范青锋
- 作品数：47 被引量：153H指数：6
- 供职机构：北京大学第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金“十一五”国家科技支撑计划更多>>
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- 第13届国际儿科肾脏病大会会议纪要
- 2005年
- 丁洁管娜范青锋
- 关键词：儿科肾脏病学
- 足细胞裂孔隔膜与信号传导被引量：7
- 2006年
- 足细胞足突间的裂孔隔膜（sht diaphragm，SD）是肾小球滤过屏障最重要的组成部分。直到近年，才通过对一些遗传性或先天性肾病综合征（NS）的研究先后确定了多个位于SD的蛋白分子，如nephrin、podoein、CD2AP、ZO-1、FAT和NEPH1等，并把这些分子组成的复杂结构称为“SD复合体”（SDeomplex）。随后，在一些获得性NS和肾病动物模型发现，这些足细胞分子的表达和分布也存在异常。可见，SD以“静态分子筛”（static molecular siever）的形式在肾脏的超滤中起着关键作用。
- 范青锋邢燕丁洁
- 关键词：裂孔隔膜足细胞信号传导肾小球滤过屏障NEPHRINCD2AP
- podocin基因敲低对小鼠足细胞nephrin和α-actinin表达与分布的影响被引量：5
- 2004年
- 目的研究足细胞分子podocin、nephrin和α-actinin之间的相互作用和联系。方法将针对podocin分子设计的特异RNA干扰(RNAi)质粒导入体外培养的小鼠足细胞系(MPC5);应用免疫荧光染色及双标记在共聚焦显微镜下观察nephrin、podocin和α-actinin的分布方式;半定量RT-PCR和免疫蛋白印迹检测podocin、nephrin,α-actinin-4及内参照GAPDH/β-actin在mRNA水平和蛋白水平的表达量。结果(1)干扰组podocin的荧光强度显著低于对照组,其mRNA和蛋白的表达量分别下降了65%和89%。免疫双标记显示podocin的分布发生了明显变化:对照组podocin不但分布在胞核的周围,而且在胞浆呈放射性沿着细胞骨架分布,以及主要在胞膜上呈连续性的线状分布;干扰组podocin呈点状分布在胞核周围。(2)干扰组nephrin的荧光强度亦明显减低,其mRNA及蛋白的表达量分别减少了70%和78%。免疫双标记显示nephrin的分布也发生了显著变化:干扰组nephrin亦呈点状分布在胞核周围;在对照组,nephrin和podocin的分布方式相同。(3)干扰组和对照组α-actinin的分布及在mRNA和蛋白水平上的表达量无明显差异,呈细丝状均匀分布于胞质内,亦呈放射性分布于足细胞伸出的突起中。结论通过RNAi成功地使MPC5的podocin表达下调。Podocin和nephrin分子关系紧密,可能存在着?
- 范青锋丁洁张敬京管娜邓江红
- 关键词：足细胞小鼠免疫荧光染色GAPDHMRNA水平
- 离子通道蛋白TRPC6在肾脏的表达
- 目的:探讨TRPC6在正常人、小鼠和大鼠肾组织,以及小鼠足细胞系MPC5的表达和分布情况,为进一步研究TRPC6在肾脏的功能和确切定位及其与蛋白尿相关足细胞分子间的关系奠定理论基础。方法:(1)正常人肾标本来自2例肾肿瘤...
- 范青锋邢燕刘淑芳丁洁
- 文献传递
- 细胞周期调节蛋白在肾小球足细胞损伤中的作用被引量：3
- 2009年
- 蛋白尿是肾脏疾病常见的临床表现之一，也是进展至肾衰竭的独立危险因素。肾小球滤过屏障结构或功能异常是蛋白尿发生的重要原因。裂孔隔膜（SD）靠近肾小球基底膜外侧，是毗邻足细胞足突之间相互交叉形成的一层膜性结构，其组成分子nephrin、podocin和CD2AP以及离子通道蛋白TRPC6的发现进一步证实SD在肾小球滤过屏障中起关键作用。
- 苗静范青锋丁洁
- 关键词：细胞周期调节蛋白肾小球滤过屏障NEPHRINPODOCIN肾小球基底膜CD2AP
- 肾脏病患者尿液中MCP-1、β-catenin和CK19分子的检测及其临床意义
- 目的检测肾脏病患者尿液中单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1)和壁层上皮细胞标志物β-catenin和CK19分子水平,分析其与患者肾小球新月体病变的关系。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,对20例正常人和124...
- 王君丁洁管娜范青锋
- 文献传递
- 嘌呤霉素肾病大鼠肾小球足细胞相关分子表达的共定位分布被引量：5
- 2004年
- 目的 :研究嘌呤霉素肾病大鼠肾小球足细胞相关分子在病变过程中的表达与分布的关系及变化。 方法 :4 2只SD大鼠随机分为实验组和对照组 ,建立嘌呤霉素肾病模型 ,并在 2 4h、36h、2天、5天、1 0天、1 5天、2 0天七个不同的时间点 ,应用免疫荧光双标记的方法 ,通过激光共聚焦显微镜对足细胞相关分子nephrin、podocin ,α actinin 4以及CD2AP两两之间的分布关系及变化进行研究。 结果 :正常大鼠肾小球中CD2AP与nephrin及podocin的染色沿肾小球血管襻有部分重叠 ,而两者的分布模式略有不同 ,但这种共定位关系不随病变的发展而变化 ;CD2AP与α actinin 4的分布也有部分重叠关系 ,且随着病变进展 ,其荧光重叠程度增加 ;α actinin 4与nephrin及podocin在正常时有极小部分重叠 ,随着病程变化 ,两者的分布模式与分布量的变化均不同步。 结论 :足细胞相关分子nephrin、podocin及CD2AP之间以功能复合体的形式相互联系并参与蛋白尿的发生发展 。
- 邓江红丁洁管娜范青锋张敬京
- 关键词：肾小球足细胞分子表达
- 尿蛋白质组学在肾脏疾病生物标志物鉴定中的作用被引量：5
- 2005年
- 范青锋管娜丁洁
- 关键词：肾脏疾病尿蛋白白质生物标志物Β2-微球蛋白
- 邻苯三酚红钼络合法与双缩脲比色法测定嘌呤霉素肾病大鼠尿中总蛋白浓度的比较被引量：6
- 2009年
- 目的:探讨临床上新近推广的邻苯三酚红钼络合法与双缩脲比色法的相关性和偏倚,旨在评价其测定大鼠尿蛋白的可靠性,以建立一种快速、简便、可靠的大鼠尿蛋白测定方法。方法:收集15例正常对照大鼠以及35例不同时间点嘌呤霉素肾病大鼠24h尿液标本,采用双缩脲比色法和邻苯三酚红钼络合法进行尿总蛋白定量,结果分别采用Pearson相关、Passing-Bablok回归和Cusum方法检测回归偏倚,偏倚分析采用Bland-Altman法。结果:Pearson相关性分析结果显示,邻苯三酚红钼络合法测定值与双缩脲比色法测定值显著相关(r=0.9942,P<0.0001)。Passing-Bablok回归分析显示,邻苯三酚红钼络合法测定值与双缩脲比色法测定值的回归方程为Y=1.0922X-0.3771(Y表示双缩脲比色法,X表示邻苯三酚红钼络合法),线性回归的Cusum检验证实线性回归偏倚无统计学意义(P>0.05),Bland-Altman偏倚分析结果示,邻苯三酚红钼络合法与双缩脲比色法测定值的平均偏倚为-0.1。结论:邻苯三酚红钼络合法具有灵敏度高、重复性好、标本用量少、样品不需要预处理并适用于自动化分析的特点,推荐该法应用于尿量有限的大鼠尿液总蛋白的测定。
- 苗静王学晶徐国宾范青锋丁洁
- 关键词：肾病尿蛋白定量
- 通过基因敲低探讨多个足细胞分子作用及分子间反应被引量：5
- 2005年
- 目的研究足细胞裂孔隔膜(SD)复合体分子nephrin、podoein和CD2AP,以及足细胞骨架蛋白α-辅肌动蛋白(actinin)-4的作用及分子间反应。方法针对nephrin、podocin、CD2AP和α-aetinin-4mRNA序列分别设计并构建2个特异RNA干扰质粒-psiRNA-hH1GFPzeo,分别导入小鼠足细胞系MPC5以“敲低”其表达。免疫荧光染色观察其分布方式。半定量RT-PCR和免疫蛋白印迹检测其mRNA和蛋白表达。结果(1)podocin敲低组(siPod966和siPod54):未检测到podocin及nephrinmRNA,其蛋白分别下降了92%、79%及82%、67%。而CD2APmRNA和蛋白分别增加了62%、42%及71%、46%。α-actinin-4无变化。(2)nephrin敲低组(siNep492):未检测到nephrinmRNA和蛋白。而CD2APmRNA和蛋白分别增加了35%、48%。podocin和α-actinin-4无变化。(3)CD2AP敲低组(siCda744和siCda21):未检测到CD2APmRNA,其蛋白分别下降了92%和83%。nephrinmRNA和蛋白分别下降了60%、48%及76%、72%;而podocinmRNA和蛋白分别增加了38%、22%及56%、44%。α-actinin-4无变化。(4)α-actinin-4敲低组(siAct1790和siAct319):α-actinin-4和nephrin的mRNA分别下降了69%、58%及64%、49%:蛋白分别下降了81%和55%以及71%、64%。而podocin以及CD2APmRNA分别增加了50%、34%及45%、28%;蛋白分别增加了64%、46%及65%、42%。(5)敲低nephrin、podocin和CD2AP后,这些表达量降低的分子的分布发生了明显改变,即以核周为主;而相应分子敲低后引起的podocin和CD2AP表达增加,其分布亦主要以核周染色增强为主。α-actinin-4即使表达降低,分布亦无变化,仍呈细丝状分布于胞质及足细胞伸出的突起中。结论(1)在SD复合体分子中,nephrin可能具有相对独立的作用。(2)a-actinin-4对nephrin、podocin和CD2AP有直接或间接的作用。(3)足细胞分子间的作用和联系不总是“一致的”,可能是“单向的”、也可能是“双向的”。(4)nephrin、podocin、CD2AP和α-actinin-4在足细胞的分布有赖于其表达量的正常及正常的分子�
- 范青锋丁洁邢燕管娜张敬京
- 关键词：RNA干扰辅肌动蛋白足细胞分子
