李芳梅
- 作品数：34 被引量：213H指数：10
- 供职机构：第二军医大学附属长海医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金军队医药卫生科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 应用组织芯片技术研究P33^(ING1)在胰腺癌中的表达及意义被引量：10
- 2002年
- 目的 探讨P33^(INGI)表达在胰腺癌的发生、发展中的生物学特征和临床意义。方法 选取胰腺癌、癌旁组织与胰腺良性病变标本,应用组织芯片(又称组织微阵列)技术和免疫组化方法研究P33^(INGI)、P53和MDM2在胰腺良恶性病变中的表达情况。结果 P33^(INGI)在胰腺癌与癌旁组织中表达的阳性率分别为77.2％(129/167)、60.4％(61/101)。P33^(INGI)的阳性表达与肿瘤的分化和神经受累显著相关(P<0.05);P53的阳性表达与肿瘤的分化、淋巴结转移和神经受累均显著相关(P
- 于观贞朱明华倪灿荣郑建明李芳梅龚志锦张顺民
- 关键词：组织芯片P33^ING1胰腺癌癌基因蛋白质
- 不同肝癌细胞系中P53/P21/MDM2表达初步观察
- 2003年
- 选用P53状态不同的Hep3B、PLC/PRF/5、HCC-9204、HepG2、HepG2215细胞,通过Western印迹分析观察各细胞P53蛋白以及P53下游基因p21、mdm2蛋白表达情况;将报告基因PG13-CAT转染细胞,通过观察CAT酶表达水平反映各细胞中P53的反式活化功能;P21-LUC质粒细胞内转染,比较不同细胞中P53对P21启动子的活化情况。结果显示,PLC/PRF/5细胞中P53蛋白高表达、低功能,但P21蛋白以及报告基因P21-LUC转染细胞后荧光素酶均具有较高水平表达;Hep3B细胞中P53蛋白无表达、无功能,P21蛋白低表达,MDM2蛋白表达相对较高;HCC-9204细胞具有较高MDM2表达,P53蛋白表达及功能均较低,P21亦呈低表达;HepG2215较HepG2细胞具有较高的P53、P21蛋白表达,P53活化报告基因的活性也较强。结果提示,肝癌细胞中P53活性与其表达水平、存在状态有关;某些细胞中P21的活化表达存在不依赖于P53的途径;MDM2与P53的表达具有负性相关倾向。
- 曲建慧朱明华倪灿荣李芳梅林静祝峙于观贞
- 关键词：肝癌细胞系P53P21MDM2蛋白表达
- HBV对肝癌细胞增殖与凋亡的双重作用
- 为了进一步观察HBV导致原发性肝癌发生的机制,首先观察了HepG2细胞以及稳定转染了HBV质粒的HepG2.2.15细胞某些生物学活性如细胞周期、细胞凋亡的差异,Western Blot方法检测了细胞中P53蛋白表达情况...
- 曲建慧林静祝峙倪灿荣李芳梅朱明华
- 关键词：原发性肝细胞癌抑癌基因P53P21
- 胰腺癌中p33^(ING1b)基因变化及其表达研究被引量：10
- 2005年
- 目的 检测胰腺癌中p33ING1b蛋白表达及基因变化情况,以了解p33ING1b在肿瘤发生过程中的作用。方法 采用免疫组化、聚合酶链反应单链构象多态性技术(PCR SSCP)和杂合型缺失(LOH)技术,检测胰腺癌中p33ING1b表达及p33ING1b基因变化情况。结果 ING1b蛋白的阳性表达率为85% (34/40),SSCP显示在40例病例中仅1例突变,LOH率为60.9% (14/23)。结论 突变与缺失表达并不是p33ING1b的主要失活形式,染色体改变可能导致p33ING1b功能下降,从而引发肿瘤发生。
- 于观贞朱明华祝峙倪灿荣陈颖李芳梅
- 关键词：胰腺肿瘤聚合酶链式反应单链构象多态性
- 不同p53状态的肝癌细胞系DNA损伤修复能力的比较被引量：5
- 2003年
- 目的 观察不同 p5 3状态的肝癌细胞在DNA损伤因素存在下 ,探讨 p5 3在肝细胞癌发生过程中的作用。 方法 选用内源性表达野生型 p5 3、突变型 p5 3、p5 3全基因缺失的HepG2、PLC /PRF / 5、Hep3B肝癌细胞系 ,将含有 p5 3结合序列的CAT报告基因质粒分别转染各细胞 ,通过ELISA方法检测报告基因CAT活化情况 ,观察 p5 3功能状态 ;用细胞生长曲线比较不同p5 3状态的细胞生长速度的差异 ;给予一定剂量的紫外线照射 ,检测各细胞程序外DNA损伤修复 (UDS)能力 ;观察紫外线照射后细胞克隆形成情况 ,反映不同细胞系在紫外线照射后细胞存活率的不同。结果 报告基因CAT在HepG2细胞表达最强 ,而在PLC /PRF / 5、Hep3B肝癌细胞均处于较低水平 ,说明HepG2细胞具有功能性的p5 3表达 ;HepG2细胞生长速度明显慢于其他两种细胞 ;紫外线照射后 ,HepG2具有较好的DNA损伤修复能力以及较高的细胞生存率。 结论 野生型 p5 3具有抑制肝癌细胞生长、保持细胞良好的DNA损伤修复的功能。
- 曲建慧朱明华文军慧林静李芳梅倪灿荣
- 关键词：P53肝癌细胞DNA损伤DNA修复能力细胞基因
- 转化生长因子-β1的Smad4非依赖性途径对胰腺癌细胞生长的影响被引量：2
- 2005年
- 目的探讨转化生长因子(TGF)-β1过表达对Smad4纯合性缺失的胰腺癌细胞生长的影响。方法将含TGF-β1的真核表达载体转染到人胰腺癌细胞BxPC3中,通过流式细胞仪、生长曲线以及细胞迁移试验观察其对BxPC3生物学行为的影响。用Western印迹法检测TGF-β1对BxPC3细胞中p21WAF/CLIP1表达的影响。结果转染TGF-β1基因的BxPC3细胞的形态发生明显改变,其生长速度自第4天开始较转染空载体pcDNA3的阴性对照组减慢。发现BxPC3细胞组S期细胞(27.53±0.02)%与pcDNA3组(26.32±0.01)%的比例均高于TGF-β1组(17.01±0.03)%,P<0.01,表明TGF-β1阻止细胞进入S期。细胞迁移试验表明转染的细胞运动能力明显增加。Western印迹法检测表明p21WAF/CLIP1的表达也相应增高。结论TGF-β1的Smad4非依赖性途径通过增强p21WAF/CLIP1的表达使细胞阻滞于G-G期,从而抑制细胞生长,并且该通路能诱导上皮细胞向间叶细胞转变。
- 陈颖朱明华于观贞李芳梅刘晓红
- 关键词：转化生长因子-Β1SMAD4非依赖性胰腺癌细胞生长癌细胞蛋白质P21
- HBx及其羧基末端40个氨基酸对SMMC-7721肝细胞增殖的影响被引量：6
- 2005年
- 目的研究HBx羧基末端40个氨基酸对肝癌细胞增殖的影响及作用机制。方法用HBx及去除羧基末端40个氨基酸HBx3′40转染含野生型(wt)p53的SMMC7721细胞,经稳定筛选后,通过细胞生长曲线绘制以及平板克隆形成实验来观察HBx对细胞增殖的影响,并通过裸鼠体内的成瘤实验观察各移植瘤的大小及重量、增殖细胞核抗原(PCNA)表达的变化。结果细胞生长曲线表明HBx及HBx3′40的细胞生长速度明显较空载体增快;平板克隆形成试验表明克隆形成率,HBx组(48.7±8.1)%及HBx3′40组(82.8±6.0)%较对照组(26.9±3.5)%明显增多(P<0.05),pcDNA3HBx3′40组又较pcDNA3HBx组增多(P<0.05)。裸鼠成瘤实验pcDNA3HBx3′40组肿瘤的大小及重量(1.476±0.232、0.987±0.279)%及pcDNA3HBx组(0.412±0.212、0.395±0.159)%较对照组(0.051±0.024、0.033±0.004)%明显增大(P<0.05),肿瘤细胞的PCNA表达率pcDNA3HBx3′40组(69.25±3.77)%及pcDNA3HBx组(59.00±2.58)%也较对照组(37.67±2.52)%明显增强(P<0.05),且以HBx3′40组的表现更为明显(P<0.05)。结论HBx的羧基末端40个氨基酸可刺激细胞增殖,其突变可能与肝癌细胞发生过程中促进癌细胞的恶性转化有关。
- 林静朱明华曲建慧倪灿荣李芳梅
- 关键词：增殖细胞核抗原SMMC-7721细胞肝细胞增殖羧基末端HBX氨基酸
- 单链抗体细胞内表达抗HIV-1、HBV病毒复制的实验研究
- 朱明华戴益民李芳梅顾广玉肖农
- 该项目克隆并鉴定了鼠源性HIV-1 Rev和逆转录酶单链抗体基因、人源性HBcAg单链抗体基因。以逆转录病毒为载体进行了单链抗体细胞内表达和抗病毒复制的实验研究，结果显示Rev单链抗体的抑制病毒复制效率大于90%，逆转录...
- 关键词：
- 关键词：细胞内免疫单链抗体病毒
- 乙型肝炎病毒X基因经p53依赖性与非依赖性途径对p21^(WAF1)表达的影响被引量：11
- 2004年
- 背景与目的研究表明,在不同情况下乙型肝炎病毒X基因(HBx)对p21WAF1的表达具有不同的影响,但作用机制仍不清楚。本研究的目的是探讨HBx对p53下游基因p21WAF1的影响。方法通过正、反义野生型p53(wtp53)与HBx单转染及共转染人肝癌细胞株SMMC-7721细胞,以及HBx转染不同内源性p53状态的肝癌细胞株,检测p21WAF1启动子荧光素酶基因表达,并用流式细胞仪观察细胞周期的变化,Westernblot法比较p53、p21WAF1表达水平的变化。结果正、反义wtp53与HBx单转染及共转染SMMC-7721细胞,HBx与正义wtp53共转染组(1.007±0.098)与单转染正义wtp53(0.490±0.012)相比,p21WAF1启动子荧光素酶基因表达明显升高(P<0.05),其余各组HBx均可导致p21WAF1启动子荧光素酶基因表达明显减少(P<0.05)。Westernblot法表明HBx可导致p53的表达增加,但p53表达较低的SMMC-7721细胞转染HBx后p21WAF1蛋白的表达减弱,p21WAF1启动子荧光素酶基因表达(0.053±0.010)也较对照组(0.094±0.013)明显减少(P<0.05),而p53表达较强的HepG2细胞转染HBx后p21WAF1蛋白的表达增强、p21WAF1启动子荧光素酶基因的表达(1.252±0.052)较对照组明显升高(0.767±0.031)(P<0.05)。细胞周期结果表明瞬时转染HBx的SMMC-7721和Hep3B细胞停滞在G0-G1期细胞数(42.31%、36.96%
- 林静朱明华曲建慧李芳梅倪灿荣
- 关键词：P53基因乙型肝炎病毒X
- 乙型肝炎病毒X和p53对肝癌细胞生长的影响被引量：41
- 2003年
- 目的 探讨乙型肝炎病毒X(HBx)基因与p5 3在损伤情况下的相互作用及对肝癌细胞生长的影响及作用机制。方法 通过构建正义及反义野生型 (wt)p5 3 ,与HBx分别单转染或共转染含wtp5 3 ( + )、HBV( - )的人肝癌细胞株SMMU 772 1细胞 ,在吡柔比星的诱导下 ,用流式细胞仪检测对细胞凋亡的影响 ,及HBx对细胞周期的影响 ,并通过检测含p5 3结合位点p2 1Waf1启动子荧光素酶活性来观察HBx是否通过p5 3影响p2 1Waf1的表达 ,以及绘制细胞生长曲线观察HBx对SMMU 772 1细胞生长的影响。结果 在吡柔比星的诱导下 ,HBx能够促进细胞凋亡 ,转染空载体组及pcDNA3HBx组细胞凋亡率分别为 5 3 2 %和 12 66%。但HBx对外源性p5 3诱导的细胞的凋亡具有抑制作用 ,转染空载体、正义pcDNA3wtp5 3及正义pcDNA3wtp5 3 +pcDNA3HBx组细胞凋亡率分别为 5 3 2 %、11 72 %、4 67%。同时处在G0 ～G1期瞬时表达及稳定转染HBx细胞数较对照组分别减少 4 79% ,10 2 5 %。而且HBx可抑制p2 1Waf1启动子荧光素酶的活性 (P <0 0 5 )及促进细胞生长。结论 细胞在DNA损伤因素的作用下 ,HBx可能通过抑制p5 3导致p2 1Waf1的表达降低 ,引起停滞在G0 ～G1期的细胞减少 。
- 林静朱明华祝峙曲建慧李芳梅倪灿荣
- 关键词：乙型肝炎病毒XP53基因肝癌癌细胞细胞周期蛋白
