张雅妮
- 作品数：8 被引量：28H指数：5
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 模式抗原破伤风毒素C蛋白的克隆、表达条件优化及免疫原性初步分析被引量：2
- 2008年
- 目的获得高纯度、高免疫原性的破伤风毒素C片段(TTC)蛋白。方法以PCR从破伤风杆菌质粒DNA中扩增TTC基因片段,将其插入载体pET43.1a(+)并导入大肠杆菌BL21(DE3)plysS中表达。用Ni2+-NTA琼脂糖柱纯化融合蛋白,经凝血酶酶切,再用Ni2+-NTA琼脂糖柱分离目的蛋白。SDS-PAGE和免疫印迹分析目的蛋白的相对分子质量和抗原性,动物免疫实验鉴定其免疫原性。结果获得1373bp的TTC基因片段,构建成重组表达载体pET43.1a(+)-TTC并在大肠杆菌中表达。TTC-Nus融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的22%,酶切后TTC蛋白可与载体蛋白有效分离,获得纯度为95.5%的TTC蛋白,该蛋白可被破伤风抗毒素识别;将TTC蛋白免疫小鼠后,免疫血清可与破伤风毒素特异性结合,三次免疫后其抗体效价可达1∶25600。结论所获TTC蛋白纯度高,免疫原性好,为研究体内外抗原提呈、免疫应答提供了良好的模式抗原。
- 王明永张雅妮雷鸣左大明张丽芸陈政良
- 关键词：基因克隆免疫原性
- 重组人N端缺失MBL的原核表达及其活性研究被引量：1
- 2008年
- 目的原核表达具生物学活性的重组人N端缺失甘露聚糖结合凝集素(rhMBL△N)蛋白。方法应用PCR技术,从含中国人野生型MBL cDNA的质粒pGEM-MBL中扩增rhMBL△N基因片段,插入pET43.1a载体后,转化E.coliBL21(DE3)感受态菌诱导表达rhMBL△N蛋白。应用Ni2+-NTA琼脂糖柱纯化目的蛋白,以SDS-PAGE、Western blot和ELISA进行鉴定。结果从pGEM-MBL中扩增到长约620bp的DNA片段,构建的重组表达载体经BamHⅠ和EcoRⅠ酶切后出现约7270bp和620bp的片段,测序结果与预期的完全一致。表达的重组蛋白纯化后,经SDS-PAGE鉴定为Mr97000的蛋白。ELISA证实,纯化蛋白能与抗重组人MBL抗体结合,具备配体结合活性并能与人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶1、2的N端片段结合。结论获得了可表达rhMBL△N的菌株和具活性的rhMBL△N蛋白,为进一步研究提供了条件。
- 雷鸣左大明王明永张雅妮陈政良
- 关键词：甘露聚糖结合凝集素原核表达活性
- 补体系统与树突状细胞的相互关系被引量：5
- 2008年
- 树突状细胞和补体系统是天然免疫的两个重要组成部分,两者有着极其紧密的联系。树突状细胞是补体产生的重要来源,其合成分泌的补体成分能调节自身的分化和发育,进而影响获得性免疫应答。
- 张雅妮陈政良
- 关键词：树突状细胞补体天然免疫获得性免疫
- MBL抑制Jurkat细胞增殖和分泌IL-2被引量：10
- 2010年
- 甘露聚糖结合凝集素（MBL）在天然免疫中起关键作用,但其对T淋巴细胞介导获得性免疫应答是否有影响尚不得而知。用非特异性刺激物PHA、PMA及ionomycin活化人T淋巴细胞株Jurkat细胞,ELISA和流式细胞术检测MBL与Jur-kat细胞的结合能力,WST-1和ELISA分析MBL对PHA、PMA及ionomycin活化Jurkat细胞的增殖及分泌细胞因子IL-2的影响。结果显示：MBL可结合PHA/PMA活化的Jurkat细胞,与未活化Jurkat细胞结合微弱;高浓度MBL（10~20mg/L）能以浓度依赖的方式抑制PHA/PMA活化的Jurkat细胞增殖,加入外源IL-2不能逆转这种作用;高浓度MBL（10~20 mg/L）能抑制PMA/ionomycin活化的Jurkat细胞分泌细胞因子IL-2,且呈剂量依赖关系。提示MBL可能在调节T细胞介导的获得性免疫应答中起一定作用。
- 王明永张雅妮雷鸣张丽芸卢晓陈政良
- 关键词：甘露聚糖结合凝集素JURKAT细胞T淋巴细胞
- 联合应用配体和单克隆抗体亲和层析纯化人血浆天然MBL蛋白被引量：12
- 2008年
- 目的优化从人血浆分离纯化天然甘露聚糖结合凝集素(MBL)的方法。方法联合应用甘露聚糖-Sepharose 4B层析柱和抗人MBL-CRD单克隆抗体-Sepharose 4B层析柱,3次上柱亲和层析分离,分别用EDTA、D-甘露糖、Gly-HCl(pH2.4)溶液洗脱结合蛋白。以SDS-PAGE、Western blot和ELISA等技术鉴定纯化产物。结果所获纯化MBL为Mr28000和Mr32000肽链构成的功能性寡聚体,其纯度较高,可与配体甘露聚糖结合并有效凝集酵母菌,还能与U937细胞胶凝素受体结合。结论联合使用配体亲和层析和单克隆抗体亲和层析从血浆中分离纯化MBL,获得高纯度、高活性的天然MBL蛋白。
- 王明永张丽芸张雅妮雷鸣刘莹陈政良
- 关键词：甘露聚糖结合凝集素配体单克隆抗体
- MBL与人单核细胞系THP1/CD14细胞结合及其特性研究被引量：9
- 2008年
- 采用Cell-ELISA和流式细胞术,发现人单核细胞系THP1/CD14在生理条件下可结合甘露聚糖结合凝集素(MBL),这种结合具有Ca2+依赖性,能被甘露糖、N-乙酰葡糖胺、D-葡萄糖、半乳糖、蔗糖、海藻糖等及重组人MBL-CRD蛋白和MBL-CLR蛋白所部分抑制,但C1q或抗人C1qR单克隆抗体对之无影响。还发现,炎性状态下的THP1/CD14细胞与MBL的结合增强。结果表明,THP1/CD14细胞表达Ca2+依赖的、糖敏感的MBL受体或结合蛋白,包括对CLR特异和CRD特异的两种受体,均与C1q受体无关;炎性刺激可上调THP1/CD14细胞MBL受体或结合蛋白的表达。
- 张雅妮王明永雷鸣卢晓陈政良
- 关键词：甘露聚糖结合凝集素
- 甘露聚糖结合凝集素调节THP1//CD14细胞细胞因子分泌机制的初步探索
- 尽管近年来天然免疫研究进展十分迅速,但是天然免疫的本质亟待揭示和阐明。随着Janeway CA Jr等提出天然免疫通过模式识别作用启动获得性免疫应答并左右其应答类型的假说,模式识别分子成为了免疫学的研究热点之一。模式识别...
- 张雅妮
- 关键词：甘露聚糖结合凝集素TOLL样受体
- 文献传递
- MBL与Raji细胞结合特性的研究被引量：14
- 2008年
- 甘露聚糖结合凝集素(MBL)作为关键的天然免疫模式识别分子已得到共识,但其在获得性免疫应答中是否发挥作用目前尚不清楚.采用酶联免疫吸附试验分析MBL能否与Raji、THP1/CD14、Jurkat和红细胞结合,并采用流式细胞术着重研究其与Raji细胞结合特性.结果显示:MBL以浓度依赖方式结合Raji、THP1/CD14、Jurkat细胞,红细胞则否.MBL与Raji细胞结合是Ca2+依赖的,且能被甘露糖、葡萄糖、N-乙酰葡糖胺所抑制;C1q或抗C1qR单克隆抗体能部分抑制MBL与Raji细胞结合;重组人MBL-CRD蛋白或MBL-CLR蛋白均能抑制MBL与Raji细胞结合,两者联合应用则可完全阻断这种结合.研究资料表明,B淋巴细胞系Raji细胞表达Ca2+依赖性、糖敏感的MBL受体,包括对CLR特异和CRD特异的两种受体,前者为MBL和C1q的共同受体.进一步的功能研究显示,高浓度MBL(10～50mg/L)对Raji细胞的生长具有显著抑制作用,且呈剂量依赖关系.提示MBL作为一种重要的模式识别分子,不仅发挥天然免疫功能,而且可能在调节获得性免疫应答中起一定作用.
- 王明永张雅妮张丽芸卢晓雷鸣李瑞芳陈政良
- 关键词：甘露聚糖结合凝集素RAJI细胞B淋巴细胞受体
