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基于AFM对蝙蝠葛碱诱导NB4细胞凋亡的研究被引量：5: 2012年; 【目的】探讨蝙蝠葛碱对急性早幼粒细胞白血病(APL)NB4细胞增殖的影响和可能的细胞凋亡机制。【方法】采用CCK-8法检测NB4细胞的存活率,原子力显微镜(AFM)探测蝙蝠葛碱作用NB4细胞前后细胞形态及超微结构的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率、线粒体膜电位和活性氧的变化。【结果】蝙蝠葛碱能显著抑制NB4细胞生长增殖,20～80μmol/L蝙蝠葛碱处理细胞24 h后,细胞存活率从(86.5±11.7)%下降到(4.1±0.5)%;以10～40μmol/L蝙蝠葛碱处理NB4细胞24 h,流式细胞术分析显示,细胞凋亡率和细胞内活性氧含量上升、线粒体膜电位下降。AFM探测表明,正常NB4细胞呈圆形,细胞饱满,表面较光滑。蝙蝠葛碱处理组细胞皱缩,细胞表面的平均粗糙度增大。【结论】蝙蝠葛碱能显著抑制NB4细胞增殖并诱导其凋亡。; 陈伟王穗湘胡小毛邢晓波蔡继业; 关键词：蝙蝠葛碱 NB4细胞原子力显微镜超微结构细胞凋亡

微小隐孢子虫LDH基因的克隆与序列分析被引量：2: 2010年; 目的克隆微小隐孢子虫(Cryptosporidiumparvum,Cp)南京株(NJ)乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)基因,测序并分析微小隐孢子虫NJ株CpLDH与其他隐孢子虫分离株LDH基因序列的差异。方法根据微小隐孢子虫已知LDH基因序列设计合成2对引物,应用巢式PCR技术从微小隐孢子虫NJ株基因组DNA中扩增LDH基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,阳性克隆的重组质粒经PCR及双酶切鉴定后,用双脱氧链终止法对重组质粒中的插入序列进行测序,应用生物信息学方法分析CpLDH基因序列和其他物种LDH序列的同源性。结果巢式PCR扩增得到特异的CpLDH基因序列,经PCR及双酶切鉴定获得了正确的pMD18-T-CpLDH重组质粒。测序表明,NJ株微小隐孢子虫LDH基因全长966bp,编码322个氨基酸,该基因序列已登录GenBank,登录号为HM001298。序列分析表明,我国微小隐孢子虫NJ株与国外分离的Iowa II株LDH基因编码的氨基酸序列具有98%的同源性。结论成功克隆了微小隐孢子虫NJ株LDH基因;序列测定及同源性分析表明,微小隐孢子虫NJ株在LDH酶关键结构位点存在突变。; 郭志云杨光荆春霞付芹芹孙小会王穗湘李月琴余新炳周天鸿; 关键词：微小隐孢子虫乳酸脱氢酶巢式PCR 生物信息学

微小隐孢子虫腺苷酸激酶基因克隆及分析被引量：1: 2011年; 目的获得微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum,Cp)南京(NJ)株的腺苷酸激酶(adenylate kinase,AK)基因的核苷酸和氨基酸序列,比对分析与其他隐孢子虫株AK基因序列的差异。方法采用昆明种小鼠建立微小隐孢子虫NJ株感染模型,根据GenBank微小隐孢子虫Iowa II株AK基因已知序列设计合成2对引物,应用巢式PCR方法从微小隐孢子虫NJ株基因组DNA中扩增AK基因,并将其克隆入pMD18-T载体;对重组质粒pMD18-T-CpAK经PCR及酶切鉴定后测序,应用生物信息学方法分析微小隐孢子虫NJ株AK基因与其他虫株的核苷酸和氨基酸序列差异。结果巢式PCR扩增获得特异的AK基因序列,酶切及PCR鉴定为正确的pMD18-T-CpAK重组质粒,扩增序列为903bp,含隐孢子虫AK全长基因663 bp;核苷酸序列测定及同源性分析表明,微小隐孢子虫NJ株AK基因与人隐孢子虫TU502 type 2株AK的同源性为99%,与微小隐孢子虫Iowa II株AK序列同源性为98%;进化树分析表明,微小隐孢子虫NJ株的AK基因与人隐孢子虫TU502 type 2株AK基因亲缘关系最近。结论成功克隆到微小隐孢子虫NJ株AK基因并获得GenBank基因登录号(HM067440),该AK基因在不同物种间高度保守。; 付芹芹荆春霞杨光郭志云孙小会王穗湘李月琴周天鸿; 关键词：隐孢子虫克隆生物信息学

微小隐孢子虫CRIP基因克隆与分析: 2013年; 目的比对分析微小隐孢子虫南京(NJ)株亲环素-RNA相互作用蛋白(CRIP)与其他隐孢子虫株CRIP基因序列的差异。方法根据GenBank微小隐孢子虫IowaⅡ株CRIP基因序列设计并合成2对引物,应用巢式聚合酶链反应(PCR)技术从微小隐孢子虫NJ株基因组DNA中扩增CRIP基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,将重组质粒pMD18-T-CpCRIP进行PCR和双酶切鉴定后测序,应用生物信息学方法分析微小隐孢子虫NJ株CRIP基因与其他种属的CRIP基因序列同源性。结果巢式PCR扩增获得的特异性CRIP基因序列,经PCR及双酶切鉴定确为pMD18-T-CpCRIP重组质粒;测序结果显示,该序列有119 bp,微小隐孢子虫NJ株CRIP基因全长为909bp,编码302个氨基酸;测序结果和同源性分析显示,中国微小隐孢子虫NJ株CRIP基因序列与国外的微小隐孢子虫Iowa II株同源性为98%;该隐孢子虫NJ株CRIP基因序列获GenBank登录号JQ396883。结论微小隐孢子虫NJ株CRIP基因与其他微小隐孢子虫株存在基因变异。; 王穗湘荆春霞陈川郭志云孙小会付芹芹张丽菊杨光; 关键词：生物信息学

微小隐孢子虫亲环素型肽脯氨酰顺反异构酶基因克隆与分析: 2012年; 目的克隆微小隐孢子虫(C.parvum)南京株(NJ)亲环素型肽脯氨酰顺反异构酶基因,测序并分析C.parvumNJ株与其他隐孢子虫分离株CyP-type PPIase基因序列的差异以及亲缘关系。方法根据GenBank上C.parvumIowa II株CyP-type PPIase基因序列,设计2对引物,应用巢式PCR扩增目的基因,并将其克隆入pMD18-T载体,对重组子进行双酶切和菌落PCR鉴定并测序,应用生物信息学方法分析C.parvum NJ株CyP-type PPIase基因与其它隐孢子虫株的核苷酸和氨基酸序列差异。结果巢式PCR扩增获得特异的目的基因,双酶切和菌落PCR鉴定获得正确的重组子,测序表明,扩增基因组DNA序列为746bp,含有目的基因ORF全长570bp,编码190个氨基酸。序列分析表明,我国C.parvum NJ株与国外分离的Iowa II株CyP-type PPIase基因的氨基酸序列具有99%的同源性。进化树分析表明,C.parvumNJ株与Iowa II株CyP-type PPIase基因之间的亲缘关系最近,与脑膜炎双球菌的亲缘关系最远。结论成功克隆C.parvumCyP-type PPIase基因,C.parvumCyP-type PPIase基因在氨基酸水平高度保守。; 付芹芹杨光王穗湘孙小会郭志云张丽菊陈川刘国宁荆春霞; 关键词：微小隐孢子虫克隆

AFM研究蝙蝠葛碱对daudi细胞毒性的影响被引量：3: 2012年; 利用原子力显微镜、CCK-8实验和流式细胞术研究了蝙蝠葛碱(dauricine)对B细胞淋巴瘤daudi细胞的细胞毒性。蝙蝠葛碱能显著抑制daudi细胞的增殖。CCK-8实验表明,细胞存活率与蝙蝠葛碱浓度存在时间依赖和剂量依赖关系。经10～50μmol/L的蝙蝠葛碱作用24 h后,daudi细胞存活率从(89.8±4.3)%降至(11.2±3.2)%;48 h后,存活率从(68.9±2.6)%降至(2.5±0.5)%。流式细胞术表明蝙蝠葛碱处理dau-di细胞24 h后,凋亡率从5.2%增至28.2%(60μmol/L)。AFM数据显示对照组细胞呈圆形,表面较光滑。经蝙蝠葛碱处理后,daudi细胞坍塌,超微结构显示细胞表面粗糙、凹凸不平。此外,经不同浓度蝙蝠葛碱作用的daudi细胞,其线粒体膜电位随着药物浓度的加大而降低。蝙蝠葛碱能显著抑制daudi细胞生长增殖。; 陈伟王穗湘胡小毛刑晓波蔡继业; 关键词：蝙蝠葛碱原子力显微镜细胞毒性 DAUDI细胞

微小隐孢子虫含EF-hand结构域蛋白家族的生物信息学研究被引量：1: 2012年; 目的对微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum,Cp)含EF-hand结构域家族蛋白进行生物信息学研究,探讨该家族蛋白的EF-hand结构域与Ca2+信号的关系以预测该家族蛋白的功能,为隐孢子虫病的诊断和治疗提供新的方向。方法首先通过数据收集,获得EF-hand结构域家族蛋白的序列信息,接着对每个蛋白进行CDD结构域搜索和NCBI BLAST的比对分析,确证为EF-hand结构域家族蛋白,最后进行结构域分析和功能预测。结果搜索到了C.parvumIowa II中18个含有EF-hand结构域的蛋白,它们之间的氨基酸长度,分子量大小以及等电点等都有很大的区别,通过结构域分析把EF-hand家族分成了含一个EF-hand结构域、二个EF-hand结构域、同时含EF-hand和STKc-AGC两种结构域和同时含EF-hand和PKC两种结构域四大类。结论 EF-hand结构域蛋白家族与重要的钙离子信号作用有着密切的关系,而C.parvum对宿主细胞的侵袭能力与胞内的Ca2+水平密切相关,所以EF-hand蛋白家族很有可能成为隐孢子虫病治疗的一个新的突破点。; 郭志云杨光荆春霞付芹芹孙小会王穗湘李月琴周天鸿; 关键词：微小隐孢子虫 CA2+

微小隐孢子虫20K亲环蛋白基因克隆及分析: 2013年; 目的克隆微小隐孢子虫(Cp)南京株(NJ)的20K亲环蛋白(CyP)基因,并对其核苷酸和氨基酸序列进行分析。方法采用昆明种小鼠建立微小隐孢子虫NJ株感染模型,根据微小隐孢子虫Iowa II株20K CyP基因序列设计合成2对引物,应用巢式PCR技术从微小隐孢子虫NJ株基因组DNA中扩增20K CyP基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,将阳性克隆重组质粒进行菌落PCR及双酶切鉴定;应用生物信息学方法分析微小隐孢子虫NJ株20K CyP基因与其他虫株核苷酸和氨基酸序列差异,并分析该基因蛋白结构域。结果巢式PCR扩增得到特异的20K CyP基因,经PCR及双酶切鉴定获得了正确的pMD18-T-20K CyP重组质粒;测序结果显示,微小隐孢子虫NJ株20K CyP基因全长519 bp,编码173个氨基酸,该基因已登录GenBank,登录号为JQ284431;氨基酸序列分析表明,微小隐孢子虫NJ株与Iowa II株20K CyP基因编码的氨基酸序列具有100%同源性;对20K Cyp基因进行蛋白结构域分析,显示该基因序列所编码的蛋白具有特异性类亲环蛋白A、B、H的肽脯氨酰顺反异构酶(PPIase)区域,该区域与人的亲环蛋白A、B、H具有相似性。结论成功克隆微小隐孢子虫NJ株20K CyP基因,该基因具有高度保守性。; 孙小会杨光王穗湘张丽菊付芹芹郭志云陈川荆春霞; 关键词：克隆生物信息学

隐孢子虫CypA蛋白对单核巨噬细胞系THP-1细胞的免疫调控作用研究: 研究目的：隐孢子虫亲环素(Cyclophilin，CypA)是否为分泌性蛋白，对免疫细胞具有功能调控作用尚不清楚，研究隐孢子虫CypA对巨噬细胞的功能调控作用，筛选对巨噬细胞具有调控作用的CypA来源的多肽，并揭示其调...; 王穗湘; 关键词：隐孢子虫 CYPA THP-1细胞; 文献传递

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王穗湘

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