杨凤环
- 作品数：24 被引量：21H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院植物保护研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生自然科学总论更多>>
- 水稻白叶枯病菌EAL结构域蛋白VieAxoo基因缺失突变和功能分析被引量：5
- 2011年
- 【目的】旨在揭示水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,简称Xoo)环鸟苷二磷酸(c-di-GMP)信号蛋白VieAxoo的生物学功能。【方法】本研究通过标记置换法对vieAxoo基因(PXO_04753)进行了缺失突变研究,采用表型测定进行了功能鉴定。【结果】从野生型菌株PXO99A中克隆的vieAxoo基因序列与其它病原黄单胞菌的同源序列高度保守。VieAxoo具有参与c-di-GMP降解的磷酸二酯酶(PDE)EAL结构域和磷酸信号识别受体REC结构域。与PXO99A相比,△vieAxoo基因缺失突变体对水稻的致病性、胞外多糖(EPS)产生和运动性无明显改变;但对烟草的致敏性和生物膜形成显著降低;基因互补可以使之完全恢复。【结论】VieAxoo正向调控了Xoo对烟草的致敏性和生物膜形成能力。
- 梁士敏杨凤环管文静吴茂森陈华民田芳许艳丽何晨阳
- 关键词：水稻白叶枯病菌缺失突变
- 水稻白叶枯病菌毒性表达的负调控因子PXO_02944的分子鉴定被引量：2
- 2014年
- 【目的】水稻黄单胞水稻致病变种(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,简称Xoo)侵染引起水稻白叶枯病,在侵染过程中Xoo可产生胞外多糖(EPS)、胞外酶、黏附因子、T3SS以及其产生的效应因子等毒性因子。细菌第二信使环鸟苷二磷酸(c-di-GMP)的水平在Xoo毒性调控中发挥了重要的作用,而PXO_02944是包含REC、GGDEF和EAL结构域的蛋白,是c-di-GMP信号蛋白家族的成员,研究旨在阐明水稻白叶枯病菌的环鸟苷二磷酸信号蛋白家族成员PXO_02944的基因结构和功能。【方法】根据PXO_02944基因序列信息,以PXO99A基因组DNA为模板,设计引物扩增PXO_02944基因全长,将其GGDEF结构域和EAL结构域分别与已经报道的保守的GGDEF结构域或EAL结构域蛋白进行氨基酸序列比对分析;分别扩增PXO_02944左右臂片段,将其与目的载体pK18mobsacB载体连接,得到质粒pK2944,将pK2944与pMD-GmR载体回收获得的GmR基因片段进行连接,获得重组质粒pK2944-GmR,用于构建基因突变体。将PXO_02944全长基因克隆到载体pHM1上,获得重组质粒pHM1-2944并转化到ΔPXO_02944中,即获得互补菌株ΔPXO_02944::C。对野生型菌株、突变体和互补菌株进行表型测定,分析PXO_02944基因缺失突变对Xoo致病性和EPS产生、生物膜形成、胞外酶活性和鞭毛运动性的影响,并通过qRT-PCR方法测定EPS合成基因和毒性相关基因的表达。【结果】用特异性引物进行PCR扩增,成功地从野生型菌株PXO99A中克隆了PXO_02944;生物信息学分析发现,PXO_02944蛋白具有磷酸化信号接收的REC输入结构域和GGDEF、EAL输出结构域,但GGDEF和EAL结构域保守序列发生了突变。与野生型菌株PXO99A相比,虽然PXO_02944突变体胞外纤维素酶和木聚糖酶活性、鞭毛运动性都无明显变化,但其对水稻的致病性、EPS产生和生物膜形成能力显著增强,T3SS调控基因hrpG和EPS合成基因gumG的转录水平也明显升高。【结论】应答调控因子PXO_02944负�
- 李潇桐杨凤环梁士敏田芳陈华民何晨阳
- 关键词：水稻白叶枯病菌
- 基于瞬时表达系统的水稻miRNA靶基因快速验证系统的建立被引量：1
- 2019年
- 旨在建立一种准确且快速的基于瞬时表达系统的水稻miRNA靶基因验证系统,为研究水稻miRNAs的生物学功能奠定基础。已有研究证实osa-miR169o剪切靶基因OsNF-YA4(LOC_Os03g48970.1)的mRNA,以此为参照,在烟草和水稻原生质体瞬时表达系统中将miR169o前体基因分别与LUC表达载体、LUC-48970和LUC-48970m3融合表达载体瞬时共表达,通过CCD活体成像和Luminometor分析了共表达后LUC活性的动态变化。利用茎环qRT-PCR对miR169o的表达水平进行分析,获得靶基因验证的适合体系。在水稻原生质体体系中,LUC活性和miR169o表达水平在原生质体转化后逐渐增高;24 h时LUC活性最高,相应miR169o表达水平上升10倍左右。综合分析,在原生质体转化后24 h-36 h为适宜检测时间段。在烟草瞬时表达体系中,农杆菌注射72 h后LUC活性最强,而miR169o的表达在48 h后即可上调20倍。因此,农杆菌注射后48 h-72 h为适宜检测时间段。本系统为水稻miRNA靶基因的验证提供了一种简便、快速,且更接近于体内真实情况的实验方法。
- 胡积祥曹雅倩朱秀梅余超田芳杨凤环陈华民何晨阳
- 关键词：水稻MIRNA荧光素酶
- 一种获得生长特性改良水稻品种的方法
- 本发明涉及水稻品种生长特性的改良，具体涉及一种获得生长特性改良水稻品种的方法。其特征在于，包括：向水稻受体材料中转入过量表达核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的基因的过表达载体，获得转基因水稻植株；所述生长特性指植株...
- 陈华民余超陈禹彤田芳杨凤环何晨阳
- 文献传递
- 水稻白叶枯病菌第二信使c-di-GMP代谢系统的分子鉴别
- 环鸟苷二磷酸(c-di-GMP)是一种广泛存在于细菌中的新型第二信使,调控着毒性、生物膜形成、运动性等诸多方面的生物学功能。GGDEF结构域的鸟苷酸环化酶(DGC)控制c-di-GMP的合成,而EAL或HD-GYP结构域...
- 孙蕾管文静杨凤环王红敏吴茂森陈华民何晨阳
- 关键词：水稻白叶枯病菌C-DI-GMP
- 文献传递
- 水稻白叶枯病菌c-di-GMP受体Clpxoo关键结合功能位点的确定
- 2016年
- 旨在确定水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)c-di-GMP信号受体Clpxoo的关键功能位点。通过对Clpxoo蛋白氨基酸位点基因突变,表达载体构建、蛋白诱导表达及其Ni-NTA Resin亲和层析,进行了Clpxoo及其点突变蛋白的原核表达和产物纯化;通过等温滴定量热法(ITC),检测了Clpxoo及其点突变蛋白与c-di-GMP的结合作用。利用基因定点突变和桥接PCR方法,在优化的诱导表达和纯化条件下,成功地获得了Clpxoo点突变蛋白和与c-di-GMP不发生结合的Clpxoo点突变体。结果表明,Clpxoo蛋白第70位天冬氨酸和第99位谷氨酸是与c-di-GMP结合的关键功能位点。
- 李建宇李波陈华民杨凤环何晨阳田芳
- 关键词：水稻白叶枯病菌C-DI-GMP
- 水稻白叶枯病菌HD-GYP结构域蛋白PXO_03945的功能鉴定被引量：1
- 2017年
- 为了揭示水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,简称Xoo)环二鸟苷酸(c-di-GMP)信号相关蛋白PXO_03945的生物学功能,本研究通过基因同源重组和无标记交换,对PXO_03945基因进行了缺失突变,对野生型、突变体和互补菌株进行表型测定,分析该基因缺失突变对病菌胞内c-di-GMP水平、致病性、运动性、胞外多糖产生和生物膜形成的影响。结果表明,PXO_03945蛋白具有参与c-di-GMP降解的磷酸二酯酶(PDE)的HD-GYP结构域和功能未知的DUF3391结构域。全长基因缺失可导致体内c-di-GMP浓度明显上升。与野生型相比,ΔPXO_03945对水稻品种日本晴的致病性显著下降,而游动性增强,胞外多糖产生和生物膜形成增加。基因互补可以使之恢复。因此,HD-GYP结构域蛋白PXO_03945可能通过降解胞内c-di-GMP,正向调控了致病性,负向调控了运动性、EPS产生和生物膜形成能力。
- 钱珊珊杨凤环田芳陈华民何晨阳
- 关键词：水稻白叶枯病菌磷酸二酯酶
- 水稻白叶枯病菌c-di-GMP代谢系统成员鉴定及其信号机制分析
- ＜正＞环鸟苷二磷酸（c-di-GMP）是一种广泛存在于细菌中的新型第二信使,具有调节包括细胞信号交流、生物膜形成、运动性和毒性等生物学功能。c-di-GMP的代谢（生物合成和降解）分别受带有GGDEF结构域的鸟苷酸环化酶...
- 杨凤环梁士敏王红敏孙蕾管文静吴茂森陈华民何晨阳
- 文献传递
- 水稻白叶枯病菌c-di-GMP代谢系统成员鉴定及其信号机制分析
- 环鸟苷二磷酸(c-di-GMP)是一种广泛存在于细菌中的新型第二信使,具有调节包括细胞信号交流、生物膜形成、运动性和毒性等生物学功能.c-di-GMP的代谢(生物合成和降解)分别受带有GGDEF结构域的鸟苷酸环化酶(DG...
- 杨凤环梁士敏王红敏孙蕾管文静吴茂森陈华民何晨阳
- 关键词：水稻白叶枯病菌代谢系统信号机制
- 磷酸二酯酶EdpX1用于降低细菌致病性的应用
- 本发明涉及植物病理学领域，具体涉及磷酸二酯酶EdpX1用于降低细菌致病性的应用根据本发明的技术方案，由于EdpX1能够降解c‑di‑GMP，还可调节III型分泌系统的功能，可以将其作为小分子抑制剂靶标，筛选出可以抑制Ed...
- 田芳薛丁榕杨凤环陈华民何晨阳
- 文献传递
