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H5亚型禽流感病毒样颗粒的构建及生物学活性鉴定被引量：2: 2012年; 为构建H5亚型禽流感病毒(AIV)病毒样颗粒(VLPs),并鉴定其生物学活性,本研究通过杆状病毒/昆虫细胞表达系统,分别单独表达H5亚型AIV血凝素(HA)及共表达HA和基质蛋白(M1),并采用免疫组织化学法、SDS-PAGE、western blot和血凝试验等对重组蛋白进行鉴定。实验结果表明:透射电子显微镜观察结果显示,共表达HA和M1的重组蛋白可以形成VLPs,而单独表达HA未观察到VLPs;表达的重组蛋白HA和HA-M1均能够凝集鸡红细胞,血凝效价分别为1∶27和1∶28。结果显示该方法获得的AIV结构蛋白具有良好的生物学活性和抗原活性,从而为禽流感VLPs疫苗的研究提供依据。; 张超林刘春国王寿山石薇琳李建辉王伟王伟刘彦云; 关键词：流感病毒血凝素基因杆状病毒表达系统

H9N2亚型禽流感病毒HA和NA基因的序列分析被引量：2: 2012年; 禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）是正黏病毒科流感病毒属A型流感病毒。禽流感又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟,被国际兽医局（OIE）列为A类传染病。H9N2亚型AIV为低致病性禽流感病毒,虽然毒力较H5N1亚型AIV弱,; 王寿山张超林刘春国石薇琳刘彦云王伟王伟; 关键词：H9N2亚型禽流感病毒 NA基因低致病性禽流感病毒 A型流感病毒 H5N1亚型

H6N8亚型鸭流感病毒HA和NA基因的序列分析: 分离到一株H6N8亚型鸭源禽流感病毒,HA蛋白裂解位点附近氨基酸残基为(-PQIETR↓GLF-),分子水平上表明这是一株低致病性禽流感病毒。序列分析表明流感病毒分离株HA基因核酸和氨基酸序列均与2005年分离于广西的H...; 刘春国刘明李建辉石薇琳张超林王寿山; 关键词：禽流感病毒 HA和NA基因; 文献传递

H5亚型禽流感病毒样颗粒的构建及生物学活性鉴定: 为研究禽流感病毒(AIV)结构蛋白在昆虫细胞中的表达及其生物活性,本研究通过杆状病毒/昆虫细胞表达系统,单独表达H5亚型AIV血凝素(HA)及共表达HA和基质蛋白(M1),并采用免疫组织化学法,SDS-PAGE,west...; 张超林刘春国王寿山石薇琳李建辉王伟刘彦云刘明; 关键词：流感病毒血凝素基因杆状病毒表达系统; 文献传递

H6N8亚型鸭流感病毒HA和NA基因的序列分析: 到一株H6N8亚型鸭源禽流感病毒，HA蛋白裂解位点附近氨基酸残基为(-PQIETR ↓ GLF-)，分子水平上表明这是一株低致病性禽流感病毒。序列分析表明流感病毒分离株HA基因核酸和氨基酸序列均与2005年分离于广西的H...; 刘春国刘明李建辉石薇琳张超林王寿山

表达H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组腺病毒的构建及鉴定: 2013年; 为构建表达H 5N 1亚型clade 2.3.4禽流感病毒(AIV)HA基因的重组腺病毒,本研究通过RT-PCR扩增A/wild duck/Shandong/628/2011(H 5N 1)的H A基因,克隆于腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV中,构建重组腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV-HA。采用A d-Easy技术,制备表达AIVHA基因的复制缺陷型重组腺病毒rAd-H A。将rA d-HA感染Ad293细胞,可产生明显的细胞病变。通过细胞超薄切片观察到完整的腺病毒颗粒。经RT-PCR、间接免疫荧光及western blot证明HA基因在A d293细胞中成功转录和表达,并且表达的蛋白具有良好的生物学活性。本研究为新型H5N1亚型AIV活载体疫苗的研发奠定了基础。; 王伟王伟刘春国王寿山张超林刘彦云吕让; 关键词：禽流感病毒 H5N1亚型 HA基因重组腺病毒

H3N8亚型马流感病毒M1基因在昆虫细胞中的表达及活性分析: 2013年; 为建立H3N8亚型马流感血清学诊断方法,将H3N8亚型马流感病毒A/equine/Xinjiang/3/2007(H3N8)M1基因插入到杆状病毒转移载体pFastBac Dual中,构建重组转移质粒pFastBac Dual-M1;将pFastBac Dual-M1转化到DH10Bac感受态细胞中,通过蓝白斑筛选重组穿梭质粒rBD-M1;在脂质体转染试剂介导下将rBD-M1转染对数生长期的Sf9昆虫细胞,拯救重组杆状病毒rBV-M1;rBV-M1感染Sf9细胞后,通过Western-blotting和免疫组织化学染色进行蛋白表达分析。结果表明,获得了分子质量为27ku的特异性M1蛋白,而且该蛋白具有良好的免疫活性。M1蛋白的成功表达为以M1蛋白作为诊断抗原的研究奠定了基础。; 王伟王伟刘春国刘明张超林刘飞刘彦云王寿山王丹吕让; 关键词：马流感病毒杆状病毒表达

10株H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因的序列分析被引量：9: 2013年; 为了解中国目前H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)血凝素(HA)基因的遗传变异情况,对中国不同地区分离的10株H9N2亚型AIV的HA基因进行扩增、克隆和测序,并对所获得的HA全序列进行同源性和遗传进化分析。结果表明,10个分离株的裂解位点均为RSSR↓GLF,符合低致病性AIV的分子特征;10个分离株有7～9个潜在糖基化位点,由于基因突变有些HA基因出现了新的糖基化位点;与参考株相比,发现了4个抗原表位的突变,这些表位的突变可能引起病毒致病性的改变;受体结合位点除198位有变异外,其他位点均较保守;6株病毒234位氨基酸均为L,具有与哺乳动物唾液酸α,2-6受体结合的特征;10个分离株HA基因与国内疫苗株的核苷酸及氨基酸序列同源性分别为90.4%～99.2%和92.2%～98.7%;10个分离株同属于欧亚谱系中的A/duck/Hong Kong/Y280/97群,但差异显著,为此本试验又将其分为4个不同的亚群。人工感染排毒试验结果表明,BJ15和NJ17分离株在鸡体内具有较强的复制能力,排毒周期较长且排毒量也较大,而S145N的漂变导致在145—147位氨基酸多出1个糖基化位点NGT,可能是分离株复制能力增强的原因。; 刘彦云刘春国王寿山张超林王伟吕让刘明; 关键词：禽流感病毒 H9N2亚型 HA基因致病力

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王寿山