王晓梦
- 作品数：7 被引量：98H指数：4
- 供职机构：河南农业大学牧医工程学院禽病研究所更多>>
- 发文基金：河南省高校科技创新团队支持计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 禽支气管炎病毒Jin-13分离株在SPF鸡体内的动态分布
- 本研究旨在探究禽传染性支气管炎病毒(IBV)感染SPF鸡后在体内的动态分布。针对IBVJin-13毒株N基因设计并合成一对引物,建立了检测IBV SYBR Green I荧光定量PCR方法。人工感染90日龄SPF鸡1、4...
- 李欢杨霞赵军常洪涛王晓梦刘红英张秀平王新卫王川庆
- 关键词：传染性支气管炎病毒SPF鸡
- 文献传递
- 禽支气管炎病毒Jin-13分离株在SPF鸡体内的动态分布
- 本研究旨在探究禽传染性支气管炎病毒(IBV)感染SPF鸡后在体内的动态分布。针对IBV Jin-13毒株N基因设计并合成一对引物,建立了检测IBV SYBR Green I荧光定量PCR方法。人工感染90日龄SPF鸡1、...
- 李欢杨霞赵军常洪涛王晓梦刘红英张秀平王新卫王川庆
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒实时荧光定量PCR
- 文献传递
- 分泌抗猪流行性腹泻病毒中国变异株S蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立被引量：7
- 2016年
- 以纯化的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)中国变异株(CH/ZMDZY/11)S蛋白N端高变区(22-380aa)重组蛋白为抗原免疫BALB/C小鼠,以纯化CH/ZMDZY/11全病毒及带His标签的重组蛋白分别为筛选抗原,利用淋巴瘤杂交技术获得了一株稳定分泌抗S蛋白特异性单克隆抗体细胞株,命名为2D1。该株杂交瘤细胞诱生小鼠产生的腹水抗体效价为1∶3 200,免疫球蛋白类型为IgM。ELISA检测该单抗与PEDV流行株及PEDV CV777疫苗株全病毒的反应显著差异,可区分流行毒株和疫苗毒株;但该单抗用于Western blot不能区分PEDV流行株和疫苗株。ELISA及Western blot试验结果显示,该单抗有较好的PEDV特异性,可用于检测PEDV。
- 雷喜梅陈静杨盼盼赵永祥王晓梦赵军王川庆
- 关键词：猪流行性腹泻病毒纤突蛋白单克隆抗体BLOT
- 2010～2012年华中地区猪流行性腹泻病毒分子特征和遗传进化分析被引量：81
- 2013年
- 2010年底开始,猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)在中国境内出现严重暴发。为探讨该病突然再次暴发的原因,对2010年10月至2012年6月于华中地区11个地市收集的12株猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemic diarrhea virus,PEDV)S、M和ORF3基因进行RT-PCR扩增、克隆及测序,并对其序列变化、遗传进化关系、抗原位点、糖基化位点和多肽极性进行分析。结果显示,12株PEDV流行毒株S、M和ORF3基因部分核苷酸及氨基酸的改变使其关键序列明显不同于以往毒株,其中有11株流行毒株的S基因比现用疫苗毒株CV777多9个核苷酸,而且在其S1区N′端存在大量的氨基酸突变。遗传进化分析显示,12株PEDV华中地区毒株与2007～2009年韩国毒株、2007～2008年泰国毒株、2009～2010年越南毒株、2011年日本毒株及2010～2012年中国其它地区流行毒株亲缘关系均较密切,而与欧洲株(CV 777、Br1/87)、中国现用疫苗株(CV777)及2003～2007年中国分离株(LJB/03、JS-2004-2、DX、QH、LZC)亲缘关系均较远。与现用疫苗株(CV777)相比,流行毒株S蛋白的抗原位点、糖基化位点和跨膜螺旋均有明显改变,提示PEDV在近年呈现快速变异和进化的趋势,因而可能需要选择更有效的疫苗株来控制PEDV的暴发。
- 郑逢梅霍金耀赵军常洪涛王晓梦陈陆王川庆
- 关键词：系统进化分析S基因ORF3基因M基因病毒变异
- 鸭源鸡杆菌毒素蛋白GtxA表达与间接ELISA方法的建立
- 鸡杆菌能够引起母鸡上呼吸道及下生殖道的感染,广泛分布于鸡体内.鸭源鸡杆菌是该属的代表种.扩增鸡杆菌毒力基因gtxa全长序列,并对GtxA蛋白的抗原性进行预测.将gtxa基因的部分抗原表位区序列克隆至pGEX-6P-1载体...
- 李欢杨霞赵军陈陆常洪涛王新卫王晓梦赵永祥王川庆
- 关键词：间接ELISA抗体监测
- PEDV中国流行株和疫苗株S蛋白免疫反应性差异分析被引量：7
- 2015年
- 为分析PEDV流行株和疫苗株S基因差异对疫苗免疫效果影响,分别在大肠杆菌中表达PEDV流行株CH/ZMDZY/11与疫苗株CV777S蛋白差异较大的N端（22～380aa）区域（SA）,将纯化的SA蛋白免疫小鼠获得多克隆抗体,并以SA蛋白为抗原,通过Western Blot及间接ELISA的方法检测2种蛋白与多克隆抗体的反应性差异。结果表明,抗PEDV疫苗株SA蛋白（YSA）多抗与疫苗株SA蛋白的反应性明显高于与流行株SA蛋白（LSA）的反应性;与此相反,抗PEDV流行株SA蛋白多抗与流行株SA蛋白的反应性明显高于与疫苗株SA蛋白的反应性。研究结果提示,PEDV S蛋白22～380aa区域存在差异性抗原表位,PEDV流行株和疫苗株S基因的差异可能是导致基于CV777疫苗株的PED疫苗免疫效果不好的原因。本研究将为开发PEDV流行株亚单位疫苗用于预防临床PEDV流行株的感染提供理论依据。
- 陈静杨盼盼雷喜梅王晓梦高冬生常洪涛杨霞陈陆赵军王川庆
- 关键词：S蛋白免疫反应性
- 基于PEDV中国变异株S蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与应用被引量：6
- 2014年
- 以纯化的重组猪流行腹泻病毒(PEDV)中国变异株S蛋白为包被抗原,建立了检测PEDV流行株抗体的间接ELISA方法。所建方法最佳反应条件为:抗原最适包被量为1μg/孔,包被时间为37℃1h后4℃过夜;血清工作浓度为1∶100,作用时间为1.5h;二抗选用HRP标记的兔抗猪IgG稀释度为1∶4 000,作用时间为1.5h;显色液TMB作用时间为15min;判定标准为,样品S/P值大于等于0.058判定为阳性,小于0.045判定为阴性。所建ELISA方法具有良好的特异性和重复性。对50份疑似猪流行性腹泻血清样品进行检测,该方法与PEDV病原检测结果有较高的符合率。结果表明本研究所建立ELISA方法可用于PEDV流行株抗体检测和疫病监测。
- 陈静王晓梦杨盼盼雷喜梅刘金玲李晓静赵军王川庆
- 关键词：S蛋白间接ELISA
