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欧新华

作品数：91 被引量：354H指数：10
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合作作者

文献类型

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主题

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作者

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传媒

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  • 4篇2009
  • 2篇2008
  • 4篇2006
共 91 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
痰中结核分枝杆菌DNA提取方法的比较及在LAMP检测中的应用被引量：1
2013年
目的:对5种DNA提取方法进行比对,为选择适用于痰中结核分枝杆菌DNA的提取方法提供依据。方法:采用PureLink genomic DNA kits(PLKm)、苯酚与氯仿法(PCm)、Chelex-100法(Cm)、磷酸盐缓冲液法(PBm)及硅珠法(SBm)5种方法提取痰标本中的DNA,对提取产物的浓度、纯度等技术指标进行分析,并对核酸扩增结果进行统计。结果:DNA浓度均值由高到低依次是PBm、Cm、PCm、SBm、PLKm,组间比较差异有统计学意义,两两比较发现PLKm与PCm、Cm、PBm之间差异有统计学意义,但Cm与SBm间的比较有统计学意义;5种提取方法的OD260:OD280比值均值与1.8的接近程度依次是PLKm、PCm、Cm、PBm、SBm,组间比较差异有统计学意义,两两比较发现除SBm与另外4种方法间存的差异具有统计学意义外,其余各组间的比较均无统计学意义;采用PLKm、PCm及Cm提取的产物均扩增出阳性结果,而PBm、SBm提取产物分别有18例和11例未获得阳性结果,经Mc-Nemar x2检验方法间的差异有统计学意义。结论:Chelex-100提取痰标本中结核分枝杆菌DNA是一种简便、省时、廉价适用于基层结核病实验室进行核酸检测的方法。
文岚王孝君郭彦昌欧新华张兵田斌
关键词：结核分支杆菌DNA提取
长沙市男男性接触人群HIV和梅毒感染横断面调查被引量：8
2013年
目的了解长沙市男男性接触人群(MSM)人类免疫缺陷病毒(HIV)和梅毒的感染状况,为制定防治策略提供科学依据。方法在长沙市MSM人群经常活动的浴池、KTV娱乐场所、酒吧、会所等场所中,依据知情同意原则,收集目标人群EDTA-K2抗凝全血和非抗凝全血样本各10ml,分别进行HIV抗体、梅毒抗体检测和HIV核酸PCR检测,同时填写完成1份有关人口信息的简单问卷。结果 800名调查对象以学生、青壮年和高学历人群为主。实验室检出64人(8.00%)HIV-1抗体阳性,86人(10.75%)梅毒抗体阳性。5人(0.68%)HIV Pooled RNA PCR试验阳性,处于急性期HIV感染。结论长沙市MSM人群HIV、梅毒较高感染现状应该引起重视,加大对此类人群行为干预和监测检测势在必行。
张国强赵俊仕彭瑾瑜黄竹林欧新华贺健梅郑军陈曦张旻尚红
关键词：男男性接触人群人类免疫缺陷病毒梅毒HIV流行率
志贺菌和肠侵袭性大肠埃希菌LAMP检测方法的建立及应用被引量：5
2013年
目的建立针对侵袭性质粒抗原H(ipaH)编码基因的环介导等温扩增(LAMP)方法。方法利用LAMP方法对4株志贺菌、1株肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)和20株其他肠道菌DNA在65℃恒温扩增30min或60min后观察结果。结果 4株志贺菌和EIEC可通过肉眼和电泳观察到阳性结果,而其他肠道菌为阴性。LAMP检测特异性与聚合酶链反应(PCR)相似,但敏感性比PCR高10倍。LAMP、PCR检出下限分别为1.2×102、1.2×103CFU/mL。LAMP和分离培养法对70例食物中毒患者和健康者肛拭子标本检测结果符合率为100%。结论 LAMP由于具有快速和无需特殊仪器的优点,可广泛用于肛拭子标本志贺菌和EIEC的检测。
张如胜宋克云欧新华陈静芳姚栋苏良孙边成
关键词：环介导等温扩增志贺菌属大肠杆菌
长沙市2013—2016年HFMD重症病例肠道病毒谱及其基因特征被引量：8
2018年
目的了解2013年至2016年长沙市手足口重症病例感染柯萨奇病毒A组6型(CAV 6)和柯萨奇病毒A组10型(CAV 10)肠道病毒的流行趋势,并对其VP1基因进化概况进行分析。方法运用描述性统计学分析方法对全市重症手足口病流行病学资料进行整理。CAV 6和CAV 10型肠道病毒阳性咽拭子、肛拭子或粪便标本用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增VP1基因片段,序列比对后用MEGA软件构建进化树。结果 2013—2016年全市共检测111份重症手足口病例标本,肠道病毒阳性标本80份,检出率为72.07%。80份肠道病毒阳性标本中,CAV 6型10株,CAV 10型8株。核苷酸序列的同源性分析发现,CAV 6型肠道病毒核苷酸序列之间存在0.8%~6.6%的差异。CAV 10型肠道病毒核苷酸序列之间存在1.1%~5.6%的变化差异。8株CAV 6型毒株均位于D2分支,1株处于D1分支。6株CAV 10型毒株位于E分支。结论 CAV 6和CAV 10肠道病毒在基因水平并未发生明显突变。重症病例中出现CAV 6型和CAV 10型感染高峰年份,但2016年有所降低,应将CAV 6和CAV 10型肠道病毒纳入常规监测,降低手足口发病风险。
杨人贵孙边成欧新华黄政李灵之陈静芳
关键词：重症手足口病柯萨奇病毒
长沙市活禽市场外环境H9N2监测与患者分离株HA基因序列的比较研究被引量：1
2020年
目的了解长沙市活禽市场外环境H9N2禽流感病毒(avian influenza viras,AIV)污染情况及病毒血凝素基因(hermagglutinin,HA)的遗传进化和分子特征,并与长沙市分离的2株人感染H9N2毒株相比较。方法采集长沙市活禽市场监测点外环境样本,实时荧光RT-PCR检测禽流感病毒FluA及H5、H9亚型核酸;H9阳性样本采用鸡胚分离毒株,血凝实验及实时荧光RT-PCR鉴定毒株的型别;普通逆转录PCR扩增病毒HA基因全长并测序,生物信息学软件对序列进行比对和遗传进化分析。结果 2015—2017年共采集活禽市场环境样本1 519份, FluA核酸阳性率为78.80%(1 197/1 519);其中H5阳性率为4.34%(66/1 519)、H9阳性率为41.74%(634/1 519)、H5+H9阳性率为20.28%(308/1 519)。3例环境来源和2份人感染H9N2毒株样本HA基因核苷酸序列同源性为96.31%~98.73%,氨基酸同源性为97.02%~99.15%;系统进化树显示,人源与禽源HA基因均属于欧亚分支中的Y280亚群。序列分析结果显示,5株病毒HA裂解位点均为RSSR↓GLF,符合低致病力病毒特征;受体结合位点均出现Q234L突变,具有结合哺乳动物α-2,6唾液酸受体的能力;糖基化位点均为7个;个别氨基酸位点人源与禽源毒株存在差异(第297、510位氨基酸)。结论长沙市活禽市场H9亚型禽流感病毒污染严重,病毒HA基因与从人体中分离的毒株同源性高,存在跨种感染人的风险。
徐明忠孙边成张如胜欧新华姚栋李灵之陈静芳
关键词：活禽市场HA基因
10种食源性疾病病原体高通量LAMP分子鉴别检测体系的建立及应用被引量：3
2011年
目的建立一种LAMP分子鉴别检测体系,应用于10种食源性疾病病原体的分子鉴别检测。方法针对8种细菌（沙门菌属、志贺菌属、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、EHEC O157：H7、奇异变形杆菌、霍乱弧菌和单增李斯特菌）和2种病毒（Norwalk病毒和轮状病毒）分别建立LAMP和RT-LAMP方法,分别对25种常见肠道细菌和病毒进行LAMP扩增,水浴箱内65℃扩增60 min（LAMP）或120 min（RT-LAMP）,扩增完成后利用电泳和肉眼进行结果判断。对365份食源性疾病患者呕吐物、肛拭子和食品等标本进行10种食源性疾病病原体LAMP分子检测。结果 10种食源性疾病病原体LAMP或RT-LAMP方法均只对靶病原体出现阳性结果,电泳显示为LAMP特异性梯状条带,加SYBRGreen I后肉眼观察反应液变为绿色;8种细菌性病原体LAMP检测方法的敏感度为3×100~1.2×102cfu/ml,其中6种LAMP方法敏感度高于PCR方法,其他病原体（霍乱弧菌、EHEC O157：H7、Norwalk病毒和轮状病毒）敏感度与PCR方法相同。从365份标本中检出沙门菌属11份、志贺菌属6份、金黄色葡萄球菌13份、EHEC O157：H7 2份、副溶血性弧菌2份、单增李斯特菌2份、Norwalk病毒12份和轮状病毒7份。结论建立了一个较为完整的LAMP分子鉴别检测体系,可以在一台水浴箱内同时对10种食源性疾病病原体进行高通量的分子鉴别检测,具有快速、不需要特殊仪器和肉眼判断结果的优势,适合基层单位的实验室开展食源性疾病的分子鉴别诊断。
孙边成张如胜宋克云欧新华姚栋苏良叶文陈法明
关键词：食源性疾病病原体环介导等温扩增高通量
环介导等温扩增(LAMP)技术检测沙门菌属方法的建立被引量：19
2008年
建立一种检测沙门菌属快速敏感的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法。针对沙门菌属侵袭蛋白(invA)基因序列的六个区域设计四条LAMP引物,65℃保温约60min,完成对沙门菌属的扩增,扩增产物经电泳和酶切鉴定。利用LAMP和普通PCR方法同时检测4株沙门菌和9株非沙门菌(对照组)来验证LAMP方法的特异性;将肠炎沙门菌菌液做一系列10倍稀释后用LAMP和PCR方法进行检测来比较两者敏感性。4株沙门菌扩增出LAMP特征性梯状条带,9株非沙门菌没有出现LAMP扩增,LAMP产物的特异性通过限制性内切酶得到了证实;LAMP检测沙门菌属的特异性与普通PCR相同,但其敏感性比普通PCR高10倍,LAMP检测沙门菌属的检测下限为10cfu/ml,PCR检测下限为100cfu/ml。LAMP检测速度相比PCR更快速,在60min内即可完成扩增反应。建立了一个快速、特异、敏感的沙门菌属LAMP检测方法。
欧新华张如胜宋克云苏良魏泉德
关键词：环介导等温扩增沙门菌属
长沙市流行性感冒病毒病原学检测结果分析被引量：8
2006年
目的 对长沙市2004～2006年4月流行性感冒病毒（简称流感）的病原学监测结果进行分析。方法 采集流感样病例（ILI）的鼻咽拭子标本用狗肾细胞（MDCK）进行病毒分离培养，采用血凝（HA）及血凝抑制（HI）方法进行流感病毒初筛及分型鉴定。结果 二年共监测ILI鼻咽拭子标本470份，分离到流感病毒64株，阳性分离率为13．62％，经分型鉴定A（H3N2）亚型21株，A（H1N1）亚型22株，B型21株，7株因HA〈1：8或病毒丢失未能分型；疑似流感疫情ILI鼻咽拭子标本178份，分离到流感病毒44株，阳性分离率为24．72％，经分型鉴定A（H3N2）亚型10株，A（H1N1）亚型13株，B型21株。结论 长沙市流感流行株为A（H1N1）亚型，A（H3N2）亚型及B型，未发现流感变异株。
袁洁苏良叶文宋克云欧新华
RT-LAMP快速检测Norwalk病毒GⅡ型被引量：10
2009年
建立一种检测Norwalk病毒GⅡ型快速、敏感的一步逆转录环介导等温扩增(Reverse transcription-loop-me-diated isothermal amplification,RT-LAMP)方法。针对Norwalk病毒RNA聚合酶基因特异性序列的6个区域设计4条LAMP引物,65℃保温约120 min,完成对Norwalk病毒GⅡ的扩增,扩增产物通过肉眼观察、SYBR GreenI染色、凝胶电泳及酶切消化进行鉴定。利用RT-LAMP和RT-PCR方法同时检测48份Norwalk病毒GⅡ粪便标本和12份A组轮状病毒标本来验证RT-LAMP方法的特异性;将Norwalk病毒GⅡ RNA一系列稀释后用RT-LAMP和RT-PCR方法进行检测来比较两者敏感性。46份Norwalk病毒GⅡ粪便标本出现LAMP扩增反应:通过肉眼观察、SYBR Green Ⅰ染色和凝胶电泳均能观察到LAMP扩增产物的存在,LAMP产物的特异性通过酶切消化加以证实;2份Norwalk病毒GⅡ粪便标本和12份A组轮状病毒标本未出现RT-LAMP扩增。RT-LAMP与RT-PCR特异性符合率为100%,RT-LAMP和RT-PCR检测Norwalk病毒GⅡ的检测下限均为15.6pg/管。与RT-PCR相比较,一步RT-LAMP法检测粪便中Norwalk病毒GⅡ的方法是一种快速、敏感、特异且准确的方法,有望用于快速检测感染性腹泻暴发时粪便中的Norwalk病毒GⅡ。
宋克云张如胜欧新华苏良杨秋林
关键词：RNA聚合酶
5种前处理方法对痰中结核分枝杆菌DNA提取的影响被引量：7
2013年
目的比较5种痰标本前处理方法,选择适用于基层结核病实验室痰中结核分枝杆菌DNA提取的痰标本前处理方法。方法分别采用DDT、NaOH、NALC-NaOH、Trypsin、Chymotrypsin等5种方法对所收集标本进行前处理,比较提取DNA模板的浓度、纯度和核酸扩增结果。结果经过5种前处理方法处理后,所提取DNA浓度(ng/μl)的最小值依次是27.30、4.10、9.30、18.60和14.80,最大值依次是84.10、40.20、26.10、111.00和159.00,均值依次是(52.84±19.17)、(16.69±12.72)、(14.38±4.57)、(48.65±25.75)和(53.79±46.27);以OD260/OD280的比值衡量DNA纯度,其最小值依次是1.75、1.60、1.64、1.60和1.62,最大值依次是1.86、1.85、1.79、1.88和1.84,均值依次是(1.80±0.29)、(1.66±0.88)、(1.74±0.40)、(1.76±0.86)、(1.73±0.74);16份已知阳性标本采用DDT、NALC-NaOH两种方法处理后扩增结果全部阳性,而采用NaOH、Trypsin、Chymotrypsin处理后分别出现了3、8和5份标本阴性。结论在基层结核病实验室,对拟进行结核分枝杆菌DNA提取的痰标本应首选二硫代苏糖醇进行前处理,其次选择N-乙酰-L-半胱氨酸-氢氧化钠。
文岚张兵郭彦昌张如胜欧新华王孝君田斌
关键词：结核分枝杆菌DNA提取前处理方法
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