甘洪全 作品数:33 被引量:136 H指数:8 供职机构: 河北联合大学附属医院 更多>> 发文基金: 河北省人事厅留学归国人员科技活动基金 国家科技支撑计划 唐山市科学技术研究与发展指导计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
碱性成纤维细胞生长因子对国产多孔钽-软骨细胞复合物软骨细胞表型维持及去分化的影响 被引量:2 2015年 目的对比不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对国产多孔钽-软骨细胞复合物维持软骨细胞表型和去分化作用的影响。方法分离培养3周龄新西兰幼兔膝关节软骨细胞,Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色、番红O(Safranin O)染色鉴定软骨细胞;取第3代软骨细胞分为5组:A组(1ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞),B组(10ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞),C组(50ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞),D组(多孔钽-软骨细胞)及E组(软骨细胞);MTT法检测不同浓度bFGF对多孔钽-软骨细胞生长及增殖状态的影响;扫描电镜观察bFGF-多孔钽-软骨细胞复合物细胞形态及生长;Ⅰ、Ⅱ、Ⅸ、Ⅹ型胶原免疫细胞化学染色检测软骨细胞表型变化及去分化状态;real time-PCR检测软骨细胞Ⅱ、Ⅹ型胶原mRNA表达。结果Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色及Safranin O染色均呈阳性反应,证实所分离培养的细胞为软骨细胞;1、10、50ng/mL bFGF均可促进软骨细胞增殖,各实验组(A^D组)软骨细胞增殖与对照组(E组)相比,差异有统计学意义,其中10ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞增殖最为明显(P<0.05);组间比较差异有统计学意义(P<0.05);扫描电镜观察:各组软骨细胞在多孔钽表面及孔隙内生长、黏附,早期呈不等的球形,24h后胞质延展并向周围伸出多条突起,相互连接、延展向孔隙内部生长,细胞间相互融合并覆盖支架材料;Ⅰ、Ⅱ、Ⅸ和Ⅹ型胶原免疫细胞化学染色显示10ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞组(B组)Ⅱ和Ⅸ型胶原表达高于对照组(E组,P<0.05),组间差异也有统计学意义(P<0.05);而Ⅰ和Ⅹ型胶原表达则低于对照组(E组,P<0.05);real time-PCR检测软骨细胞Ⅱ、Ⅹ型胶原mRNA表达显示:各实验组(A^D组)Ⅱ型胶原mRNA的表达高于对照组(E组,P<0.05),而Ⅹ型胶原mRNA表达量则低于对照组(E组,P<0.05)。结论 bFGF能维持多孔钽-软骨细胞复合物软骨细胞表型,抑制去分化,加强软骨� 张辉 王茜 赵阳 甘洪全 王辉 毕成 李琪佳 王志强关键词:碱性成纤维细胞生长因子 软骨细胞 骨关节炎患者关节软骨及滑膜中MMP-9、IL-6的表达 被引量:31 2011年 目的探讨骨关节炎中基质金属蛋白酶9(MMP-9)、白介素6(IL-6)mRNA和蛋白的表达。方法采用免疫组织化学技术检测60例骨关节炎病例(OA组)及20例正常对照关节软骨及滑膜MMP-9、IL-6蛋白的表达水平;采用原位分子杂交技术检测30例OA及10例正常对照关节软骨及滑膜MMP-9、IL-6 mRNA的表达水平。结果 MMP-9 mRNA和蛋白在OA组阳性表达的积分光密度(IOD)值均高于正常对照组[(8.38±2.29)vs(3.52±1.36),P<0.01;(9.18±3.58)vs(3.83±1.48),P<0.01],OA中二者的表达正相关性(r=0.924,P<0.01);IL-6 mRNA和蛋白在OA组阳性表达的IOD值均高于正常对照组[(8.74±3.62)vs(5.91±1.53),P<0.01;(8.96±3.57)vs(6.87±1.43),P<0.01],OA中二者的表达亦正相关(r=0.917,P<0.01);MMP-9 mRNA、IL-6 mRNA及相应蛋白在OA中的表达均正相关(原位杂交r=0.426,P<0.05;免疫组化r=0.444,P<0.01)。结论 MMP-9、IL-6在OA关节软骨与滑膜中呈高表达,二者对OA的发生发展可能起促进作用。 郭静 闫冰 李琪佳 甘洪全 王志强关键词:骨关节炎 基质金属蛋白酶9 白介素6 原位杂交 骨形成蛋白-7对多孔钽/软骨细胞复合物分泌功能以及Col-Ⅱ、AGG和Sox9基因表达的影响 被引量:10 2015年 目的:研究人重组骨形成蛋白-7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)对国产多孔钽/软骨细胞复合物中软骨细胞分泌功能以及Ⅱ型胶原(typeⅡcollagen,Col-Ⅱ)、蛋白聚糖(aggrecan,AGG)和SRY相关高迁移率组基因9(SRY-related high mobility group-box gene 9,Sox9)mRNA表达的影响。方法:3周龄新西兰幼兔,取双膝关节软骨细胞分离培养及鉴定,将生长状态良好的第2代细胞以1×106/m L浓度接种于多孔钽并给予不同浓度BMP-7,分为对照组(多孔钽/软骨细胞组)、50μg/L BMP-7/多孔钽/软骨细胞组、100μg/L BMP-7/多孔钽/软骨细胞组及200μg/L BMP-7/多孔钽/软骨细胞组。CCK-8法检测不同浓度BMP-7对多孔钽/软骨细胞生长及增殖的影响,扫描电镜观察各组软骨细胞在多孔钽表面及内部生长情况,二甲基亚甲蓝(dimethyl methylene blue,DMMB)比色定量法对BMP-7/多孔钽/软骨细胞复合物糖胺多糖(glycosaminoglycan,GAG)进行定量检测,实时荧光定量PCR检测Col-Ⅱ、AGG和Sox9 mRNA的表达。结果:原代软骨细胞培养24 h后呈梭形生长,4 d后细胞呈多角形,胞浆丰富。阿辛蓝(alcian blue)、番红O(safranin O)、Col-Ⅱ免疫细胞化学染色均呈阳性反应。CCK-8法细胞增殖检测结果显示,100μg/L BMP-7/多孔钽/软骨细胞组细胞增殖水平高于其他各组(P<0.05)。扫描电镜示各组软骨细胞在多孔钽表面生长状态良好,细胞有多个突起、伸展、叠层生长并覆盖于多孔钽表面。GAG定量检测显示,100μg/L BMP-7/多孔钽/软骨细胞组GAG含量比其他各组均明显升高(P<0.05);实时荧光定量PCR检测显示,各实验组Col-Ⅱ、AGG和Sox9 mRNA表达量均高于对照组,以200μg/L BMP-7/多孔钽/软骨细胞组升高最为明显(P<0.05)。结论:BMP-7/多孔钽/软骨细胞复合体能促进体外软骨细胞增殖及细胞外基质的分泌,促进软骨基因的表达。 张辉 李亮 王茜 甘洪全 王辉 毕成 李琪佳 王志强关键词:骨形态发生蛋白7 钽 软骨细胞 葡糖氨基聚糖类 成骨细胞及血管内皮细胞复合同种异体颗粒骨治疗大鼠股骨头坏死 被引量:3 2011年 目的探讨骨髓基质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs)来源的大鼠同种异体成骨细胞(osteo-blast,OB)及血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VEC)与同种异体颗粒骨复合后治疗大鼠创伤性股骨头坏死(osteo-necrosis of the femoral head,ONFH)的可能性。方法 36只6月龄SD大鼠,分为模型组、同种骨组及OB+VEC+同种骨组(n=12)。同时取4周龄SD大鼠BMSCs体外分离培养,取第3代细胞复合同种颗粒骨;制备大鼠创伤性股骨头坏死动物模型(圆韧带离断法)并分别在术后1、2、4、6周处死动物并取材。扫描电镜观察两种细胞在支架上的生长情况;免疫细胞化学技术检测诱导后血管内皮细胞CD34、CD31的表达;碱性磷酸酶(ALP)染色及Ⅰ型胶原免疫细胞化学染色鉴定成骨细胞;5-溴脱氧尿嘧啶(5-bromo-2-deoxy Uridine,BrdU)体外标记成骨细胞及内皮细胞,动物体内示踪两种细胞动力学。光镜观察病理形态改变;通过骨形态计量学参数计算新骨生成量,包括骨小梁面积百分率(percent trabecular area,%Tb.Ar)、骨小梁厚度(trabecular bone thickness,Tb.Th)、骨小梁数量(trabecular bone number,Tb.N)、骨小梁分离度(trabecular bone separation degree,Tb.Sp)。结果 BMSCs诱导来源的成骨细胞其ALP染色及Ⅰ型胶原免疫组化染色均呈阳性反应;血管内皮细胞表达了其标志物CD31、CD34。两种细胞与同种骨有良好的组织细胞相容性,细胞在其表面及壁内平铺、伸展、生长状态良好。OB+VEC+同种骨组新骨生成量均多于模型组及同种骨组,各项新骨形成参数均高于模型组及同种骨组(P<0.01)。结论 OB+VEC+同种骨支架材料在治疗实验性大鼠ONFH中其促成骨能力优于单纯同种异体颗粒骨。 李琪佳 郭静 甘洪全 宋会平 白俊清 王志强关键词:骨髓基质干细胞 成骨细胞 血管内皮细胞 同种异体骨 股骨头坏死 国产多孔钽对成骨细胞生物相容性及其相关成骨基因表达的影响 被引量:15 2014年 目的 探讨国产多孔钽材料对成骨细胞粘附、增殖及成骨基因OPN、OC及FN mRNA表达的影响。 方法 分离培养新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞并鉴定。根据国家标准制备多孔钽浸提液,以多孔钽浸提液与成骨细胞作为实验组,以DMEM完全培养基培养成骨细胞作为对照组。MTT法检测多孔钽浸提液对成骨细胞生长及增殖的影响;倒置相差显微镜及扫描电镜观察成骨细胞在多孔钽上粘附、生长及增殖的情况;实时荧光定量PCR技术检测OPN、OC及FN mRNA的表达并进行定量分析。 结果 肉眼及扫描电镜观察多孔钽外观呈深灰色、多孔状三维立体结构,表面及断面均匀分布直径400~600 μm的微孔,内部孔隙相互连通。MTT法检测结果显示,实验组及对照组成骨细胞培养1~8 d,除第3天外,各时间点细胞光密度值差异无统计学意义(P〉0.05)。成骨细胞种植于多孔钽培养结果显示,材料表面和孔隙内细胞叠层生长,分泌的骨基质完全覆盖材料表面。实时荧光定量PCR检测结果显示,实验组成骨基因OPN、OC、FN mRNA的相对表达量分别为1.45、1.79、1.69。 结论 国产多孔钽材料具有良好三维立体空间构型及良好的生物相容性,可刺激成骨细胞的粘附、增殖及成骨基因OPN、OC及FN mRNA的表达。 耿丽鑫 甘洪全 王茜 张辉 刘英杰 王志强 李琪佳关键词:成骨细胞 细胞增殖 生物相容性 改良Akin截骨在外翻手术中的应用分析 2014年 目的探讨在拇外翻手术中应用改良Akin截骨治疗拇外翻的临床疗效。方法2005年10月2013年2月,在拇外翻手术时应用Akin截骨治疗40例55足,年龄25~70岁,平均56.4岁,观察其临床疗效。结果40例患者均获随访,随访时间0.5~6年,平均35.3个月,采用美国AOFAS评分,优29例,良9例,可1例,其中1例出现拇趾僵硬,优良率95.0%。结论Akin截骨在与其他拇外翻手术联合使用能矫正近节趾骨外翻,操作简单、方便,外观改善明显。 刘志权 甘洪全 刘利峰 邓华民 史伟 王志强关键词:拇外翻 畸形 骨科手术 国产多孔钽材料兔竖脊肌植入组织学及生物学效应 被引量:8 2014年 目的:观察国产多孔钽材料的三维孔隙结构以及兔竖脊肌植入后组织形态学特点,对其组织相容性进行评价,为临床骨缺损修复重建提供实验依据。方法:扫描电镜观察国产多孔钽结构;成年新西兰大白兔24只,建立多孔钽兔竖脊肌植入动物模型。将2枚直径1.5 cm。厚0.2 cm圆型多孔钽植入脊柱一侧竖脊肌内(实验组),对侧植入同等数量及体积的多孔钛(对照组)。于术后2。4。8。12 周处死行硬组织切片观察肌肉周围纤维包膜及新生血管形成,并计算小血管生成数量;扫描电镜观察肌肉组织在两种材料内的生长状态。结果:扫描电镜观察多孔钽具有三维立体多孔结构,孔隙直径在400-600 μm;肌肉及纤维组织早期在多孔钽表面及孔隙内生长;晚期胶原纤维延展,相互连接并充满孔隙。硬组织切片显示:随时间的延长多孔钽-肌肉界面形成薄而致密的血管化包膜。孔隙内充满肌肉。纤维组织及小血管。结论:国产多孔钽材料具有良好的组织相容性,其三维结构可使肌肉组织在表面及孔隙内生长及延伸,有可能成为骨缺损修复材料。 甘洪全 刘鑫 赵济华 耿丽鑫 王茜 王志强 李琪佳关键词:组织相容性 医用多孔钽材料对大鼠软骨细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响 被引量:3 2014年 [目的]观察国产多孔钽材料对大鼠软骨细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响,为其作为软骨组织工程支架材料临床应用提供实验依据。[方法]选用3周龄SD大鼠双侧股骨头、膝关节分离软骨组织,经Ⅱ型胶原酶消化,饱和湿度培养,传代。倒置显微镜下逐日观察细胞生长状态。待第2代细胞生长至80%左右时,通过甲苯胺蓝染色、番红O-固绿染色以及Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色进行软骨细胞鉴定。以F12-DMEM为浸提介质分别制备100%、50%、25%多孔钽浸提液,软骨细胞加不同浓度多孔钽浸提液作为实验组,未加浸提液的软骨细胞作为对照组;MTr法检测多孔钽浸提液对软骨细胞增殖的影响及细胞毒性检测。将第2代软骨细胞接种到多孔钽支架上进行体外三维培养,而对照组是将软骨细胞接种到无支架的培养板上,倒置相差显微镜观察两组软骨细胞生长状态;胰酶消化复合于材料上的软骨细胞,流式细胞仪检测软骨细胞的细胞周期变化及细胞凋亡。[结果]软骨细胞接种初期大小不等,呈圆形悬浮于培养液中,24h后贴壁细胞伸展呈三角形、多角形等。第7—-9d待细胞生长呈现融合时即可传代。甲苯胺蓝染色显示软骨细胞胞浆内可见蓝紫色颗粒,番红O-固绿染色显示胞浆呈绿色、细胞核呈紫红色,Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色显示阳性信号位于胞浆及部分胞膜,以上方法证实了分离培养的细胞为软骨细胞;bwr法检测显示随着培养时间的延长,各浓度浸提液组细胞生长与对照组无明显差异,软骨细胞形态正常,贴壁增殖良好,相同时间点不同浓度的浸提液与对照组间细胞增殖差异无统计学意义(P〉0.05),提示软骨细胞在多孔钽浸提液中生长、增殖状态良好且多孔钽材料无毒性。多孔钽支架材料外观灰色光亮,表面及断面可见分布均匀的蜂窝状孔隙,� 张岭 李琪佳 甘洪全 刘英杰 王志强关键词:细胞周期 凋亡 软骨组织工程 自体骨与同种异体骨治疗兔桡骨骨缺损的实验对比研究 被引量:6 2011年 目的:探讨采用同种异体骨治疗兔桡骨骨缺损疗效的实验研究。方法:将12只健康成年新西兰大白兔作为同种异体骨供体,28只作为实验受体。按美国组织库标准制备同种异体骨。将受体实验动物双侧桡骨中段切除10 mm,制成骨缺损模型。受体实验动物右侧桡骨骨缺损内植入自体髂骨骨粒(对照组);左侧取等量同种异体骨粒同法植入(实验组)。于术后2、4、8、12周,对骨缺损修复组织内OPG蛋白的表达检测采用免疫组织化学方法。术后12周,检测两组骨小梁相对体积、骨小梁数量和骨密度。结果:术后两组未见感染现象发生。术后2、4周实验组OPG蛋白表达低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。术后8、12周两组OPG蛋白表达差异无统计学意义。术后12周两组骨小梁相对体积、骨小梁数量和骨密度比较,差异无统计学意义。结论:同种异体骨具有较好的组织相容性,其骨性愈合过程与自体骨移植相似,并且来源广泛,能够避免因自体骨移植带来的诸多并发症,可以成为治疗骨缺损的重要材料。 杨文成 陈涛 甘洪全 王志强 白俊清关键词:自体骨 同种异体骨 骨缺损 医用多孔钽材料复合大鼠软骨细胞的生长特性及功能变化 被引量:8 2014年 目的评价多孔钽材料复合大鼠软骨细胞的体外生长特性及功能变化。方法选取3周龄SD大鼠,分离关节软骨细胞并进行体外扩增培养,取生长状态良好的第2代细胞,鉴定后以1×106/ml密度接种于多孔钽上进行复合培养。采用倒置相差显微镜、扫描电镜、透射电镜观察软骨细胞在多孔钽上的形态特点,比色法测定复合培养的软骨细胞中糖胺多糖(GAG)的含量。结果经Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色、甲苯胺蓝染色及番红O染色鉴定所获细胞为软骨细胞。倒置相差显微镜观察可见多孔钽边缘及培养板底部黏附大量软骨细胞;扫描电镜观察可见软骨细胞在多孔钽表面及孔隙内黏附、伸展、增殖,并分泌细胞外基质;透射电镜观察显示软骨细胞内超微结构大小及形态无明显改变;比色法检测显示软骨细胞在多孔钽支架上可持续分泌GAG。结论多孔钽材料与软骨细胞体外共培养显示出良好的生物相容性,适合作为软骨组织工程的支架材料。 张岭 李琪佳 赵季华 薛荣 甘洪全 刘英杰 王志强关键词:生物相容性材料 软骨细胞