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钙整合素结合蛋白CIB的原核表达及多克隆抗体的制备与亚细胞定位被引量：5: 2009年; 目的:构建钙整合素结合蛋白(calcium-and inte-grin-binding protein,CIB)的原核表达载体,制备小鼠抗人CIB的多克隆抗体并探讨其亚细胞定位。方法:采用RT-PCR方法从人脑组织扩增CIB的cDNA片段,利用DNA重组技术构建原核表达载体pET32a-CIB,转入BL21(DE3)中,以IPTG诱导BL21(DE3)表达CIB融合蛋白,SDS-PAGE鉴定融合蛋白CIB的表达。用含CIB融合蛋白的聚丙烯酰胺凝胶颗粒为抗原免疫小鼠制备抗血清,抗血清分别经Protein G、抗原亲和层析后用Western blot及免疫组化方法进行鉴定。结果:通过重组表达获得CIB抗原蛋白,免疫小鼠并纯化抗血清得到特异性的抗CIB抗体,该抗体能检测细胞内源性CIB蛋白的表达;同时免疫组化结果显示:CIB在SHG44、Hhu7细胞株中主要定位于细胞质。结论:成功克隆CIB基因并制备了特异性的小鼠抗人的CIB多克隆抗体,对进一步研究CIB的功能奠定了基础。; 石洁惠玲张煦王晓辉杨金升吕同德赵治华哈小琴; 关键词：CIB 基因重组多克隆抗体亚细胞定位

神经特异性转录因子、钙整合素结合蛋白多克隆抗体的制备及多巴胺对星形胶质细胞影响的初步研究: 目的：制备兔抗人神经特异性转录因子LMO3的多克隆抗体、鼠抗人钙整合素结合蛋白CIB的多克隆抗体;观察多巴胺对星形胶质细胞增殖及钙信号的影响. 方法：(1)将构建好的原核表达载体pET32a-LMO3、pET3...; 石洁; 关键词：多克隆抗体多巴胺; 文献传递

慢病毒介导的p21/Waf1 shRNA对膀胱癌特异性溶瘤腺病毒抗膀胱癌的体外实验研究: 目的：在我国膀胱癌的发病率一直居于泌尿系统肿瘤的首位，传统的治疗手段因其肿瘤杀伤能力低和副作用大等缺点，故而治疗效果远未令人满意。选择复制性溶瘤腺病毒治疗肿瘤是极其有前途的基因治疗肿瘤的方法。为此，本课题组构建了膀胱癌特...; 石洁; 关键词：膀胱癌溶瘤腺病毒细胞周期抑制蛋白

癌基因LMO3的原核表达及多克隆抗体的制备及应用被引量：3: 2009年; 目的:制备抗神经特异性表达的癌基因LMO3的多克隆抗体,进行LMO3分子检测和功能研究。方法:采用RT-PCR方法扩增LMO3的基因序列,构建其原核表达载体pET32a-LMO3。在大肠埃希菌中诱导融合蛋白表达,SDS-PAGE分离纯化原核表达的融合蛋白,PBS溶解聚丙烯酰胺凝胶颗粒中的融合蛋白,乳化后免疫新西兰兔制备多克隆抗体。采用免疫印迹、免疫组化等对该抗体的特异性进行鉴定。结果:构建的重组质粒经酶切鉴定和测序证实序列正确。经诱导表达在相对分子质量为37×103处有一条明显的蛋白条带,与预期值一致;免疫动物所得抗血清效价为1∶16 000,该抗体能够识别原核表达的LMO3蛋白及细胞内源性表达的LMO3蛋白;免疫组化显示,LMO3在SHG44胶质瘤细胞株及脑胶质瘤组织中均有表达。结论:制备了能识别天然LMO3分子的抗LMO3的多克隆抗体,为检测LMO3分子的表达和进一步研究其功能提供了有力的工具。; 惠玲石洁王晓辉吕同德杨金升哈小琴; 关键词：基因原核表达抗体多克隆

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石洁