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段志刚: 作品数：25 被引量：62H指数：4; 供职机构：河南农业大学更多>>; 发文基金：河南省重大公益性科研项目国家科技支撑计划河南省科技攻关计划更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生更多>>

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猪源肠球菌多重PCR诊断方法的建立及应用: 肠球菌不但是引起医院内住院病人的心内膜炎、腹膜炎、尿道炎和脑膜炎等主要原因，近年来对猪、羊、鸡和鸭等动物的感染也越来越多。肠球菌种虽已增加到41个种，但引起人和动物感染的主要是粪肠球菌和屎肠球菌。在肠球菌致病的毒力因子中...; 段志刚; 关键词：毒力基因致病机理; 文献传递

动物源大肠杆菌O157:H7多重PCR检测方法的初步研究被引量：4: 2011年; 为建立快速、特异的分离鉴定大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法,根据GenBank上已发表的大肠杆菌O157∶H7菌体抗原和鞭毛抗原的基因序列(rfbE和fliC基因)设计2对特异引物,分别建立针对rfbE、fliC基因的单一PCR方法;通过优化扩增条件,进一步建立可用于动物粪便检测的大肠杆菌多重PCR方法,并进行特异性和灵敏性试验,同时还初步应用到临床样品的检测中。结果表明:所建立的多重PCR方法能同时扩增出rfbE基因(327 bp)和fliC基因(247 bp)的特异性片段,特异性结果显示其他非大肠杆菌O157∶H7的扩增结果均为阴性,表明该方法有较高的特异性;灵敏度试验结果显示细菌纯培养物的检测灵敏度为102cfu/mL。通过试验初步建立了快速、灵敏、特异的检测大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法,为从动物粪便中分离鉴定大肠杆菌O157∶H7提供了一种简单、灵敏的试验方法,可用于临床动物携带大肠杆菌O157∶H7的分子流行病学调查。; 陈雅君胡慧段志刚崔保安张龙现孟振北彭新然陈丽颖王亚宾; 关键词：多重PCR

动物源大肠埃希菌O157∶H7多重PCR检测方法的初步研究被引量：1: 2011年; 【目的】建立一种快速检测动物源大肠埃希菌O157∶H7及其毒力基因的多重PCR方法。【方法】以编码大肠埃希菌O157抗原的rfbE基因、编码H7抗原的fliC基因以及编码细胞溶血素A的hylA基因为靶基因,设计3对特异性引物,优化并建立检测大肠埃希菌O157∶H7的多重PCR方法,对其特异性和敏感性进行检测,最后对其临床应用效果进行了初步验证。【结果】成功建立了快速检测和鉴定动物源大肠埃希菌O157∶H7rfbE、fliC和hylA基因的多重PCR方法,该方法特异性较好,灵敏度较高,可达2.0×102CFU/mL。【结论】初步建立了检测动物源大肠埃希菌O157∶H7的多重PCR方法,该方法可用于携带大肠埃希菌O157∶H7临床动物的分子流行病学调查。; 胡慧段志刚崔保安张龙现陈雅君陈丽颖张红英彭新然孟振北王亚宾; 关键词：多重PCR

动物源大肠杆菌O157：H7多重PCR检测方法的初步研究: 目的: 建立快速、特异的分离鉴定大肠杆菌O157：H7的多重PCR方法。方法: 根据GenBank上已发表的大肠杆菌O157：H7菌体抗原和鞭毛抗原的基因序列(rfbE和fliC基因)设计两对特异引物，分别建立了针对rf...; 陈雅君段志刚魏战勇王亚宾崔保安张龙现陈丽颖胡慧; 关键词：多重PCR; 文献传递

一种肠球菌属及毒力基因多重PCR检测引物及方法: 本发明的技术方案公开了一种肠球菌属及毒力基因多重PCR检测引物，它包括肠球菌属引物的序列、聚集物质引物的序列和溶血素引物的序。本发明建立了一种快速准确鉴定肠球菌属及其主要毒力基因的多重PCR方法。本方法特异性高；敏感性实...; 王亚宾胡慧孟振北段志刚陈丽颖胡清林耿鑫

肠球菌主要毒力基因多重PCR测定方法的建立: 根据GenBank公布的基因序列,分别针对肠球菌属及其毒力基因cylA、esp和AS设计合成了4对引物。通过改进模板DNA提取方法和优化反应条件,建立了可以同时测定肠球菌和其携带的3种主要毒力基因的多重PCR方法。经过对...; 王亚宾陈丽颖胡慧段志刚崔保安; 关键词：肠球菌属毒力基因多重PCR; 文献传递

猪繁殖与呼吸综合征病毒河南分离株的遗传变异分析被引量：2: 2010年; 用间接免疫荧光试验和RT-PCR方法，从河南省不同地区送检的疑似猪繁殖与呼吸综合征的病料中分离到16株猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV），扩增分离株的ORF5基因并进行序列测定、比较分析和绘制进化树．结果表明，16株分离株之间的氨基酸序列同源性为88．1％～99，8％；与欧洲型LV株和美洲型VR-2332株的氨基酸序列同源性分别为54．0％～54．5％和88．1％～99．2％，证明分离的16株病毒均为美洲型．用DNAstar等软件对16株分离株推导的氨基酸序列作进一步比较分析，发现16株分离株ORF5基因编码的gp5蛋白的抗原区、潜在疏水区、跨膜区和N-糖基化位点分布均有差异，与其它美洲型毒株也存在一定程度的差异，说明在河南流行的PRRSV存在明显的遗传差异性．; 范旭李伟娟刘玉松徐红运张凤华赵琳段志刚夏平安崔保安; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因克隆

猪源粪肠球菌和屎肠球菌多重PCR快速鉴定方法的建立被引量：6: 2010年; 粪肠球菌和屎肠球菌是引起猪感染发病的优势肠球菌种,以肠球菌的16 S rRNA基因设计属特异性引物,利用SodA基因多态性设计种特异性引物,同时优化反应条件,建立了能同时测定猪源粪肠球菌和屎肠球菌多重PCR方法。通过对来源于猪的临床菌株、粪便菌株和鲜猪肉菌株进行测定,均能成功扩增出属特异性片段和种特异性片段。经过与快速生化鉴定试剂盒(Vitek-32)和16 S rRNA测序方法比较,多重PCR与16 S rRNA测序方法对猪的临床菌株、粪便菌株和鲜猪肉菌株的鉴定符合率100%;与Vitek-32鉴定符合率为62.3%,其中,与分离于感染猪的临床菌株符合率仅有46.7%,特别是感染猪的屎肠球菌,符合率仅为22.3%。; 王亚宾陈丽颖胡慧段志刚崔保安; 关键词：肠球菌多重PCR RRNA VITEK-32

零售鲜猪肉中肠球菌的鉴定与毒力基因检测被引量：3: 2009年; 2007-2009年间，分别从郑州市5个农贸市场鲜猪肉销售摊点采集了52份猪肉样品，经细菌分离得到30株疑似肠球菌，通过细菌形态学和培养特性的观察，并采用Vitek-32全自动细菌鉴定系统对其进行分析，最终鉴定为肠球菌，其中粪肠球菌（E．faecalis）16株、屎肠球菌（E．faecium）4株、铅黄肠球菌限casseliflavus）6株、鸟肠球菌（E．avium）2株、鹑鸡肠球菌（E.gallinarum）2株。药敏试验结果表明：肠球菌对呋喃妥因、万古霉素、替考拉宁和氨苄青霉素有较高的敏感性，对四环索、卡那霉素和红霉索的敏感性较低。经过对肠球菌6种公认的毒力基因cy1A、ge1E、efaA、ace、AS和esp的检测，发现分离株携带毒力基因不同，7号粪肠球菌携带6种，而12号屎肠球菌则全部为阴性，其它菌株则携带1～5种不等的毒力基因。; 段志刚王亚宾胡惠金钺崔保安; 关键词：猪肉肠球菌生化鉴定毒力基因

猪肠球菌溶血素cylA基因原核表达载体的构建: 2009年; 以猪致病性粪肠球菌染色体DNA为模板,PCR扩增溶血素cylA基因,相应酶切后,克隆到原核表达载体pET32a中,构建pET32a-cylA重组质粒,并将pET32a-cylA质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)。经HindⅢ、XhoI双酶切及测序鉴定,并与已发表的肠球菌溶血素cylA基因序列比较,同源性达99.8%。表明成功构建猪肠球菌溶血素cylA基因的重组表达质粒,为制备单抗、开发疫苗及其致病机制研究奠定了基础。; 刘磊王亚宾程金平王中明段志刚蔡京雷崔保安; 关键词：粪肠球菌溶血素原核表达

段志刚

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