胡洁
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：兰州大学第二医院更多>>
- 发文基金：甘肃省教育厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 构建靶向毒素血管内皮生长因子抗体-白喉毒素突变体
- ＜正＞高效、特异性杀灭肿瘤细胞一直是肿瘤治疗的难题,导向性药物治疗由于特异性杀伤肿瘤细胞,具有副作用低和高效的特点,因而成为近年来肿瘤治疗研究的热点。导向药物包括能识别并结合肿瘤细胞表面标志的导向部分和在导向部分的引导下...
- 张润玲胡洁杜惠芬李克生
- 文献传递
- 构建靶向毒素血管内皮生长因子抗体-白喉毒素突变体被引量：1
- 2006年
- 目的探讨以血管内皮生长因子(VEGF)抗体为导向,白喉毒素突变体(CRM9)作效应部分,构建靶向毒素VEGF抗体-CRM9,为直接杀伤肿瘤细胞寻找新的药物。方法应用异型双功能连接剂甲基丙烯酸甲酯丁二烯苯乙烯三元共聚物(MBS)连接兔抗人VEGF多抗和CRM9,制备成新的构建蛋白,Sephacryl S-300分离纯化后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳证明二者的结合情况。对构建蛋白抗体活性采用酶联免疫法检测,生物毒性应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法检测。结果构建蛋白通过分离并电泳后,出现明显增粗的分子量为116000新条带,位于CRM9和VEGF条带前方。构建的蛋白结合体中抗体活性检测,VEGF抗体与CRM9按1∶1制备的蛋白结合体,抗体活性与VEGF抗体对照差异无统计学意义(P>0·05),按1∶5和1∶8两种比例制备的蛋白结合体,抗体活性降低与VEGF抗体对照差异有统计学意义(P<0·01)。构建的蛋白结合体中CRM9毒性检测,VEGF与CRM9按1∶1比例制备蛋白结合体杀伤效果与空白对照组差异有统计学意义(P<0·01),与CRM9组差异无统计学意义(P>0·05),CRM9组杀伤效果与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0·01)。结论MBS能将VEGF抗体与CRM9连接构建成新的蛋白结合体,结合体中CRM9生物毒性和VEGF抗体活性不变。这将为进一步的免疫毒素抗肿瘤的各项研究奠定了基础。
- 张润玲胡洁杜惠芬李克生
- 关键词：免疫毒素类血管内皮生长因子A白喉毒素
- CRM9与兔抗人IgG连接方法探讨被引量：1
- 2005年
- 目的:用直接偶联法构建新型蛋白兔抗人IgGCRM9.方法:分别应用异型双功能连接剂(m Maleimido benzoyl N hydoxysuccinimideester,MBS)和N琥珀酰亚胺3(2吡啶二巯基)丙酸盐(SPDP)将兔抗人IgG多抗和白喉毒素突变体(CRM9)进行连接,制备出新的蛋白.结合后的蛋白经SephacrylS300分离纯化,用聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖电泳证明二者的结合情况.采用酶联免疫法检测IgG与CRM9按不同比例反应后所构建的蛋白复合体中抗体部分的活性.结果:用MBS连接剂连接IgG与CRM9后的产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示出的条带明显滞后于IgG所显示的条带,而在琼脂糖凝胶电泳中IgG与CRM9混合反应的样品所显示的两条条带均与IgG和CRM9单独所在的条带一致.酶联免疫实验测得的各组A450nm值表明,IgG与CRM9按1∶1和1∶3两种比例制备的样品对抗体活性影响最小,而按1∶5和1∶两种比例制备的蛋白,抗体活性受到很大的抑制.结论:兔抗人IgG与CRM9可以通过MBS结合,二者在1∶1～1∶3之间的比例时,可以有较好的连接,而且对抗体活性的影响最小.SP DP则不适用于本实验中的两种蛋白的连接.这将为免疫毒素的新型连接提供有效的方法.
- 胡洁张润玲杜惠芬袁明李克生
- 关键词：MBS
