毕逢辰
- 作品数：10 被引量：15H指数：2
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- FTP5通过抑制Cdk5活性调节胰岛β细胞的胰岛素分泌被引量：1
- 2013年
- 目的探讨FTP5通过抑制周期素依赖性蛋白激酶(Cdk5)活性调节高糖环境下胰岛β细胞分泌胰岛素的作用。方法体外培养小鼠胰岛β细胞株(Min6细胞)。①体外抑制实验。将Cdk5活性抑制肽(CIP)和P5蛋白与Cdk5+p25激酶在试管混匀测定酶的活性,分为:p25+Cdk5组、p25+Cdk5+CIP组,p25+Cdk5+P5组。②细胞内试验。应用腺病毒表达空载体(EV),含有p5的重组腺病毒(p5)、和FITC-TAT合成的短肽(FTP5),分别转染细胞并给不同浓度的葡萄糖3 mmol(低糖,LG)和25 mmol(高糖,HG)刺激,分组为LG+EV组、HG+EV组、HG+FTP5组、HG+p5组。用免疫印迹和免疫荧光检测Cdk5和p35等蛋白表达,同位素标记测定Cdk5的活性,酶联免疫吸附试验测定胰岛素的分泌水平。结果 p5与CIP均可抑制Cdk5的活性,且前者的抑制作用更强;①高糖可以诱发p35表达增高,抑制胰岛素分泌;②FTP5和p5均抑制在高糖(25 mmoL)刺激下的Cdk5活性、恢复胰岛素的分泌,FTP5的作用更强(P<0.05)。结论 FTP5可以抑制Cdk5的过度活性,恢复胰岛素分泌,在2型糖尿病治疗中可能有潜在的广阔前景。
- 张彬张霞毕逢辰高永才郑亚莉
- 关键词：周期素依赖性蛋白激酶5胰岛素P5
- Cdk5和TGF-β1在糖尿病肾病足细胞中的表达及其作用被引量：5
- 2015年
- 目的应用糖尿病肾病模型,观察周期素依赖性蛋白激酶5(Cdk5)和转化生长因子-β1(TGF-β1)在糖尿病肾病足细胞中的表达及其在足细胞损伤中的作用。方法分实验组和对照组2组,实验组,应用13周db/db小鼠作为糖尿病肾病小鼠模型;对照组,应用13周C57BL/6J小鼠作为正常对照模型。相同条件下喂养小鼠,1周后处死,取小鼠肾脏组织切片,免疫组化染色方法测定小鼠足细胞中TGF-β1、Cdk5及肿瘤蛋白-1(WT1)的表达,并进行统计学分析。结果实验组(db/db小鼠)足细胞中Cdk5表达水平(0.30±0.03)较对照组(0.27±0.25)明显升高(P<0.05);TGF-β1表达水平(0.26±0.03)较对照组(0.23±0.02)明显升高(P<0.05);足细胞特异性标志物WT1表达水平实验组(0.23±0.12)较对照组(0.26±0.02)明显降低(P<0.05)。结论糖尿病肾病小鼠足细胞中Cdk5和TGF-β1表达增多,可能是导致足细胞数量减少的原因,说明Cdk5、TGF-β1与足细胞凋亡机制密切相关。
- 毕逢辰保莉罗红艳郑亚莉
- 关键词：足细胞糖尿病肾病
- 高糖环境诱导胰岛表达p25引起胰岛细胞损伤的研究被引量：1
- 2015年
- 目的探讨在高糖环境中p25的表达及其对胰岛细胞损伤及胰岛素分泌的影响。方法实验分为db/db小鼠组(糖尿病组,n=5)和C57/BL小鼠组(正常对照组,n=5),进一步将从C57/BL小鼠胰岛分离的胰岛细胞组分为正常糖浓度糖刺组(5m M)和高浓度糖刺激组(30m M)。研究对象均为雄性小鼠,鼠龄13周,进行胰岛(islets)分离,培养及胰腺组织病理切片。用免疫印迹测定蛋白表达,酶联免疫法测定胰岛素分泌水平,免疫组化染色测定胰岛细胞凋亡。结果 p25在C57/BL组和C57/BL正常糖浓度刺激组的胰岛细胞均无表达,与之比较,p25在db/db组和C57/BL高糖刺激组的胰岛细胞均有明显的表达(P<0.05);与C57/BL组相比较,cleaved caspase3在db/db组胰岛细胞中的表达明显增加(P<0.05);与C57/BL组和C57/BL正常糖浓度组相比较,胰岛素分泌在db/db组和C57/BL高糖刺激组均明显减少(P<0.05)。结论高糖环境可刺激胰岛表达p25,引起胰岛细胞凋亡,减少胰岛素分泌。
- 罗红艳王岩刘冉冉张彬毕逢辰张霞李博郑亚莉
- 关键词：糖尿病模型胰岛胰岛素
- Cdk5在肾小球足细胞中的表达及作用被引量：3
- 2014年
- 目的研究周期素依赖性蛋白激酶-5(Cdk5)及其激活剂p35在肾小球足细胞中的表达及作用。方法分别培养原代小鼠神经细胞、原代小鼠分化成熟的离体足细胞(简称足细胞)以及人胚肾细胞(HEK293细胞),应用免疫印迹、免疫沉淀及同位素标记等方法检测Cdk5、p35的表达及Cdk5的活性;以原代小鼠分化成熟的离体足细胞为研究对象,分为正常组、ROS组(Cdk5活性抑制组)、Cdk5 siRNA组(Cdk5表达沉默组),观察Cdk5的表达及活性,并应用Cdk5 siRNA、Cdk5化学抑制剂-Roscovitine进行抑制实验。结果离体培养原代小鼠分化成熟的足细胞中均有Cdk5及p35蛋白的表达;Cdk5在足细胞中具有活性;沉默Cdk5表达、应用Cdk5活性抑制剂Roscovitine抑制Cdk5活性后,可引起足细胞特异性标志物WT1的表达减少,说明足细胞受到损伤,数量减少。结论 Cdk5的表达及活性在维持正常足细胞功能中起重要作用。
- 毕逢辰张彬郑亚莉
- 关键词：P35足细胞SIRNA
- nephrin及WT-1在嘌呤霉素大鼠肾病模型足细胞中的表达及意义被引量：2
- 2014年
- 目的应用嘌呤霉素氨基核苷(PAN)模型,研究足细胞相关蛋白nephrin和肿瘤蛋白-1(WT-1)在足细胞中的表达及在肾小球硬化进展过程中的意义。方法单次尾静脉注射嘌呤霉素氨基核苷制作PAN模型,在4、14及20周处死大鼠,取其肾脏,切片,nephrin及WT-1免疫组化染色,半定量分析后进行统计学分析。结果对照组免疫组化染色nephrin沿肾小球毛细血管襻呈较为均匀的黄褐色粗颗粒样的线状分布,4周时与对照组比较PAN组nephrin略有分布不均,部分区域染色减弱或消失(均值为10.23±1.256和8.23±0.88,P<0.05),14周时在有节段性硬化的区域nephrin无表达(均值为7.58±0.71和10.23±1.26,P<0.05),而在20周时硬化的区域基本无表达(均值为7.88±0.92和6.08±1.34,P>0.05),与对照组比较均有明显减少。4周时WT-1在足细胞核表达,呈深棕黄色粗大颗粒,与对照组比较无统计学意义(均值为10.14±2.02和10.11±1.56,P>0.05);14周时PAN组WT-1表达较对照组有所减少(均值为9.02±1.73和6.8±1.89,P<0.05);20周时与对照组比较PAN组WT-1明显减少(均值为7.34±1.22和4.43±1.01,P<0.05),足细胞数量随着时间的延长依次递减。结论 Nephrin的表达在肾小球硬化过程中进行性减少,甚至消失;WT-1的表达随着肾小球硬化的进展逐渐减少。Nephrin和WT-1表达的降低均反映足细胞的结构破坏和数量的减少,因此两者表达可反映足细胞损伤和肾小球硬化的关系。
- 保莉毕逢辰郑亚莉
- 关键词：嘌呤霉素氨基核苷肾小球硬化NEPHRIN足细胞
- 微炎症因子TGF-β1、TNF-α在2型糖尿病肾病中的表达及作用
- 研究目的： 探讨微炎症因子转化生长因子β1（Transforming growth factor，TGF-β1）及肿瘤坏死因子α（Tumor Necrosis Factor alpha，TNF-α）在2型糖尿病肾病（D...
- 毕逢辰
- 关键词：糖尿病肾病尿微量白蛋白肿瘤坏死因子Α
- 文献传递
- 转化生长因子β1在糖尿病肾病中的表达及与蛋白尿之间的关系
- 毕逢辰
- 关键词：转化生长因子Β1TGF-Β1糖尿病肾病蛋白尿
- Cdk5活性抑制肽CIP对糖尿病治疗作用机制的相关研究被引量：2
- 2013年
- 目的探讨周期性依赖性蛋白激酶5(Cdk5)的活性抑制肽(CIP)在糖尿病中的治疗作用及其机制。方法体外培养Min6小鼠胰岛细胞(以下简称胰岛细胞),应用基因克隆CIP质粒,转入腺病毒,转染细胞。根据是否导入CIP基因分为空载体组(EV组)和CIP转染组。应用不同浓度的葡萄糖(5 mmoL/l和25 mmol/L)刺激胰岛细胞,分为EV+5 mM组、EV+25 mM组、CIP+5 mM组、CIP+25 mM组。用免疫印迹和免疫荧光检测基因的表达和细胞凋亡情况,同位素标记测定酶的活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定胰岛素的分泌水平。体内试验,正常小鼠、糖尿病小鼠组、CIP+糖尿病小鼠组,喂养14周时腹腔内注射EV和CIP病毒,检测各组小鼠体重、血糖、糖化血红蛋白指标及各种分子病理实验。结果在同样浓度的高糖刺激Min6细胞下,Cdk5的活性在CIP组较EV组明显受到抑制(P<0.01);高糖(HG)+EV组较低糖(LG)+EV组细胞凋亡相关蛋白表达增加(P<0.01),而转染了CIP基因细胞的凋亡相关蛋白较HG+EV细胞明显下降(P<0.01);胰岛素基因的表达和分泌在EV组高糖刺激6 h的细胞较2 h的细胞明显降低,而转染CIP的细胞较EV细胞胰岛素基因的表达和分泌均明显升高(P<0.01);体内试验结果显示,体重、血糖和糖化血红蛋白指标,在db/db组与db/db+CIP组差异无统计学意义(P>0.05);细胞凋亡蛋白在db/db+CIP组较db/db组明显降低;胰岛素基因的表达db/db+CIP组较db/db组明显增高。结论 CIP可以降低Min6细胞由于高糖导致的Cdk5的过度活性,抑制胰岛细胞的凋亡,恢复胰岛素的分泌,这可能是CIP在糖尿病中起到保护性作用的机制之一。
- 陆晓华王慧郑亚莉张彬保莉毕逢辰曹丽李博
- 关键词：胰岛素细胞凋亡
- 通过测量肾小球面积评估嘌呤霉素肾炎大鼠肾小球硬化的过程被引量：1
- 2013年
- 目的研究不同时间点嘌呤霉素氨基核苷(PAN)大鼠肾病模型的肾小球面积,及其与肾小球硬化指数之间的关系,评估肾小球硬化的进展过程。方法成年雄性SD大鼠,体重200～250 g。PAN组大鼠尾静脉注射PAN,对照组注射等量生理盐水。成模后于4、14及20周处死大鼠,取其肾脏,石蜡包埋,切片,高倍镜下观察拍片,测定肾小球面积及硬化指数,进行统计学分析并观察肾脏病理组织变化。结果 PAN组在4周时肾小球面积与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);14周时,PAN组明显>正常对照组(P<0.01);但是在20周时PAN组肾小球面积<对照组(P<0.001),且20周时肾小球硬化指数与肾小球面积之间的相关系数为-0.82,呈强负相关关系。结论肾小球面积测定在评估PAN诱导肾炎肾小球硬化的发展中起重要作用。疾病的早期小球面积代偿性增大,随着疾病的进展、肾小球的面积随着硬化程度的增加而减小,与肾小球硬化指数存在强负相关关系。因此,观察肾小球面积的改变可以反映肾小球疾病进展及肾小球硬化的典型过程。
- 保莉兰小梅张彬毕逢辰郑亚莉
- 关键词：肾小球硬化
- 一种含小胶质细胞的大脑类器官及其制备方法和应用
- 本发明提供了一种含小胶质细胞的大脑类器官及其制备方法和应用，属于大脑类器官技术领域。本发明对人诱导多能干细胞进行培养，在EB形成培养基、神经胚层诱导培养基、大脑类器官扩增培养基、大脑类器官成熟培养基中分别添加180～22...
- 李娟姚遥周廷渊毕逢辰
