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Parkin蛋白C端的表达及抗体的制备: 2002年; 目的 :构建Parkin基因 3’端的表达质粒 ,在大肠杆菌中表达并制备多克隆抗体。方法 :构建Parkin基因3’端 (937～ 195 9bp)的谷氨酰胺硫转移酶 (glutathion sulfate transferase ,GST)融合表达质粒 ,在JM 10 5中获得表达。用Triton 10 0 (1% )和Tween 2 0 (1% )处理 ,并用亲和层析纯化表达产物 ,将其免疫新西兰兔 ,用免疫印迹分析收获的兔抗血清。结果 :构建的ParkinC表达质粒在JM 10 5中获得表达 ,以分子量为 4 2kD的包涵体存在 ;目的蛋白纯度为 95 % ;得到效价为 1∶6 4的抗血清 ;免疫印迹分析表明 ,制备的抗血清可与鼠脑细胞抽提物中 5 1 6kD的蛋白产生特异的免疫反应。结论 :Parkin蛋白C端在 JM 10 5; 欧阳珏夏昆郑多张灼华; 关键词：C端原核表达多克隆抗体帕金森氏病

传承百年教育积淀发展湘雅特色住院医师规范化培训模式被引量：2: 2015年; 中南大学湘雅医学院高度重视住院医师规范化培训工作,围绕职业道德、职业技能、病人安全、医学伦理、团队精神、创新及自我提高能力等六大核心目标,完善管理政策,健全管理体系,加强师资队伍建设,重视国际合作与交流,对住院医师实施"阶梯式"培训,并建立了对学员、教师和基地的全方位全流程考评体系,形成了具有特色的湘雅住院医师规范化培训模式。; 张灼华; 关键词：住院医师

运用酵母双杂交技术筛选LRRK2相互作用蛋白(英文): 2008年; 目的:使用酵母双杂交来筛选LRRK2基因的相互作用蛋白,以研究其功能。方法:使用的诱饵片段包含MAPKKK和ROC功能域的一部分与COR功能域的全长。诱饵片段由聚合酶链式反应(PCR)扩增后连入酵母表达质粒pGBKT7,pGBKT7-bait质粒经测序验证后转化酵母菌株AH109,用免疫印迹来检验该质粒在酵母中的表达,人类胎脑cDNA文库被转化到能稳定表达诱饵蛋白的酵母菌株中,并铺到含有X-α-gal的四缺(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)的培养皿上。分别使用含有pGBKT7或pGBKT7-bait的AH109酵母菌株进行回交检测,进一步确证从初步筛选中获得的阳性克隆,并用生物信息学来分析其中的文库质粒。结果:获得9个真阳性的克隆,经生物信息学分析其中有3个克隆中的序列不在已知基因的开放阅读框内,其余6个克隆中的序列在以下几个已知基因的开放阅读框中:STRBP,BAG5,PTPN23,L3MBTL3,RA-LYL,KIAA1783。结论:经酵母双杂交后成功地获得了真阳性克隆。这些相互作用蛋白将为研究LRRK2的功能、帕金森病发病机制和其他神经性疾病提供一些新的线索。; 郑晓业杨眉谭洁琼潘乾龙志高戴和平夏昆夏家辉张灼华

一种新的人胚胎干细胞自身来源的滋养层支持其体外培养被引量：5: 2008年; 通过人胚胎干细胞(Human embryonic stemcells,hESCs)经体内分化获取间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)为人胚胎干细胞提供一种新的滋养层。将约5×106个hESCs注射入重症免疫联合缺陷小鼠形成畸胎瘤,8周后再从畸胎瘤中分离MSCs并鉴定,将MSCs作为hESCs的滋养层细胞,并检测和观察hESCs的生长情况、细胞特性和分化能力。从畸胎瘤中获得了纯度较高的具有类似骨髓来源的MSC特性的细胞群,其形态相似、表面抗原标志相似(CD34和CD45阴性,CD29、CD49b、CD105、CD73和CD90阳性),经诱导可以向成骨细胞和成脂细胞分化。将hESCs在MSCs滋养层细胞上传代培养10代以上,hESCs依然具有正常的细胞形态,反转录PCR证实其特异转录因子Oct4、Nanog的表达,干细胞表面标记SSEA-1显示为阴性,SSEA-4、TRA-1-60、TRA-1-81显示为阳性,碱性磷酸酶染色显示为阳性,并且核型正常。体外EB形成和体内畸胎瘤形成证明了其全能性。因此来源于hESCs本身的MSCs可以被用来作为支持胚胎干细胞生长并维持其未分化状态的滋养层细胞。; 安世民曾桥滕祥云龙志高李娟潘乾邬玲仟梁德生夏昆夏家辉张灼华; 关键词：人胚胎干细胞间充质干细胞滋养层

电压门控快钾通道蛋白Kv4.3的抗体制备及检测: 2005年; Kv4(voltagegatedK+channel4)是在哺乳动物心脏和脑组织中广泛表达的一类钾离子通道蛋白.它主要介导心肌细胞和神经细胞中的A-型(快速失活型)K+电流,是构成中枢神经系统和心肌细胞中的快速失活外向型电流的基础.Kv4.3是电压门控钾离子通道3种α亚基之一.通道中含有许多具有调节作用的辅助亚基,它们通过与Kv4.3互作实现对通道的调节.本研究根据人类氨基酸序列以MAPs法制备抗Kv4.3抗体.MAP由4条相同的17肽段连接成锥形结构分子.以MAP或MAP与佐剂免疫新西兰白兔,抽提了免疫前血清和免疫后血清,并对抗体的滴度进行评价.MAPs在白兔体内诱导出了效价比为1:1000的抗Kv4.3特异性抗体.; 邓小云刘宇蔡芳潘乾龙志高夏昆夏家辉张灼华; 关键词：MAPS WESTERN BLOTTING 免疫沉淀

角膜环状皮样瘤等人类重要疾病家系收集、致病基因定位与克隆: 夏昆唐北沙张宝荣胡正茂冯永杨一峰邬玲仟戴和平潘乾龙志高梁德生沈璐江泓张灼华夏家辉; 本研究工作是在“863”计划、“973”计划、国家自然科学基金和教育部课题支持下开展的。　　目的与意义：抢救和保藏我国宝贵的遗传资源，利用其克隆致病基因，从根本上弄清遗传病的发病机理，更好的服务人类健康。取得的主要成果及...; 关键词：; 关键词：腓骨肌萎缩症

阿尔兹海默病相关基因nicastrin启动子的克隆和鉴定被引量：4: 2006年; 目的:克隆和鉴定与阿尔兹海默病发生有关的γ-分泌酶的组成蛋白之一n icastrin(NCT)基因的启动子,用于开展其转录调控机制的研究。方法:用PCR方法从人基因组DNA中分离NCT基因编码区上游大小约为1.8 kb的片段并以此为基础对启动子进行两端删除分析,分别扩增大小不等的片段,与pGL3-Enhancer荧光素酶报告基因载体质量组,通过瞬时转染Hela细胞,细胞裂解液进行双荧光素酶活性分析,分离NCT基因的启动子区。结果:NCT基因启动子的420 bp片段在Hela细胞中具有最强的启动活性,另237 bp片段为有活性的最小片段。结论:NCT启动子很可能位于翻译起始位点上游-432/-133处,其基础启动子位于-359/-90。; 杨眉蔡芳王瑞山潘乾龙志高邓小云夏昆夏家辉张灼华; 关键词：阿尔兹海默病 NICASTRIN 启动子

用酵母双杂交技术筛选与APC相互作用的蛋白及其cDNA克隆: 1999年; 钟向阳张灼华施小六夏昆禹宽平夏家辉; 关键词：酵母双杂交技术 CDNA克隆医学遗传学蛋白质相互作用腺瘤息肉病

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张灼华