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汤加勇: 作品数：32 被引量：107H指数：6; 供职机构：四川农业大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金长江学者和创新团队发展计划重庆市自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生理学更多>>

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百脉根钙调素基因LjCaM4的3'-RACE克隆及其表达量分析被引量：2: 2017年; 本研究利用3'-RACE技术从百脉根中克隆了一个钙调素基因(Lj Ca M4),并利用荧光定量PCR技术对该基因在根、茎、叶、花和豆荚中的相对表达量进行了分析。结果显示,扩增得到642 bp的片段,开放阅读框为453 bp,3'非翻译区(3'-UTR)长189 bp,编码150个氨基酸,分子量约为17.13 k D,理论等电点为4.03。多序列比对显示Lj Ca M4与其它植物中的Ca Ms有较高的保守性,与蒺藜苜蓿的同源性高达91%。Lj Ca M4m RNA在百脉根各组织中均有分布,其中在根中表达量最高,依次为根>茎>叶>豆荚>花。本研究成功克隆并鉴定了百脉根Lj Ca M4基因,初步检测了该基因在百脉根各组织器官中的表达差异,为进一步探明该基因可能的生物学功能提供了一定的理论依据。; 舒茂荣秦宗志陈杨晗汤加勇廖进秋; 关键词：百脉根 LJ CA 荧光定量PCR

硒蛋白Sep15基因克隆、定点突变及其原核表达被引量：1: 2011年; 克隆鉴定猪硒蛋白Sep15基因(Sep15),将其突变实现原核表达,为以猪为模型研究Sep15功能奠定基础。实验以RT-PCR从猪脾总RNA扩增出含开放阅读框(ORF)至poly(A)共1230 bp的Sep15cDNA,3'-非翻译区Sec插入元件为2型,489 bp的ORF及对应氨基酸序列与人相应序列的相似度分别为85.1%和92.7%,ORF含一个硒代半胱氨酸(Sec)密码子TGA,定点突变为半胱氨酸(Cys)的TGC后,经载体pET30转入大肠杆菌BL21(DE3),0.4 mmol/L IPTG诱导表达3 h获得融合表达产物;该产物在Western blot检测中与人Sep15 Sec下游肽段的商品化多抗产生特异性免疫印迹。猪Sep15被首次成功克隆并鉴定,其Cys突变体的原核表达产物与人Sep15 C-端抗体存在交叉免疫反应。; 周继昌李黛淋汤加勇赵华刘小立朱玉梅徐健; 关键词：定点突变原核表达

一种利用混菌发酵技术改善木薯渣品质的方法: 本发明公开了一种利用混菌发酵技术改善木薯渣品质的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：将原料和水以1∶2的质量比混合均匀后，再接种混菌液，混菌液和原料按1∶4（v/w）的比例接种，用灭菌玻璃棒搅拌均匀，在35℃条件下发酵...; 赵华汤加勇汤小朋贾刚刘光芒陈小玲; 文献传递

超营养硒抑制了肉鸡三个免疫器官中硒蛋白基因表达: 本研究旨在考察超营养日粮硒(Se)对肉鸡三个免疫器官中硒蛋白基因表达的影响.试验共选用了160只科宝肉公鸡,随机分为两组,分别饲喂玉米-豆粕型基础日粮添加0.3mg/kg的硒(正常硒)或添加3.0mg/kg的硒(超营养硒...; 汤加勇黄晓凤王隆琼李强许敬洋贾刚刘光芒陈小玲蔡景义尚海英赵华; 关键词：肉鸡免疫器官

新型厌食神经肽nesfatin-1的分布和生物学功能: 2016年; nesfatin-1是新近发现的一种厌食神经肽,在中枢主要位于下丘脑和脑干,在外周主要分布于胃、肠、胰岛和性腺,其表达受到营养、生理、病理和其他摄食激素的调节。nesfatin-1在中枢神经元和外周细胞中与多种激素协同参与摄食和血糖稳衡等能量代谢过程,并激活下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)参与应激反应,还能作用于HPA影响发育期的启动。本文重点对nesfatin-1在中枢和外周的分布、影响其表达的因素以及生物学功能进行了综述。; 邓秋红贾刚赵华陈小玲刘光芒蔡景义汤加勇; 关键词：NESFATIN-1 生物学功能

一种高表达重组生物蛋白API及其制备方法和应用: 本发明公开了一种高表达重组生物蛋白API及其制备方法和应用，涉及毕赤酵母基因工程表达技术领域。本发明将溶菌酶‑抗菌肽融合表达基因进行优化，优化后API融合基因如SEQ ID NO.1所示，制备的融合蛋白对宿主菌株无毒害，...; 赵华汤加勇贾刚; 文献传递

复合益生菌固态发酵改善甘薯渣营养价值的研究被引量：22: 2015年; 本试验旨在研究采用多种微生物混合固态发酵对甘薯渣营养价值的影响,并探讨其最佳发酵工艺参数。采用单因素试验设计,对4类菌种共12株菌种进行单菌发酵,从中筛选1株发酵效果最优菌株作为混菌发酵的主菌种,与其他3类菌株进行不同组合发酵,筛选最佳菌种组合。采用正交试验设计,考察发酵时间、发酵温度、料水比、接种量及菌种接种比例对甘薯渣营养价值影响。结果表明:1)在发酵温度38℃,发酵时间4.5 d,料水比1∶1.3,接种量1×106个/g,接种比例黑曲霉2∶里氏木霉∶枯草芽孢杆菌1∶酿酒酵母1=1∶1∶2∶1条件下发酵效果最好。2)在混菌发酵后,以干物质为基础,粗蛋白质含量从6.37%提高到9.75%;粗脂肪含量从2.71%提高到4.92%;发酵后还原糖含量达到8.22%,羧甲基纤维素酶、滤纸酶、β-葡萄糖苷酶和淀粉酶活性分别为4.26、3.29、3.75和5.15 U/g DM。由此可见,农副产品甘薯渣经过微生物混菌固态发酵后可以有效改善其营养品质。; 赵华王雪涛汤加勇汤小朋贾刚刘光芒陈小玲龙定彪王康宁; 关键词：混合菌种固态发酵甘薯渣营养价值

细胞样Western Blot分析技术探讨被引量：4: 2017年; Western Blot分析技术是定性和定量检测蛋白的常用技术,其操作流程已很成熟;但我国很多分子生物学实验室起步较晚,其操作还存在较大困难。针对Western Blot实验效果不理想的情况,该文以动物细胞样品为研究对象,通过反复地摸索和分析,建立了一套细胞样品进行Western Blot分析的技术操作流程。实践表明,本研究结果为本实验室的Western Blot分析解决了操作技术问题,同时也为本实验室进行Western Blot分析建立了技术规范。; 汤加勇赵华; 关键词：蛋白印迹细胞聚丙烯酰胺凝胶电泳

硒蛋白X基因克隆、定点突变、原核表达及多克隆抗体制备: 2015年; 本试验旨在克隆鉴定猪硒蛋白X(Sel X)基因,将其定点突变后进行原核表达,获得重组蛋白,并制备猪Sel X多克隆抗体,为以猪为模型Sel X功能研究奠定基础。利用c DNA末端快速克隆(3'-RACE)技术从猪肝脏总RNA扩增出含开放阅读框(ORF)至poly(A)共1 215 bp的Sel X基因c DNA片段,其348 bp的ORF编码区和对应的氨基酸残基与人相应序列分别有88%和91%序列同源性,猪Sel X基因提交NCBI Gen Bank数据库,序列号为EF113597。ORF编码氨基酸残基中硒代半胱氨酸(Sec)位于C-端第95个残基,其编码密码子TGA经定点突变为半胱氨酸(Cys)的TGT后,将其插入载体p ET30,转入大肠杆菌BL21(DE3)中,在0.5 mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导2 h获得融合表达产物,经His-tag亲和层析后,获得分子质量为18.0 ku的纯化蛋白。将纯化获得的Sel X基因突变体融合蛋白(Sel Xm)免疫兔子,得到效价高达1∶20 000的多克隆抗体,免疫印迹(Western-blot)结果显示该抗体能特异性识别纯化的Sel Xm和猪肝脏中相应Sel X。本试验成功克隆并鉴定了猪Sel X基因,并制备了其多克隆抗体。; 赵华汤加勇曹蕾周继昌贾刚刘光芒陈小玲王康宁; 关键词：X基因克隆定点突变原核表达多克隆抗体

硒蛋白x基因沉默和过氧化氢处理对人正常肝脏细胞中硒蛋白基因表达和抗氧化酶活性的影响被引量：1: 2016年; 本试验旨在探讨硒蛋白x(Selx)基因沉默和过氧化氢(H2O2)处理对人正常肝脏细胞(LO2)中硒蛋白基因表达和抗氧化酶活性的影响,为探索Selx与其他硒蛋白之间的调控关系及Selx的功能奠定基础。对本实验室保存的Selx基因稳定沉默LO2细胞株(si Selx)和对照细胞株(CK),利用噻唑兰(MTT)法比较其生长速率;si Selx和CK用200μmol/L H2O2处理2.5 h后,采用荧光定量PCR技术考察25个硒蛋白基因的表达量;同时比较Selx基因沉默以及H2O2处理对LO2细胞株中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及总抗氧化能力(T-AOC)的影响。结果显示:1)Selx基因沉默显著降低了LO2细胞株的生长速率(P<0.05);2)Selx基因沉默显著上调了G px6、Txnrd2、Seli基因的表达量(P<0.05),显著下调了Dio2、Dio3、Selm、Sepw1基因的表达量(P<0.05);H2O2处理显著上调了Dio1基因的表达量(P<0.05),显著下调了G px2基因的表达量(P<0.05);Selx基因沉默后H2O2处理显著上调了G px6、Txnrd2、Dio1基因的表达量(P<0.05),显著下调了Txnrd3、Dio2、Selm、Sepw1、Selv基因的表达量(P<0.05);3)Selx基因沉默显著提高了LO2细胞株GSH-Px活性(P<0.05),显著提高了SOD的活性(P<0.05);Selx基因沉默后H2O2处理显著提高了GSH-Px活性(P<0.05)。由此可见,Selx基因沉默降低了LO2细胞株的生长速率,Selx基因沉默后H2O2处理影响部分硒蛋白基因在细胞中的表达量,同时也影响了GSH-Px、SOD活性。; 汤加勇赵华贾刚刘光芒陈小玲蔡景义吴彩梅; 关键词：沉默

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