邓洪宽
- 作品数：19 被引量：61H指数：4
- 供职机构：吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 旋毛虫新生幼虫DNA结合相关蛋白基因的筛选及特性的初步研究
- 为筛选旋毛虫成虫表达的与宿主肠粘膜上皮细胞结合的相关蛋白基因,旋毛虫新生幼虫表达的与宿主肌细胞染色体DNA结合的相关蛋白基因,以及旋毛虫新生幼虫表达的与宿主肌细胞结合的侵入相关蛋白基因,进而为研究旋毛虫包囊形成机制,研究...
- 邓洪宽
- 关键词：噬菌体展示文库
- 文献传递
- RNA干扰技术在动物寄生线虫研究中的局限性被引量：3
- 2008年
- RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种应用广泛的基因功能研究技术,不仅应用于模式生物秀丽隐杆线虫中,而且已成为鉴定基因功能高通量的筛选方法。但是,最近的研究发现,RNAi在动物寄生性线虫的应用上还存在一些问题,如:RNAi在不同线虫体内效果差异较大,同一种线虫不同发育时期的效果差异也较大。产生这些问题的原因可能有:①RNAi传送途径的效率在不同的寄生性线虫中是不同的;②RNAi机制只存在于相关的线虫中,大多寄生性线虫都存在着基因功能缺陷;③RNAi可能受线虫不同生活方式的影响。本文就RNA干扰技术在动物寄生性线虫研究中的局限性作一综述。
- 王子见吴秀萍邓洪宽刘明远
- 关键词：RNA干扰动物线虫
- 鲤外周血白细胞蛋白酶体激活因子PA28β全长cDNA的克隆、鉴定及其差异表达分析被引量：1
- 2008年
- 采用基因文库筛选方法,克隆了鲤外周血白细胞蛋白酶体激活因子PA28βcDNA,对其序列进行了分析,同时利用半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测了不同外界因子刺激下鲤外周血白细胞PA28β的表达情况。结果显示,用DD-RTPCR的方法获得差异显示片段A18,经地高辛标记作为探针对有丝分裂原刺激的鲤外周血白细胞cDNA文库进行核酸杂交筛选,从0.8×104个重组噬菌体中,经过两轮筛选获得阳性克隆。序列分析表明,该阳性克隆长1175bp,含有一个大小为735bp编码244个氨基酸的完整开放阅读框,为编码鲤鱼蛋白酶体激活因子PA28β的全长cDNA。系统发生分析其与已报道的斑马鱼蛋白酶体激活因子PA28β亲缘关系最近,基因序列的同源性达95%。分离培养鲤外周血白细胞,在不同条件下经PHA和ConA刺激后,利用Trizol提取总RNA,根据得到的PA28β全长cDNA序列和鲤鱼-βactin序列设计引物,利用RT-PCR方法对鲤外周血白细胞PA28β进行差异表达分析,结果表明:经有丝分裂原刺激后前期(4h)白细胞中PA28β的表达量明显增大,但随着时间推移(12h、24h)表达增加量有所降低,并不随时间的延长而持续增加。在刺激的和正常的白细胞中PA28β表达趋势都成抛物线图,不同的是经刺激的比正常的PA28β的表达量提前达到峰值。首次报道鲤蛋白酶体激活因子PA28β的全长cDNA序列,鲤PA28β的cDNA序列GenBank注册号为EU255233,并对其进行差异表达分析,这些结果可为PA28β在鱼类免疫应答中的作用研究提供参考和依据。
- 付保忠卢强谭业平孙晓义李伟刘相叶邓洪宽
- 关键词：CDNA克隆差异表达分析
- 旋毛虫肌幼虫p45cDNA的克隆及鉴定
- 2008年
- 目的本研究根据GenBank中旋毛虫45kDa抗原基因的序列设计引物,采用PCR技术从旋毛虫肌幼虫cDNA文库中扩增靶基因p45cDNA,并克隆到pMD-18T载体,转化至大肠埃希氏菌NovaBlue后测序分析。获得827bp的p45cD-NA。该序列与GenBank中的旋毛虫p45基因序列相比共有1个核苷酸发生改变,二者的同源性为99%,其编码蛋白质由268个氨基酸组成,与45kDa抗原的同源性为99%。将p45cDNA克隆到原核表达载体pET28a并转化至表达菌BL21star(DE3)后,经IPTG诱导表达出约30kDa的重组蛋白。Western-blot检测表明,p45重组蛋白可以被旋毛虫感染猪血清识别,具有良好的抗原性。
- 孙树民吴秀萍付宝权王学林郭恒于申业邓洪宽刘马峰P.Boireau刘明远
- 关键词：旋毛虫P45CDNA克隆抗原性
- 华支睾吸虫成虫虫体与排泄-分泌物抗原在ELISA检测中的评价被引量：7
- 2008年
- 目的:探讨华支睾吸虫成虫可溶性抗原和排泄-分泌物抗原ELISA检测的临床诊断价值。方法:分别以虫体可溶性抗原和排泄-分泌物抗原作为诊断抗原,采用间接ELISA检测方法检测感染者(来自流行区,粪便虫卵检测阳性)血清107份和健康人(来自非流行区,粪便虫卵检测阴性)血清50份,计算其敏感性、特异性和符合率,并进行两种诊断抗原间的统计学比较与评价。结果:可溶性抗原的敏感性为58.88%,特异性为98%,符合率为71.34%;排泄-分泌物抗原的敏感性为87.85%,特异性为100%,符合率为91.72%。经统计学分析,两者敏感性和符合率差异具有统计学意义(P<0.05)。特异性差异无统计学意义(P>0.05)。结论:作为诊断抗原,排泄-分泌物抗原优于可溶性抗原。排泄-分泌物抗原具有较高的敏感性与特异性,对于华支睾吸虫感染具有较高的诊断价值。
- 叶春艳王峰吴秀萍李玉香杨秀云于申业邓洪宽刘相叶刘明远
- 关键词：华支睾吸虫可溶性抗原ELISA
- 伪旋毛虫肌幼虫cDNA表达文库的构建及筛选被引量：1
- 2008年
- 目的获取伪旋毛虫(Trichinella pseudospiralis)肌幼虫时期抗原性基因。方法利用λZAP载体构建伪旋毛虫肌幼虫cDNA表达文库;以感染伪旋毛虫60天后的猪血清为抗体探针,对伪旋毛虫肌幼虫cDNA文库进行免疫学筛选,对筛选出的强反应原性克隆进行测序,利用相关分子生物学软件进行序列分析。结果构建的伪旋毛虫cDNA表达文库的库容量为0.55×106pfu,重组率为95.6%,扩增后文库滴度为1.2×1010pfu/mL。从2.0×105个重组噬菌体筛选获得阳性克隆27个。序列分析结果表明这27个阳性克隆共编码7种cDNA分子,其编码的类似蛋白分别为伪旋毛虫Tp21kDa蛋白、伪旋毛虫Tp28kDa蛋白、蛋白酶体激活因子亚单位(Proteasome activator subunit)类蛋白、Nudix水解酶(Nudix hydrolyase)类蛋白、凝集因子(Condensin)类蛋白、尿嘧啶糖基化酶(uracil glycosylase)类蛋白和一个未知蛋白。结论获得两个反应原性较强且高拷贝的抗原基因,其分别编码Tp21kDa蛋白及蛋白酶体激活因子亚单位。
- 吴秀萍赫荣华高丽芳付宝权王学林R. Blaga邓洪宽于申业P. Boireau王峰刘明远
- 关键词：肌幼虫CDNA表达文库
- 旋毛虫属分类的研究进展被引量：3
- 2006年
- 近年来,随着遗传学、生物学和生物化学的发展,已将旋毛虫属分为8个种和3个分类地位尚未定的基因型。文章就不同种和基因型的旋毛虫,分别具有的不同宿主、环境选择因素和世界性分布区域做一综述。
- 崔国祯王学林刘明远夏慧卿邓洪宽杨志东孙磊谭业平
- 关键词：旋毛虫病
- 旋毛虫虫体蛋白对肝癌细胞H7402的抑制作用被引量：14
- 2007年
- 目的:研究旋毛虫虫体蛋白对肝癌H7402细胞的抑制作用,确认其对肝癌细胞的抗肿瘤活性。方法:通过体内、体外培养获得旋毛虫成虫与新生幼虫的混合物,采用匀浆、离心方法制备旋毛虫虫体蛋白,紫外分光光度计检测蛋白浓度。分别设0.035、0.070、0.140 mg/ml与H7402细胞作用为实验组,并设虫体蛋白对正常肝细胞HL-7702细胞作用为对照组,采用MTT检测细胞增殖能力,划痕实验、侵袭实验检测旋毛虫虫体蛋白对H7402的迁移及侵袭能力的影响,采用TUNEL法和流式细胞术分析肿瘤细胞凋亡和细胞周期。结果:成功制备了旋毛虫虫体蛋白。0.035、0.070、0.140 mg/ml旋毛虫虫体蛋白对H7402细胞增殖的抑制率分别为(22.40±13.80)%、(29.45±16.80)%、(39.38±17.80)%。TUNEL实验和流式细胞术可观察到旋毛虫虫体蛋白诱导H7402凋亡,其凋亡率为(39.07±0.90)%,细胞周期阻滞于S期。划痕和侵袭的实验表明旋毛虫虫体蛋白对H7402细胞迁徙能力有抑制作用,对其侵袭的抑制率为(63.79±13.71)%。结论:旋毛虫虫体蛋白对肝癌H7402细胞的增殖、迁移和侵袭具有抑制作用,可能是一个有潜在应用价值的抗肝癌生物制剂。
- 王学林杨世杰吴秀萍于申业叶春艳邓洪宽魏征仁王卫芳王芯蕊刘明远
- 关键词：旋毛虫抗肿瘤抗增殖
- 淡水鱼虾华支睾吸虫囊蚴感染情况调查被引量：3
- 2010年
- 采集吉林省白城地区镇赉县周边6个鱼塘的各种鱼类,用直接压片镜检法和人工消化法分别对采集回来的麦穗鱼感染华支睾吸虫囊蚴的情况进行统计调查,结果表明,感染率最高、感染强度最大的鱼塘是四方坨六分场。随即对四方坨六分场鱼塘中各种鱼类华支睾吸虫囊蚴感染情况也采用同样方法进行调查,结果显示,感染率最高的是麦穗鱼、银飘鱼、尖头鱥,均为100%;其次是细鳞鱼,为80%;其他种类的鱼虾均未检测到有华支睾吸虫囊蚴寄生。
- 张小玲陈根元唐斌王学林邓洪宽刘明远吴秀萍
- 关键词：华支睾吸虫囊蚴感染率
- 鲤鱼外周血白细胞蛋白酶体激活因子PA28全长cDNA的克隆与差异表达分析被引量：2
- 2006年
- 对DD-RTPCR获得的差异显示片段C15进行地高辛标记后作为探针,对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库进行核酸杂交筛选,从0.8×104个重组噬菌体中,经过2轮筛选获得阳性克隆DM7。测序分析表明,该阳性克隆长1 097 bp,具有完整的开放阅读框架,为编码鲤鱼蛋白酶体激活因子PA28的全长cDNA,编码249个氨基酸,含有PA28的α和β亚单位功能结构域,与已报道的斑马鱼的蛋白酶体激活因子PA28的同源性达93%。分离鲤鱼外周血白细胞,经有丝分裂原在不同条件下刺激后,利用Trizol提取总RNA,根据得到的PA28全长cDNA序列和鲤鱼β-actin的序列,设计引物,采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定白细胞中PA28基因mRNA表达量的变化。结果表明,白细胞经LPS、ConA刺激后,PA28基因的mRNA表达量有所增加,但并不随时间的延长而持续增加。
- 李莲瑞卢强付宝权谭业平邓洪宽崔国祯夏慧卿刘明远韩文瑜
- 关键词：鲤鱼CDNA克隆
