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人骨髓间质干细胞ING4基因的克隆及其慢病毒表达载体构建: 2007年; 目的:克隆人骨髓间质干细胞ING4(inhibitor of growth famility,member4)基因,构建其慢病毒表达载体PNL-ING4。方法:提取人骨髓间质干细胞(hMSCs)总RNA,经RT-PCR扩增出ING4cDNA,克隆至PMD19-T载体,选择阳性克隆进行酶切鉴定和测序,构建慢病毒表达载体PNL-ING4,用双酶切、基因测序进行鉴定。结果:RT-PCR产物为750 bp的条带,双酶切和基因测序正确。结论:成功从hMSCs克隆了ING4基因并成功构建其慢病毒表达载体PNL-ING4,为进一步研究ING4基因的作用与抗肿瘤机制奠定了基础。; 张蕾蕾许文荣乔纯钱晖朱伟李继刚周洪兴司煜安周宗海阴晴; 关键词：ING4 慢病毒表达载体人骨髓间质干细胞克隆

FP248基因表达检测在白血病和肿瘤诊断中的意义: 2008年; 目的用real-time PCR和RT-PCR检测FP248 mRNA表达,研究其在白血病和肿瘤诊断中的意义。方法用real-time PCR和RT-PCR检测肿瘤细胞株(SGC-7901、A549、95D、SW480、U937、PC3)和白血病(ALL、CML、AML)患者骨髓或外周血以及胃癌等消化道肿瘤患者癌组织中FP248 mRNA的表达水平;用RT-PCR技术检测消化道肿瘤患者外周血单个核细胞(PB-MC)FP248 mRNA的表达。结果SGC-7901细胞株FP248 mRNA强阳性,A549和95D细胞弱阳性,其他细胞株阴性;ALL、CML、AML患者骨髓及PBMC FP248表达上调;胃癌、直肠癌、结肠癌患者癌组织中FP248 mRNA的表达高于癌旁组织,食道癌组织为阴性;胃癌、结肠癌和直肠癌患者PBMC未检测到FP248 mRNA。结论FP 248的表达可能在白血病和消化道肿瘤的发生发展中起重要作用;检测该基因的表达可能有助于白血病和消化道肿瘤的诊断。; 李继刚许文荣钱晖朱伟王胜步雪峰张蕾蕾徐静司煜安陈忠周忠海周洪兴施晓凤; 关键词：FP 白血病消化道肿瘤 REAL-TIME

TNFα-Tumstatin融合基因腺病毒载体的构建及其在人脐带间质干细胞中的表达被引量：1: 2008年; 目的:构建携带绿色荧光蛋白的TNFα-Tumstatin融合基因腺病毒表达载体,转染人脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)。方法:设计含有GM-CSF信号肽序列和BglⅡ及HindⅢ酶切位点的引物,PCR扩增TNFα-Tumstatin,将扩增产物亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV上,重组穿梭质粒经PmeⅠ线性化后转化含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183中同源重组。筛选获得含有融合基因的重组腺病毒质粒,酶切鉴定并测序。重组病毒质粒用PacⅠ酶切线性化后转染293A细胞,经过包装、扩增后感染hUCMSCs并检测细胞内融合基因的表达。结果:重组腺病毒质粒经PCR和PacⅠ酶切鉴定,证实含有TNFα-Tumstatin融合基因,测序结果和设计片段的序列一致。重组腺病毒感染的hUCMSCs表达绿色荧光蛋白和融合基因。结论:成功构建了TNFα-Tumstatin融合基因的腺病毒表达载体,能高效率感染hUCMSCs,为进一步研究融合基因修饰的hUCMSCs抗肿瘤效应奠定了基础。; 周忠海许文荣朱伟乔纯王兴忠陈圆司煜安徐静周洪兴张蕾蕾李继刚钱晖; 关键词：腺病毒载体融合基因细胞转染

体外诱导人骨髓间质干细胞分化为肝细胞样细胞被引量：4: 2008年; 目的:探讨人骨髓间质干细胞(MSCs)在体外特定条件下是否可以转化为肝细胞样细胞。方法:分离培养人骨髓间质干细胞,采用肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibrob lastgrowth factor,bFGF)及CC l4损伤的小鼠肝脏共培养等诱导方式,在不同时间点分别用RT-PCR和荧光定量PCR检测肝细胞特异性基因的表达,免疫组织化学染色检测肝细胞标志。结果:在HGF和bFGF诱导第7天时甲胎蛋白(alphafetal prote in,AFP)、细胞角蛋白18(cytokeratin-18,CK18)和色氨酸2,3-双加氧酶(tryptophan 2,3-d ioxygenase,TDO)基因表达阳性,CK18和TDO的表达随诱导时间延长增高;第7天诱导细胞组织化学染色AFP、白蛋白(ALB)、肝细胞核因子(hepatocyte nuc lear factor,HNF)、肝细胞特异性抗原(HSA)和CK18表达阳性。与损伤小鼠肝组织共培养21 d后细胞表达AFP和TDO。结论:HGF和bFGF联合诱导以及与CC l4损伤肝组织共培养的方法可体外促进人MSCs分化为肝细胞样细胞,可为肝脏疾病或肝损伤的干细胞治疗提供细胞来源。; 司煜安许文荣严永敏钱晖朱伟周忠海徐静周洪兴曹慧玲李继刚; 关键词：骨髓间充质干细胞肝细胞细胞分化

白血病细胞、多种肿瘤细胞及胃癌组织中pokemon基因的定量检测被引量：1: 2008年; 目的建立检测pokemon基因表达的实时荧光定量PCR的方法,用以研究pokemon在白血病细胞、多种肿瘤细胞株及胃癌组织中的表达水平。方法通过RT-PCR、T-A克隆、real-time PCR等方法精确测定并比较pokemon基因在白血病细胞、人结肠癌细胞株(SW480)、人胃癌细胞株(SGC)、人肺癌细胞株(LTEP)、人髓系白血病细胞株(U937)、人前列腺癌细胞株(PC3)、人宫颈癌细胞株(HELA)、人内皮细胞株(UEVC-304)、健康人外周血单个核细胞(PBMC)、胃癌组织中的表达水平。绘制pokemon基因real-time PCR的标准曲线。结果急性淋巴细胞白血病(ALL)中pokemon的表达显著高于急性粒细胞白血病(AML)和慢性粒细胞白血病(CML)及健康人PBMC(P<0.05);SW480中的表达量明显高于SGC、LTEP、U937、PC3、HELA和UEVC-304(P<0.05);胃癌组织表达量高于胃癌旁组织,阳性率为5/7。结论建立的测定pokemon基因表达的real-timePCR方法稳定、准确,pokemon基因可以作为某些肿瘤的一个新的靶点,其表达水平的检测可作为判断某些肿瘤发生的参考指标。; 徐静许文荣钱晖朱伟李继刚周洪兴周忠海阴晴司煜安张蕾蕾; 关键词：POKEMON 肿瘤实时定量PCR 白血病

生长抑制因子4基因在胃癌中的表达及临床意义: 2010年; 目的检测生长抑制因子4(ING4)在胃癌患者组织及外周血中的表达,探讨其与胃癌发生、发展的相关性及在胃癌诊疗中的应用。方法收集30例胃癌患者手术切除的癌组织、对应的癌旁组织和外周血,用RT-PCR、实时定量RT-PCR、巢式RT-PCR检测ING4 mRNA表达;用western blot和免疫组织化学法在蛋白质水平上进行验证,分析ING4在胃癌中的表达水平与临床病理因素的相关性。结果 RT-PCR和定量结果显示76.7%(23/30)的胃癌组织ING4表达低于对应的癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);western blot和免疫组织化学法在蛋白质水平上证实了胃癌组织较癌旁组织中ING4的表达水平下降。胃癌组织ING4的表达与肿瘤分化状态和复发相关,但与临床分期无关。分化水平越低,ING4 mRNA表达越低(P<0.05);复发的患者癌组织ING4 mRNA表达显著低于未复发患者(P<0.05)。胃癌患者外周血ING4 mRNA的表达也显著低于健康人。结论胃癌组织ING4的表达下调,且与胃癌的分化与复发相关,ING4的基因和蛋白质水平检测可能作为胃癌病程进展或复发监测的新指标。; 钱晖李继刚王胜王梅彭秀娟顾红兵陶洋许文荣; 关键词：生长抑制因子4 胃癌 RT-PCR 免疫组化免疫印迹

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李继刚