤维化等实验提供依据。方法取大鼠3只,经消毒麻醉,采集其腹股沟处脂肪组织分离培养其中的脂肪干细胞,用相差倒置显微镜观察细胞生长方式及形态变化。取第三代细胞用流式细胞仪作细胞免疫表型的鉴定。冻存复苏后再次检测干细胞生长情况及表型。结果大鼠脂肪组织中含有大量间充质干细胞,原代培养的ASCs呈小圆形或星形,经传代后的脂肪干细胞形态比较均一,呈长梭形,个别略呈多角形、漩涡样生长。其细胞表型为CD29、CD44高表达,CD73、CD105中等程度表达,CD34极低表达。脂肪干细胞经低温冻存3个月,复苏后,生长活力和存活率与冻存前未见明显区别,CD44和CD29检测与冻存前表达率也一致。结论建立了一种脂肪干细胞的有效分离、培养及保存方法,并对其表面标志物进行鉴定,为利用脂肪干细胞进行进一步的实验研究提供了依据。 吕春燕 陈高莉 杨玲 陈昌金 袁慧 杨雪梅关键词:脂肪干细胞 细胞培养 表面标志物 冻存 温阳健脾祛痰颗粒含药血清对非酒精性脂肪性肝病细胞模型TLR4/TRIF/NF-κB通路的影响 被引量:1 2019年 目的研究温阳健脾祛痰颗粒(WYJPQT)含药血清对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)细胞模型的影响,初步探讨其作用机制。方法 0.25 mM油酸诱导HepG2细胞24 h,油红O染色和三酰甘油检测确定NAFLD细胞模型成功建立,将NAFLD细胞模型分为WYJPQT高、中、低剂量组,阳性对照组及模型组,同时设置空白对照组。随后进行含药血清的制备,WYJPQT高、中、低剂量组分别给予10%WYJPQT高、中、低剂量组含药血清培养基孵育48 h,阳性对照组给予10%多烯磷脂酰胆碱含药血清培养基孵育48h,模型组和空白对照组给予10%大鼠血清培养基孵育48 h后,进行油红O染色,细胞内三酰甘油含量测定,并应用逆转录-实时荧光定量PCR法(RTqPCR)和蛋白印迹法(Western blot)分别检测Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MYD88)、Toll样白介素-1受体结构域适配子诱导干扰素-b(TRIF)和核因子κB(NF-κB)mRNA和蛋白表达水平。结果含药血清干预48h后,油红O染色提示WYJPQT高、中、低剂量组降低TG的作用细胞内脂滴颗粒较模型组减少,TG含量较模型组明显降低(P<0.05),低剂量组与阳性对照组相当(P>0.05);高、中剂量组TRIF蛋白相对表达量较模型组明显减少(P<0.01),高剂量组TRIF蛋白表达量与阳性对照组相当(P>0.05);WYJPQT各剂量组NF-κB m RNA和蛋白相对表达量均较模型组显著减少(P<0.01);WYJPQT高、中剂量组TLR4 m RNA相对表达量较模型组和阳性对照组明显降低(P<0.05)。结论 WYJPQT含药血清可调控TLR4/TRIF/NF-κB信号通路,降低NAFLD细胞模型中的脂滴颗粒数量,减少TG含量,达到对NAFLD细胞模型的治疗作用。 李晖 张泽凤 杨超 林俊芝 赵梓亦 陈昌金关键词:非酒精性脂肪性肝病 细胞模型 复方叶下珠胶囊体内抗鸭乙型肝炎病毒作用的研究 2012年 目的:观察复方叶下珠胶囊体内抗鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的作用。方法:采用北京麻鸭乙型肝炎病毒模型,用低、中、高不同剂量的复方叶下珠胶囊灌胃,治疗1周(T7)、2周(T14)及停药3d(P3)时,检测血清中DHBVDNA、DHBsAg和DHBeAg的变化。结果:与模型组对比,复方叶下珠胶囊高、中剂量组用药2周后,血清中DHBVDNA含量、DHBsAg和DHBeAg滴度水平显著降低。结论:复方叶下珠胶囊连续用药2周后具有较强的抗DHBV作用。 李晖 张传涛 辜海英 陈昌金 曲俊彦 钟森关键词:乙型肝炎 多效生长因子基因转染小鼠脂肪来源干细胞的实验研究 被引量:5 2013年 目的探讨多效生长因子基因(pleiotrophin,Ptn)转染小鼠脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)作为组织工程血管的重建种子细胞的可行性,并检测其基因表达,为缺血性病损治疗提供新手段。方法取3只清洁级近交系C57BL/6W雌性小鼠(体重15~20 g)腹股沟皮下脂肪,采用酶消化法体外分离、培养ADSCs,流式细胞仪行细胞表面标志物CD29、CD44鉴定。实验分为转染pIRES2-LEGFPN1组(含Ptn基因编码序列,A组)和转染pLEGFP-N1负对照组(含GFP基因编码序列,B组)。ADSCs转染后,A组以最佳筛选浓度200μg/mL的G418对转染后细胞进行筛选,流式细胞仪鉴定转染后细胞免疫表型。实时荧光定量PCR、Western blot检测A、B组细胞Ptn基因和PTN蛋白表达。结果实验成功分离、培养小鼠ADSCs;细胞表面标志物CD29、CD44阳性率分别达99.5%、95.8%,双阳性率达93.6%。A组转染Ptn后细胞表面标志物CD29、CD44阳性率分别达99.1%、95.6%,双阳性率达93.4%。实时荧光定量PCR、Western blot检测示,A组Ptn基因和PTN蛋白相对表达水平均显著高于B组(P<0.05)。结论 Ptn基因能转染小鼠ADSCs并高表达PTN蛋白,为组织工程血管构建种子细胞选择提供了新思路。 陈昌金 袁惠 辜海英 杨雪梅 赵梓亦关键词:血管组织工程 脂肪来源干细胞 转染 小鼠 与HCV清除相关的KIR2DL3/HLA-C1基因组合在40例中国汉族健康人群中的分布 2015年 目的研究KIR2DL3/HLA-C1基因组合与丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)清除的相关性。方法本研究对随机抽取的无血缘关系的40个健康成人(中国汉族)外周血样本进行了KIR及HLA-Cw基因分型,并分析了与HCV清除相关的KIR2DL3/HLA-C1基因组合的分布情况。结果 40例样本中HLA-Cw位点HLA-C1基因出现频率较HLA-C2高,且HLA-C1C1出现的频率较HLA-C1C2高;KIR基因型中,以3DL1、2DL1、2DL3、2DL4、3DL2、3DL3、2DP1、3DP1、2DS4出现频率较高,而3DS1、2DS1、2DS2、2DS3、2DS5、2DL2、2DL5出现频率较低;KIR2DL3+/HLA-C1C1例数较KIR2DL2+/HLA-C1C1多。综合分析发现,KIR2DL3+/HLA-C1基因型组合以KIR2DL3-2DL3/HLA-C1C1者较多,占总样本数52.5%。结论以本研究为基础,可进一步研究KIR2DL3/HLA-C1基因型组合与NK细胞体外抑制HCV活性的相关性,探讨HLA-Cw基因型为C1C1的个体中,KIR 2DL3-2DL3个体的NK细胞是否较2DL2-2DL2个体以及2DL3-2DL2个体的NK细胞具有更强的抑制HCV活性的作用,为丙型肝炎的免疫治疗及疫苗研制提供依据。 许雪琳 李晖 赵梓亦 胥展志 陈婧 陈昌金 辜海英关键词:基因分型 2a基因型丙型肝炎病毒体外感染人CD4^+ T细胞模型的建立 2016年 目的建立2a基因型丙型肝炎病毒(HCV)体外感染CD4^+T细胞模型。方法密度梯度离心法从抗HCV阴性健康个体的外周血提取外周血单核细胞(PBMC),从PBMC中分选CD4^+T细胞,HCV病毒颗粒感染CD4^+T细胞,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HCV RNA,免疫印迹法(Western blot)检测HCV的NS3和NS5A蛋白。结果感染后的CD4^+T细胞中,RT-PCR检测到HCV RNA,Western blot检测HCV的NS3和NS5A蛋白。结论成功建立2a基因型HCV体外感染CD4^+T细胞模型,为进一步研究HCV慢性持续性感染的机制奠定基础。 李晖 许雪琳 赵梓亦 陈昌金 林俊芝 陈婧 胥展志关键词:丙型肝炎病毒 体外感染 CD4+T细胞 一种治疗肝纤维化的药物组合物及制备方法与用途 本发明公开了一种治疗肝纤维化的药物组合物,它是由下述重量配比的原料制备而成的制剂:党参10-12.5份、黄芪15-20份、莪术10-15份、当归10-15份、川芎5-7.5份、赤芍10-12.5份、丹皮10-12.5份、... 李晖 林俊芝 赵梓亦 陈昌金 梁潆丹不同剂量脂肪干细胞移植对早期肾纤维化形成的影响 被引量:4 2017年 背景:前期实验发现干细胞对于肾纤维化的早期形成具有一定的干预作用,能够延缓肾间质纤维化的发生。目的:研究外源性脂肪干细胞移植对大鼠早期肾间质纤维化形成的影响,并探讨其量效关系。方法:将50只SD大鼠随机分为5组,假手术组尾静脉注射PBS;模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组结扎左侧输尿管,建立肾纤维化模型,造模成功后,模型组尾静脉注射PBS,低剂量组、中剂量组、高剂量组尾静脉分别注射细胞浓度为1×10^(10),2×10^(10),3×10^(10) L^(-1)的脂肪干细胞悬液0.1 mL。注射后14 d取左肾组织,采用苏木精-伊红染色和Masson染色观察肾小管-间质损伤程度及肾间质相对面积,免疫组织化学法检测α-平滑肌肌动蛋白和转化生长因子β1表达。结果与结论:①苏木精-伊红染色:模型组表现为典型的肾小球及肾小管-间质改变;低剂量组、中剂量组、高剂量组均有一定程度的肾小球及肾小管-间质改变,但程度较模型组明显减轻,以高剂量组损伤程度最轻;②Masson染色:模型组肾小管间质增宽,胶原纤维沉积;低剂量组、中剂量组、高剂量组肾间质增宽程度低于模型组,中、高剂量组肾间质增宽程度低于低剂量组(P<0.05);③免疫组织化学染色:与假手术组比较,模型组α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子β1表达升高(P<0.05);与模型组比较,高剂量组α-平滑肌肌动蛋白表达降低(P<0.05),低、中、高剂量组转化生长因子β1表达均降低(P<0.05),以中、高剂量组转化生长因子β1降低更明显;④结果表明:外源性脂肪干细胞移植可延缓早期肾纤维化的形成,并存在剂量-效应关系,其机制可能是通过改变转化生长因子β1诱导的信号通道状态实现的。 吕春燕 李进辉 刘伟伟 陈昌金 吴程 赵梓亦 沈东成关键词:干细胞 纤维化 转化生长因子Β1 复方叶下珠胶囊对HepG2.2.15细胞的抗HBV作用研究 目的:研究复方叶下珠胶囊的体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用.方法:将HepG2.2.15细胞分为空白对照组、阳性对照组和不同浓度的复方叶下珠胶囊组,用CCK-8检测细胞毒性,酶联免疫吸附法(ELISA)检测HBsAg和... 李晖 张传涛 辜海英 陈昌金 曲俊彦关键词:HBV HEPG2.2.15