李永辉
- 作品数：9 被引量：73H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市科技攻关项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- 生物活性寡肽在药学研究中的应用被引量：16
- 2001年
- 生物活性寡肽的研究是当今化学基因学研究领域中的热点之一 ,本文综述了天然活性寡肽的临床应用、几类重要的生物活性寡肽的药理学作用及最新的生物活性寡肽的筛选方法 。
- 李永辉
- 关键词：药学研究药理学肿瘤抗原肽
- 苯丙氨酸生物合成的研究进展被引量：16
- 2002年
- 代谢工程是利用分子生物学原理系统分析代谢途径,设计合理的遗传修饰策略从而优化细胞的生物学特性。本文对代谢工程及其在氨基酸生产上的应用进行了简单的回顾,比较了苯丙氨酸的几种合成途径,重点综述了苯丙氨酸生物合成的代谢途径、相关酶及其调控方式、代谢流和转运系统的分析研究,并对苯丙氨酸生产策略的优化及未来发展进行了展望。
- 李永辉刘云徐琪寿
- 关键词：苯丙氨酸生物合成代谢工程
- qa-3稀有密码子和mRNA结构改造及其在大肠杆菌中的高效表达被引量：21
- 2006年
- 奎尼酸脱氢酶的高表达是奎尼酸生物合成的代谢工程研究的关键和基础。粗糙脉孢菌基因组中编码奎尼酸脱氢酶的基因qa-3在大肠杆菌中不表达,根据大肠杆菌密码子使用频率分析qa-3基因,发现有27个稀有密码子,其中编码Arg(R)的有8个,编码Gly(G)的有9个。编码精氨酸的AGG(AGA)两个稀有密码子紧密相连(R区),另外还有个相对比较集中的GGG密集区G区。进一步通过计算机分析其qa-3基因mRNA二级结构,发现改变5′和3′末端个别碱基对其二级结构的影响很大,可以使mRNA的自由能由野生型的-374.3kJ/mol降低到最小-80.5kJ/mol,从而大大减少mRNA两端二级结构的产生,而仅仅改变R区和G区的稀有密码子自由能变化很小。通过对该基因密码子改造和优化5′和3′末端对其mRNA二级结构的影响,在大肠杆菌中表达真菌的基因qa-3,并测到了奎尼酸脱氢酶活性,为构建产奎尼酸工程菌株奠定基础。
- 刘礼兵刘云何华庆李永辉徐琪寿
- 关键词：密码子MRNA二级结构
- 大肠杆菌tktA基因的克隆表达被引量：5
- 2002年
- tktA是芳香族氨基酸生物合成共同途径的关键酶基因之一,在大肠杆菌中,tktA编码转酮酶A,在磷酸戊糖途径生成4-磷酸赤藓糖中起主要作用。采用PCR方法从大肠杆菌K-12株中扩增到tktA,并实现了高效表达,TktA活性提高了3.9倍,并且使芳香族氨基酸生物合成共同途径中关键中间产物DAHP的产量有所提高。
- 李永辉刘云王世春张学清宋文全程莉徐琪寿
- 关键词：大肠杆菌克隆生物合成代谢工程
- 视黄醇结合蛋白的分离纯化被引量：1
- 2004年
- 押在变性条件下,应用Sephacryl-100凝胶过滤和Source-30Q阴离子交换两步分离,实现了分离纯化性质不稳定、易于降解的视黄醇结合蛋白(RBP)之目的。最后经过分步缓慢复性,获得具有生物活性的RBP,为其单克隆抗体制备及最终应用于临床营养评价和相关疾病的诊断创造了条件。
- 王世春刘云李永辉徐琪寿
- 关键词：视黄醇结合蛋白纯化复性单克隆抗体
- 芳香族氨基酸生物合成代谢途径调控研究
- 该研究根据代谢工程原理系统分析了细胞代谢网络,并利用DNA重组技术合理设计细胞代谢途径及其遗传修饰,进而完成细胞特性改造.芳香族氨基酸包括酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸,是人体和动物体内的必需氨基酸.苯丙氨酸既是合成新型甜味剂...
- 李永辉
- 关键词：生物合成代谢工程
- 文献传递
- 大肠杆菌莽草酸途径限速酶多基因盒的构建及基因替换被引量：2
- 2004年
- 优化大肠杆菌芳香族氨基酸生物合成代谢途径 ,构建莽草酸代谢途径限速酶的多基因盒PtacaroAaroCaroBkan .利用Red重组系统 ,在破坏整体调控基因csrA时 ,替换多基因盒 .Southern印迹证实 ,基因破坏和基因替换是成功的 .摇瓶发酵表明 ,构建的基因工程菌株比原始菌株基础产酸率提高了 4 5
- 李永辉王世春刘云郭长江蒋与刚徐琪寿
- 关键词：RED重组系统
- 大肠杆菌ppsA和tktA基因的串联表达被引量：9
- 2003年
- ppsA和tktA是芳香族氨基酸生物合成中心途径的两个关键酶基因 ,在大肠杆菌中 ,ppsA基因编码磷酸烯醇式丙酮酸合成酶A(PpsA) ,该酶催化丙酮酸合成磷酸烯醇式丙酮酸 ;tktA基因编码转酮酶A ,该酶在磷酸戊糖途径中生成 4 磷酸赤藓糖起主要作用。采用PCR方法从大肠杆菌K 12株中扩增到ppsA和tktA ,并实现了两基因的高效表达 ,其中ppsA活性提高了 10 .8倍 ,tktA活性提高了 3.9倍 ,当这两个基因串联在一个质粒上导入大肠杆菌进行表达时 ,PpsA的活性变化较大 (2 .1～ 9.1倍 ) ,TktA的活性相对稳定 (3.9～ 4 .5倍 ) ,且这两个基因单独表达和串联表达都能使芳香族氨基酸生物合成共同途径中关键中间产物DAHP的产量提高 ,且串联表达比单独表达较高。
- 李永辉刘云王世春童朝阳徐琪寿
- 关键词：大肠杆菌
- 酵母双杂交筛选与视黄醇结合蛋白有相互作用的蛋白质
- 2004年
- 为了研究视黄醇结合蛋白 (RBP)在维生素A代谢调控中的作用和与相关疾病发生、发展的关系 ,以RBP作为诱饵基因构建了融合表达载体pGBKT7 RBP ;在排除自身转录激活活性的基础上 ,与人肾脏cDNA预转库融合筛选 (PretransformedMATCHMAKERLibraries) ,经营养缺陷型和X α gal显色鉴定 ,从中筛选出三种与RBP有相互作用的新蛋白质 。
- 王世春刘云李永辉徐琪寿
- 关键词：视黄醇结合蛋白相互作用酵母双杂交维生素A基因克隆
