张尚弟
- 作品数：24 被引量：68H指数：4
- 供职机构：兰州大学第二医院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金甘肃省科技重大专项计划甘肃省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 携带白细胞介素2和NK4双基因真核共表达质粒的构建及活性观察
- 2014年
- 目的 构建同时携带白细胞介素2（IL-2）和NK4基因的真核表达载体（pIRES-IL-2-IRES-NK4）,观察其在防治肿瘤中的潜在应用前景.方法 根据Pubmed上公布的IL-2及NK4 mRNA序列,设计扩增IL-2及NK4 cDNA的特异性引物,以PBV220-IL-2质粒和PCAGGS/hNK4质粒为模板,分别扩增IL-2及NK4基因,并将IL-2及NK4基因分别克隆在真核表达载体pIRES-SEQ的XhoI、MLuI位点和SalI、NotⅠ位点.获得同时携带IL-2和NK4基因的重组真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4.该重组质粒转染肝癌细胞HepG2后,检测目的基因的转染表达及表达产物对HepG2细胞增殖的影响.结果 通过对构建质粒克隆进行测序及酶切,证实携带IL-2和NK4双基因的真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4构建成功.用pIRES-IL-2-IRES-NK4转染HepG2细胞后24 h后在荧光显微镜下可观察到细胞有较强的绿色荧光表达,48 h时荧光更强;逆转录聚合酶链反应结果表明转染pIRES-IL-2-IRES-NK4质粒细胞的IL-2及NK4基因表达明显增强.酶联免疫吸附测定检测结果表明,转染组细胞较对照组细胞培养上清中IL-2及NK4蛋白表达水平明显增强.转染组48 h后的IL-2、NK4蛋白表达水平为2.139、1.956 mg/L,明显高于未转染组的0.492、0.620 mg/L.四甲基偶氮唑盐法结果表明转染真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4的细胞表达上清,有明显抑制肝癌细胞HepG2增殖的活性,且有剂量效应关系.结论 本研究成功构建了同时携带IL-2和NK4基因的重组真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4,该质粒可有效转染肝癌细胞,且转染细胞表达上清有明显抑制肝癌细胞HepG2增殖的活性,提示该重组质粒有潜在防治肿瘤的应用前景.
- 哈小琴张尚弟邓芝云董菊子赵勇彭俊华张媛媛林静王鲲
- 关键词：白细胞介素2NK4基因质粒载体活性INTERLEUKIN-2
- 实时荧光定量PCR检测宫腔脱落细胞中P27^(kip1)及cylin E基因的表达及意义
- 2015年
- 目的探讨宫腔脱落细胞中P27kip1、cyclin E基因的表达在子宫内膜癌早期诊断中的意义。方法收集健康志愿者及子宫内膜癌患者宫腔脱落细胞样本共80例;提取总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测目的基因的表达,比较健康志愿者及子宫内膜癌患者宫腔脱落细胞中P27kip1、cyclin E基因表达量的差异。结果荧光定量PCR结果显示,P27kip1基因在健康志愿者宫腔脱落细胞中的表达显著高于子宫内膜癌患者,差异有统计学意义(P<0.05),并随恶性程度升高,P27kip1的表达水平降低,两者比较差异有统计学意义(P<0.05);cyclin E基因的表达随恶性程度的增高而增高,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论联合检测P27kip1和cyclin E基因可作为子宫内膜癌早期诊断的依据。
- 李菊香潘云燕曹玲文惠方葛万文杨佩琦沈明辉张尚弟常运朝胡巍车团结
- 关键词：P27KIP1CYCLIN
- 兰州地区儿童过敏原特异性IgE定量检测分析及临床意义被引量：10
- 2018年
- 目的探讨兰州地区儿童过敏原特异性IgE定量检测分析及临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验对1 184例疑似过敏儿童进行食入及吸入过敏原血清总免疫球蛋白E(tIgE)和特异性免疫球蛋白E(sIgE)抗体检测,分析其在不同性别和年龄群患儿中的差别。结果在1 184例受试者中,96.62%呈现出tIgE阳性,而36.15%呈现出sIgE阳性。所有吸入性过敏原中,猫/狗毛皮屑检出率最高(12.5%),其次是霉菌(9.12%);食入性过敏原中牛奶检出率最高(6.76%),其次是蛋清(3.55%)。常见过敏原检出率的比较,差异有统计学意义(χ2=80.57,P<0.05)。不同年龄组患儿艾蒿/豚草花粉和牛奶的检出率差异有统计学意义(P<0.05);同时艾蒿/豚草花粉的检出率随年龄增长而升高,牛奶检出率随年龄增加而降低。过敏原阳性患儿中,1种过敏原阳性218例(50.93%),2~3种过敏原阳性178例(41.59%),4种及以上过敏原阳性32例(7.48%)。不同年龄组间比较,差异无统计学意义(χ2=0.222,P=0.895)。结论兰州地区吸入性过敏原以猫/狗毛皮屑为主,食入性过敏原以牛奶为主,血清过敏原IgE测定有利于了解患儿的过敏状态,有助于过敏性疾病的诊断。
- 赵有利潘云燕张尚弟张鑫吴雪肖春红刘欣跃
- 关键词：特异性免疫球蛋白E酶联免疫吸附试验儿童
- FEZF1-AS1在结肠癌中的功能与机制研究进展
- 2022年
- 结肠癌是世界上常见的恶性肿瘤,但是其发病机制仍然需要进一步研究。FEZF1-AS1在结肠癌等多种恶性肿瘤中高表达,且与结肠癌患者的临床病理特征及预后相关。此外,FEZF1-AS1通过多种分子机制促进结肠癌细胞的增殖、侵袭迁移,调节细胞周期,抑制凋亡等过程,表明FEZF1-AS1可能是一种新的重要的分子生物标志物和潜在的结肠癌治疗靶点。现就FEZF1-AS1在结肠癌中的功能与机制研究进展进行综述。
- 杨小萍马雪妮苏晓路吴志平张尚弟韩悌云张德奎
- 关键词：结肠肿瘤长链非编码RNA生物学标记物
- 肿瘤生物治疗的新技术——靶向基因治疗被引量：3
- 2014年
- 目前，恶性肿瘤已经成为影响人类健康和危及生命的主要疾病。传统的肿瘤治疗方法主要有手术、放疗和化疗，尽管能在短时间内取得较好的效果，但是肿瘤细胞自身的毒副作用和残留成分往往会导致肿瘤细胞的转移复发率增加，而且它对于机体自身的正常细胞尤其是造血系统和免疫系统也会造成严重的损害，因此对于已发生肿瘤转移的患者很难达到较好的远期疗效。 Rosenberg 等[1-2]已经于20世纪80年代建立了以生物治疗技术为基础的现代肿瘤理论。随着肿瘤分子机制的进一步发展，基于生物技术的治疗模式已成为当今肿瘤治疗的第4种治疗模式。作为当今发展最快的领域之一，肿瘤生物治疗主要包括基于分子靶向药物、基因、细胞因子和免疫学方法等的治疗[3-9]。由于肿瘤生物治疗具备特异性较高而毒副作用较低的优点，目前已广泛应用于临床工作中。但是治疗基因如何高效特异的向肿瘤组织传递以及如何向临床进行转化就成为目前肿瘤基因治疗迫切需要解决的重大问题，也是当前肿瘤治疗研究的热点。
- 哈小琴张尚弟杨志华张俊
- 关键词：肿瘤分子靶向治疗基因
- 携带IL-2和NK4双基因真核共表达载体的减毒沙门菌株的构建
- 2014年
- 目的构建携带IL-2/NK4双基因真核表达载体的减毒沙门菌菌株。方法利用分子克隆技术将IL-2及NK4基因分别插入PIRES-SEQ质粒IRES序列的上下游中,构建为双基因真核共表达载体pCMV-IL-2-IRES-NK4,将该质粒利用脂质体转染入细胞,采用ELISA及PCR法检测pCMV-IL-2-IRES-NK4转染细胞后IL-2/NK4基因及蛋白表达情况。将所构建质粒以电转化法转化减毒沙门菌菌株Ty21a,从而得到能够表达IL-2/NK4双基因的重组减毒沙门菌菌株。结果 ELISA及PCR法检测该质粒可在细胞中以较高的效率稳定表达IL-2及NK4基因和蛋白;同时表达IL-2/NK4双基因的减毒沙门菌菌株TPIN构建成功。结论本研究成功构建了携带IL-2/NK4双基因的减毒沙门菌菌株。
- 张尚弟哈小琴杨志华李兵邓芝云姜东红张俊王剑锋
- 含pCMV-IL-2-IRES-NK4质粒减毒沙门菌的制备及其稳定性研究
- 2014年
- 目的制备含pCMV-IL-2-IRES-NK4质粒减毒沙门菌TPIN并检测其稳定性。方法将pCMV-IL-2-IRES-NK4质粒转进减毒沙门菌Ty21a感受态,制备成重组的减毒沙门菌菌株TPIN;将TPIN在含有氨苄西林(+)和氨苄西林(-)的LB培养板传代培养至第10代、20代、30代和40代时用灭菌的牙签分别挑取含有氨苄西林(+)和氨苄西林(-)LB培养基上的单克隆菌落,质粒提取、PCR扩增酶切鉴定;TPIN转染HepG2细胞后采用RT-PCR检测IL-2和NK4基因表达,ELISA法检测细胞培养上清IL-2和NK4蛋白。结果构建菌株经提取质粒、酶切、PCR扩增获得目的基因IL-2、NK4特异条带;在氨苄西林(+)和氨苄西林(-)LB培养板传代培养40代的TPIN菌株均可扩增并双酶切出目的基因IL-2及NK4;TPIN体外转染HepG2细胞后,IL-2及NK4表达水平均显著升高。结论重组携带IL-2/NK4双基因的减毒沙门菌菌株TPIN可稳定遗传,不受无选择性压力的影响而丢失质粒,且在体外IL-2、NK4基因及蛋白可以稳定高效表达。
- 杨志华哈小琴张尚弟冯强生薛荣利杨淑娟赵勇杨迎桂
- 关键词：NK4
- TPIN对HepG2肝癌细胞生物学特性的影响
- 2014年
- 目的研究重组减毒沙门菌菌株TPIN对HepG2细胞生物学性能的影响。方法 TPIN转染HepG2细胞36 h时收集细胞表达上清,MTT法检测表达产物对HepG2细胞生长的作用;Transwell迁移实验观察TPIN表达产物对HepG2细胞迁移的影响;将不同剂量表达产物分别加入甲基纤维素小碟,并将小碟小心放入鸡胚绒毛尿囊膜,37.8℃继续孵化3 d,观察IL-2/NK4表达产物体外对鸡胚绒膜尿囊膜血管的效应。结果 TPIN表达上清显著抑制HepG2细胞增殖的活性,且有一定剂量依赖效应;表达产物可明显抑制肿瘤细胞迁移,且明显抑制鸡胚绒膜尿囊膜血管形成。结论 TPIN在体外能高效转染肿瘤细胞,表达目的蛋白IL-2及NK4,且表达产物能够抑制HepG2细胞的增殖和迁移,对鸡胚绒膜尿囊膜血管的形成有抑制效应。
- 樊红艳哈小琴张尚弟杨志华宋月娟李晓云刘延彤徐越斌林静
- 关键词：白细胞介素血管抑制素类
- 口服重组减毒沙门菌TPIN抗小鼠黑色素瘤研究被引量：1
- 2014年
- 目的观察重组沙门菌TPIN对小鼠黑色素瘤治疗的作用。方法应用小鼠黑色素瘤B16细胞给16只C57纯系小鼠建立荷黑色素瘤动物模型;将模型组随机分为对照组(PBS组)及治疗组(TPIN),每组各8只。治疗组应用重组减毒沙门菌TPIN菌灌胃,对照组PBS缓冲溶液灌胃,每周1次共4次,在此期间记录瘤体体积。最后1次灌胃1周后,荷瘤小鼠心脏采血后处死,检测CD3+/CD4+、CD3+/CD8+的T淋巴细胞表型的变化,瘤组织γ-干扰素(IFN-γ)含量及各组织脏器CMV的表达水平。结果成功构建了荷瘤小鼠模型,与治疗组比较,对照组肿瘤体积差异有显著性(P<0.01);治疗组血CD3、CD3+/CD8+、肿瘤组织中IFN-γ表达量显著高于对照组(P<0.05,P<0.01),治疗组小鼠的肠、肾、肝、脾、胃、肿瘤组织中均可扩增出与CMV瘤体大小相符的片段而对照组未扩增出相应片段。结论口服DNA疫苗TPIN免疫荷黑色素瘤小鼠可激起小鼠体内有效的免疫反应并能有效抑制瘤体的生长。
- 哈小琴张尚弟杨志华孙琳郭馨云彭俊华董菊子张媛媛
- 关键词：白细胞介素小鼠
- 一种治疗实体瘤的重组减毒沙门氏菌疫苗、药物组合物及其应用
- 本发明名称为“一种治疗实体瘤的重组减毒沙门氏菌疫苗、药物组合物及其应用”。本发明涉及细胞因子预防和靶向治疗实体肿瘤的应用，白细胞介素2联合肝细胞生长因子拮抗剂基因在制备用于预防和靶向治疗实体瘤的药物中的用途。本发明还涉及...
- 哈小琴张尚弟尹强张俊惠玲王美亮张红宾贾庆华王晓辉昌业伟
- 文献传递
