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应用真核系统表达猪生长激素基因的研究: 生长激素(Somatotropin)是一种具有广泛生理功能的生长调节素,能影响几乎所有的组织类型和细胞,甚至包括免疫组织、脑组织及造血系统,其主要作用是刺激骨、软骨细胞的生长和分化,调节蛋白质、糖及脂肪的代谢.猪生长激素...; 欧阳菁; 关键词：猪生长激素杆状病毒巴斯德毕赤酵母; 文献传递

猪生长激素研究进展被引量：15: 2001年; 猪生长激素是由猪脑垂体前叶嗜酸性细胞分泌的一种单一肽链的蛋白质激素。本文就猪生长激素基因的结构特点、多肽性研究、基因表达及猪生长激素的结构特点、生理功能。; 欧阳菁龙綮新杨林王珣章; 关键词：生长激素基因结构多态性

人白血病仰制因子基因在酵母中的融合表达被引量：1: 2001年; 用ＰＣＲ突变的方法使人白血病抑制因子基因的终止密码子缺失，并与质粒ｐＰＩＣＺαＡ上的ｍｙｃ表位及６个组氨酸处于同一读码框，构建融合表达载体ｐＰＩＣＺαＡ－ｈＬＩＦＭ．通过氯化理化学转化法使表达载体整合到毕赤巴斯德酵母Ｘ－３３的基因组ＤＮＡ中。转化子经甘油增菌和甲醇诱导，实现了ｈＬＩＦ基因在毕赤酵母表达载体系统中的表达．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析结果表明在相对分子质量为６１０００处有一条人白血病抑制因子特异蛋白带．凝胶薄层扫描分析结果显示表达的目的蛋白占培养液上清总蛋白的３３．３％．且该表达产物具有抑制小鼠畸胎瘤细胞Ｆ９克隆形成的活性．; 王全忠杨林欧阳菁龙綮新王珣章; 关键词：毕赤酵母生物活性测定

猪生长激素基因在巴斯德毕赤酵母中的高效分泌表达及产物的N-糖基化分析被引量：18: 2001年; 利用含有强启动子PAOX 1 和α MF信号肽序列的巴斯德毕赤酵母载体质粒pPICZαA构建出含PST基因的重组质粒pPICZαA pST。通过电击将经SacⅠ酶切后线性化的pPICZαA pST质粒转化到巴斯德毕赤酵母X 33菌中 ,并筛选Mut+ 表型的重组菌。表达产物的SDS PAGE和Westernblot结果表明 ,分泌于胞外的PST蛋白分子量比天然PST分子量稍大 ,而胞内的PST蛋白分子量与天然PST大小相同。将经SacⅠ酶切后线性化的pPICZαA pST再次转化重组酵母细胞X 33 pPICZαA pST(Mut+ ) ,所得表达产物的SDS PAGE和Westernblot结果显示 ,PST基因的表达水平明显提高 ,且表达产生的蛋白均可发生正确的抗原抗体结合反应 ,表达量达 95 6mg L。将发酵液上清进行N 糖基化分析 ,显示rPST无N; 欧阳菁杨林龙綮新王珣章邢珂魏平华; 关键词：巴斯德毕赤酵母表达载体系统基因表达高效分泌表达

人白血病抑制因子基因在巴斯德毕赤酵母中的表达: 2001年; 将 575bp的人白血病抑制因子基因克隆到表达载体pPICZαA上 ,构建成重组质粒pPICZαA hLIF。pPICZαA hLIF经SacI酶切使之线性化后转化到巴斯德毕赤酵母细胞X 33中。转化子经Mut表型筛选和PCR分析鉴定后 ,利用甘油增菌和甲醇诱导 ,实现了hLIF基因在毕赤酵母系统中的表达。SDS PAGE检测和Westernblot分析结果表明表达产物的分子量约为58 5kD ,与天然hLIF大小相近 ,并且具有免疫原性。凝胶薄层扫描分析显示 ,重组hLIF约占上清总蛋白的 32 8%。生物活性测定结果表明。; 王全忠杨林欧阳菁龙綮新王珣章; 关键词：巴斯德毕赤酵母基因表达生物活性测定

猪生长激素基因在杆状病毒载体系统中的表达被引量：10: 2000年; 通过对猪生长激素 (pGH)基因的cDNA进行测序 ,得到 pGHcDNA的全序列 ,并与Seeburg等报道的序列进行了比较和讨论。然后利用具人工合成启动子和多角体蛋白XIV启动子的转移载体质粒 pSXIVVI+ X3/ 4构建出含 pGH基因的重组质粒 pX3/ 4 pGH。将 pX3/ 4 pGH与致死缺失型线性化AcMNPV OCC- DNA共转染Sf9细胞 ,构建出既能形成多角体又能表达 pGH基因的苜蓿丫纹夜蛾核多角体重组病毒AcMNPV pX3/ 4 pGH OCC+ 。感染重组毒株的Hi 5细胞可溶蛋白及其培养上清的SDS PAGE和Westernblot的分析结果表明 ,感染细胞的蛋白电泳带的 2 0 .7kDa处有一条猪生长激素特异带 ,但培养上清中没有。凝胶黑度扫描估测结果显示 pGH蛋白占细胞可溶蛋白的 4 .4 8%。; 欧阳菁魏平华杨林谢明权杨洁龙綮新王珣章; 关键词：猪生长激素基因

猪生长激素基因在昆虫细胞中的分泌表达被引量：11: 2002年; 将PCR扩增得到的 pGH基因插入到带有 polh启动子和 gp6 7强信号肽序列的杆状病毒转移载体pAcGP6 7 A中 ,构建重组质粒 pGP6 7pGH ,并与线性化致死缺失型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 (AcMNPV OCC-)基因组DNA共转染Sf9细胞 ,构建出重组病毒AcMNPV pGP6 7 pGH OCC-。感染重组病毒的Hi5细胞的表达产物的SDS PAGE和Westernblot结果表明 ,细胞可溶蛋白和培养液上清中均有一条分子量约为 2 2kDa的猪生长激素特异性反应带 ,且培养液上清中的目的蛋白分子量比天然pGH略大一些。薄层扫描仪扫描估测可知 ,重组pGH分别占细胞可溶蛋白的 8 98%和培养液上清总蛋白的 3 6 1%。将表达 96h的培养液上清浓缩液进行N 糖基化分析 ,结果显示重组 pGH无N 糖基化加工修饰。; 欧阳菁龙綮新杨林王珣章; 关键词：生长激素基因昆虫细胞基因表达

甲基营养型酵母表达载体系统研究进展被引量：16: 2001年; Methylotrophic yeast expression system is one of the eukaryotic expression systems which was widely applied and devoloped fast in rencent years. Expression of the methanol inducible genes, expression vector, fermentation, purification and character of secretion proteins, factors affecting heterologous gene expression, comparision of methylotrophic yeast and other yeasts are reviewed in this paper. Ref; 欧阳菁龙綮新杨林王珣章; 关键词：甲基营养型酵母表达载体系统

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欧阳菁