谢维 作品数:103 被引量:264 H指数:9 供职机构: 东南大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 江苏省卫生厅科研基金 国家杰出青年科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 文化科学 农业科学 更多>>
口腔鳞癌细胞系HLAI类分子异常表达及其机制探讨 被引量:2 2003年 为探讨两个口腔鳞癌细胞系 (KB和Tca81 1 3)中HLAI类抗原的表达水平及其异常的分子机制。利用流式细胞术、Westernblot检测细胞系中HLAI类抗原在蛋白水平的表达 ;RT PCR检测细胞系在转录水平的表达。结果两个口腔鳞癌细胞系中HLAI类抗原蛋白水平的表达下调 ;RT PCR结果显示Tca81 1 3细胞系中A、B、C、LMP2、LMP7、LMP1 0基因的mRNA表达下调 ;在KB细胞系中除了A、B、C、LMP7、LMP1 0基因的mRNA表达下调 ,LMP2、PA2 8α基因的mRNA表达显著减少或缺失 ;而TAP1、TAP2、Tapasin基因在mRNA水平的表达无改变。IFN γ诱导后纠正了多个基因在mRNA水平的异常表达。两个口腔鳞癌细胞系中HLAI类抗原表达下调 。 唐秋莎 张建琼 祁兵 沈传来 鲁晓萱 鲍海逊 Soldano Ferrone Xinhui Wang 谢维关键词:鳞状细胞 基因表达 PCR-SSP结合测序分析快速筛选HLA-A*0201亚等位基因 被引量:6 2003年 建立相对简单经济的检测HLA A 0 2 0 1等位基因的方法 ,以便于从特定人群中快速筛选HLA A 0 2 0 1阳性的个体 ,满足科研的需要。根据第十二届HLA国际联合会提供的标准操作规程和一对HLA A位点特异性的引物 ,从外周血中提取基因组DNA ,扩增HLA A基因 ;再设计两对HLA A2组特异性引物 ,采用套式PCR分别扩增HLA A基因的 5’端和 3’端 ,如出现特异条带 ,则将后两对引物的PCR产物进行测序分析 ,对照HLA A2组等位基因的第 2和第 3外显子序列图 ,确定是否为HLA A 0 2 0 1 1~ 0 2 0 1 6的 6个等位基因。结果 :以HLA A 0 2 0 1阳性的T2细胞株为阳性对照进行检测 ,结果完全正确 ,并设立非HLA A 0 2 0 1的A2细胞株RML (HLA A 0 2 0 4 )及Raii细胞株 (非A2组 )为对照 ,同时随机检测 30份门诊病人血样 ,其中 7份为HLA A2阳性 ,经测序 ,2例为HLA A 0 2 0 1 1 ,1例为HLA A 0 2 1 1或 0 2 35 ,1例是HLA A 0 2 0 6或0 2 2 1或 0 2 4 1或 0 2 4 4或 0 2 5 1或 0 2 5 4 ,1例是HLA A 0 2 0 5或 0 2 1 4 ,1例是HLA A 0 2 34或 0 2 35 ,1例是 0 2 5 0。本方法利用位点特异性引物进行 2~ 3次PCR扩增 ,结合PCR产物测序便可相对简便经济地检测出HLA A 0 2 0 1的全部 6个亚等位基因 ,为快速检测其他特定HLA等位基因? 郭薇 张建琼 沈传来 孟凡岩 谢维关键词:HLA分型 PCR-SSP 测序 抗醛糖还原酶单克隆抗体的制备与特性鉴定 2005年 目的: 制备抗醛糖还原酶(AR)的单克隆抗体(mAb),并与本室制备的抗醛糖还原酶相似蛋白(ARL-1) mAb进行比较. 方法: 经RT-PCR获得AR基因, 将基因插入Pgex- 4T-1(His)6C中, 构建重组质粒Pgex- 4T-1(His)6C-AR, 以重组质粒转化E.coli Rosetta诱导表达GST-AR蛋白.以纯化的GST-AR蛋白免疫BALB/c小鼠, 采用杂交瘤技术制备mAb.应用间接ELISA和Western blot方法对mAb进行筛选和鉴定.使用Clustalx和 Antheprot软件, 比较AR与ARL-1的同源性, 表达GST-Dar[80~142氨基酸(aa)], 与ARL-1差异较大; 并分析AR的抗原性, 表达GST-Da1(1~79 aa)、GST-Da2(80~99 aa)、 GST-Da3(111~142 aa)、 GST-Da4(143~316 aa).利用AR全长及截短蛋白, 采用Western blot分析制备的抗AR mAb识别AR抗原的部位.结果: 获得3株稳定分泌抗AR mAb的杂交瘤细胞系ARB3、 AR7B3G4和ARF10.3株抗GST-AR的 mAb均为IgG1(κ型), 腹水mAb效价为1∶ 4×105, 细胞培养上清mAb效价为1∶ 1×104, 3株mAb均可与胎盘组织中的AR蛋白起反应, 而与GST-ARL-1和GST蛋白无交叉反应.它们分别为抗GST-Da1、GST-Da3和GST-Da4蛋白的mAb.结论: 成功地制备了3株特异性抗AR mAb,可分别识别AR的 1~79、111~142、143~316位氨基酸.将它们与抗ARL-1 mAb联合应用,将有助于进一步研究AR与ARL-1蛋白的功能, 并为深入探讨AR、ARL-1与相关疾病的关系及进行大规模的流行病学调查提供了有力的工具. 马达 金俊飞 孙明宽 单军 张建琼 谢维关键词:醛糖还原酶 单克隆抗体 肝癌细胞中HLA I类重链基因表达与启动子区域甲基化的相关性 被引量:2 2007年 目的:研究肝癌细胞株中DNA甲基化与HLAI类分子异常表达的相关性。方法:应用MSP技术对相关细胞系的HLA I类分子重链A、B、C位点启动子区域CpG岛的甲基化状态进行分析,Real-time PCR检测HLAI类分子重链mRNA水平的表达情况,Western blot检测RNA干扰后HLAI类分子重链表达情况。结果:在8株肝癌细胞系中HLA I类分子重链A、C位点启动子区域CpG岛存在甲基化;将启动子区域的DNA甲基化与相关基因表达数据相比较显示二者没有关联性;在RNA干扰DNA甲基化转移酶3a或3b的肝癌细胞系SMMC7721中,比较基因干扰前后HLA I类分子重链蛋白表达无显著变化。结论:在研究的肝癌细胞系中DNA甲基化没有参与调控肝癌中HLA I类分子的异常表达。 杨晋 张建琼 沈宇清 缪凤琴 夏梅 叶覃 许联红 谢维关键词:HLA DNA甲基化 甲基化特异性 HLA表达与肿瘤的生物治疗 被引量:12 2002年 谢维关键词:HLA 肿瘤 生物治疗 人类白细胞抗原 免疫逃避 胃癌细胞系MKN中HLA-Ⅰ类分子表达降低的机制研究 被引量:2 2006年 目的:探讨胃癌细胞系MKN中HLA-Ⅰ类抗原表达水平异常的分子机制。方法:以胃癌细胞系BGC823、MGC803和SGC7901为对照,利用流式细胞仪检测细胞表面HLA-Ⅰ类复合物的表达情况,W estern b lot检测HLA-Ⅰ类分子重链及轻链表达情况,半定量RT-PCR检测HLA-Ⅰ类分子重链、轻链和抗原加工分子mRNA水平的表达情况,并利用HLA基因区域的微卫星序列检测MKN细胞HLA基因在DNA水平的完整性。结果:胃癌细胞系MKN表面HLA-Ⅰ类复合物表达降低,重链A及B/C位点蛋白无表达而轻链表达无异常。在mRNA水平,胃癌细胞系MKN存在重链A、B、C各位点和抗原加工分子TAP1、LMP2、Tapasin、PA28β的表达缺失。微卫星DNA扩增结果初步显示,MKN细胞无HLA基因区域DNA的大片段丢失。结论:胃癌细胞系MKN HLA-Ⅰ类分子复合物表达降低可能是由HLA-Ⅰ类分子重链及其加工分子在转录水平改变而引起的。 沈宇清 张建琼 夏梅 缪凤琴 单祥年 谢维关键词:胃癌 微卫星序列 一种小鼠基于嗅觉信息与视觉信息社交行为的检测装置 本实用新型公开一种小鼠基于嗅觉信息与视觉信息社交行为的检测装置,属于动物行为实验技术领域,检测装置由透明亚克力树脂构成,分为五个部分,由下到上包括一个扇形柱底座,用于含有嗅觉信息材料的置放;底座上方是一个扇形柱的主体,所... 曹坤 刘安 吴淼 谢维p16基因甲基化状态与散发性大肠癌的相关性研究 被引量:1 2003年 为探讨p1 6基因甲基化状态与散发性大肠癌发生发展的关系 ,用甲基化特异性的聚合酶链反应 (methylati omspecificPCR ,MSP)结合测序检测散发性大肠癌及相应癌旁组织p1 6基因甲基化状态。研究发现p1 6基因在散发性大肠癌中甲基化率为 2 8 9% (1 3 4 5 ) ,有 8例癌及癌旁组织都发生了甲基化 ;有淋巴结及远处转移的甲基化率为5 0 % (8 1 6 ) ,高于无转移的甲基化率 2 0 8(5 2 4 ) (P <0 0 5 )。p1 6基因高甲基化是散发性大肠癌中常见的分子改变之一 ,大肠癌中p1 杨玉华 何小兵 张锋锐 张建琼 谢维关键词:散发性大肠癌 P16抑癌基因 甲基化 MSP DNMT1 siRNA稳定表达载体的构建及其沉默效率的评价 被引量:5 2005年 目的 构建能在肝癌细胞系SMMC- 772 1中稳定表达的高效率DNMT1的RNA干扰载体。方法 合成特异性干扰DNMT1的小分子干扰RNA (small interfering RNA,si RNA )分子,并与p SUPER- GFP载体连接。脂质体转染SMMC- 772 1细胞,并以G4 18筛选稳定表达细胞系。应用逆转录-聚合酶链反应和Western印迹方法对细胞系中DNMT1的RNA表达水平和蛋白表达水平进行了分析。应用甲基化聚合酶链反应方法分析该细胞系中甲基化的基因E-钙粘着蛋白的甲基化状态。结果 转染DNMT1沉默载体的SMMC- 772 1细胞中DNMT1的m RNA表达量为对照载体p SU PER转染SMMC-772 1细胞的4 3% ,而前者中DNMT1蛋白表达水平小于后者的10 %。DNMT1的si RNA沉默效率大于90 % ,所构建的DNMT1的si RNA有较高的沉默效率。DNMT1的表达抑制使E-钙粘着蛋白基因启动子区出现去甲基化。结论 成功构建了能稳定表达的高效率DNMT1的RNA干扰载体,但目的基因沉默后其RNA表达水平与蛋白质表达水平表现不一致,评价si RNA干扰作用时应以目的基因相应蛋白质的表达水平为准。 樊红 许军 吴守伟 赵主江 张建琼 谢维关键词:DNMT1 SIRNA SMMC-7721细胞 MRNA表达量 RNA干扰作用 脂质体转染 强直性肌营养不良发病机制中的RNA功能增益及其临床治疗研究进展 被引量:1 2015年 强直性肌营养不良(myotonic dystrophy,DM)属于一类由不稳定微卫星DNA异常扩增引起的神经退行性遗传疾病,不同于通常由基因突变造成蛋白质功能丧失或增益而导致的遗传疾病,DM主要是由RNA功能增益造成的。我们综述了近年来关于RNA功能增益在DM发病机制中的重要发现以及可能的潜在治疗手段。 李默怡 庄燕 谢维关键词:强直性肌营养不良 发病机制 RNA 遗传疾病 DNA异常 基因突变