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猪细小病毒四川株的分离鉴定及其一步生长曲线: 2013年; 为了研究猪细小病毒(PPV)的增殖规律,利用PK-15细胞从流产胎儿的肝、肠系膜淋巴结和肾样品中分离到1株病毒,经PCR检测、蚀斑纯化、病毒理化试验、微量中和试验和血凝试验证实该分离株为猪细小病毒,命名为SC-L。针对PPV的VP1和NS1基因设计特异性引物,建立PPV的荧光定量PCR方法。以SC-L分离株感染PK-15细胞,感染后每隔4h分别收集感染细胞与上清液,利用荧光定量PCR方法对不同样品中的病毒DNA进行定量分析,绘制PPV SC-L的一步生长曲线。PPV SC-L株感染PK-15细胞,细胞外病毒含量在第4～20小时缓慢增加,20h后呈对数增长,第56小时达到最大值,随后病毒含量迅速下降,在第68小时时趋于稳定;在细胞内感染4h检测到微量的病毒粒子,第4～24小时细胞内病毒缓慢增长,24h细胞内病毒粒子呈对数增长,第44小时达到最大量,随后胞内病毒粒子逐渐降低。表明PPV在细胞内增殖到一定数量后逐步释放到细胞外,且细胞外病毒最大量高于细胞内。; 江一帆吴云飞朱玲徐志文阳爱国廖珊陈蕾黄仆郭万柱; 关键词：猪细小病毒实时荧光定量PCR

乙型脑炎病毒NS3蛋白对其体外复制能力的影响被引量：4: 2013年; 为研究乙型脑炎病毒(JEV)NS3蛋白对其体外增殖能力的影响,为JEV疫苗的大量生产提供一定的理论基础,构建真核重组质粒pCI-neo-NS3并转染至BHK-21细胞内,接种JEV后于不同时间点采集细胞内以及细胞外病毒,采用荧光定量RT-PCR法检测各时间点细胞内和细胞外病毒含量,同时设立不同质量浓度NS3原核表达蛋白对JEV复制影响对照组。用SPSS 21.0统计分析软件分析,比较病毒增殖情况。分析结果显示转染含NS3基因的真核载体组细胞内和上清中病毒含量都极显著高于对照组(P<0.01),加入NS3原核表达蛋白组上清中病毒含量极显著低于对照组(P<0.01)。; 廖珊刘骁朱玲徐志文郭万柱; 关键词：乙型脑炎病毒 NS3蛋白荧光定量

猪巨细胞病毒gB基因优势抗原表位区的原核表达及间接ELISA方法的建立被引量：1: 2013年; 扩增了猪巨细胞病毒(PCMV)gB基因的优势抗原表位区,将构建成功的gB基因优势抗原表位区原核表达重组质粒(pET32a-gB)转化入表达菌Rosetta(DE3)中进行表达,以表达的重组蛋白作为包被抗原建立了一种检测PCMV抗体的间接ELISA方法,并对该间接ELISA检测方法进行了优化。结果显示,最佳抗原包被浓度为1.9μg/mL,最佳血清稀释度为1∶160,二抗最佳稀释度为1∶10 000;当样品D450nm≥0.26时判为阳性,当样品D450nm<0.215时判为阴性,介于两者之间时判为可疑。用该间接ELISA方法对138份PCMV阴性血清与240份PCMV阳性血清进行检测的结果显示,它的特异性为97.83%,敏感性为97.9%,变异系数均小于10%。用该ELISA方法和Western-blot对184份临床样品进行检测,结果二者的符合率为92.4%。结果表明,该间接ELISA方法简便快捷,具有良好的特异性、敏感性及重复性,适用于对PCMV抗体的大规模检测。; 刘骁廖珊朱玲周远成周璐; 关键词：原核表达间接ELISA

猪乙型脑炎病毒SC-YA株部分生物学性状的研究被引量：1: 2013年; 为猪乙型脑炎疫苗的生产和保存提供指导和依据,本试验对乙型脑炎病毒(JEV)SC-YA株的理化特性、细胞培养特性进行了研究。理化鉴定结果表明,JEV SC-YA株是具有囊膜的RNA病毒;胰蛋白酶、酸性、高温等均可使其失去活性。该株病毒的最佳培养条件为培养液用量为6mL,接种剂量为10-4TCID50/0.1mL时,接种后第48小时病毒滴度达到最大值。结果表明,JEV SC-YA株能被用于疫苗生产。; 廖珊刘骁朱玲郭万柱; 关键词：乙型脑炎病毒理化性质

猪乙型脑炎病毒NS3蛋白对其增殖作用的研究: 论文以猪乙型脑炎病病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）四川雅安分离株YA株作为材料做了如下研究：NS3基因的分子克隆、原核表达、多克隆抗体制备以及研究重组NS3蛋白对乙型脑炎病毒增殖影...; 廖珊; 关键词：NS3蛋白抗体制备; 文献传递

一种猪细环病毒Ⅱ型抗体间接阻断ELISA检测试剂盒: 本发明公开了一种猪细环病毒抗体间接阻断ELISA检测试剂盒。包括抗体检测板，酶结合物工作液，样品稀释液，显色液A，显色液B，终止液；阻断抗体，洗涤缓冲液；所述的阻断抗体为使用纯化后的TTV2-ORF1基因抗原表位区蛋白免...; 徐志文朱玲李凇刘骁郭万柱廖珊; 文献传递

一种猪细环病毒Ⅱ型抗体间接阻断ELISA检测试剂盒: 本发明公开了一种猪细环病毒抗体间接阻断ELISA检测试剂盒。包括抗体检测板，酶结合物工作液，样品稀释液，显色液A，显色液B，终止液；阻断抗体，洗涤缓冲液；所述的阻断抗体为使用纯化后的TTV2-ORF1基因抗原表位区蛋白免...; 徐志文朱玲李凇刘骁郭万柱廖珊; 文献传递

猪巨细胞病毒gB优势抗原表位区的原核表达及其多克隆抗体的制备: 2013年; 为制备猪巨细胞病毒(PCMV)gB优势抗原表位区重组蛋白的多克隆抗体,进一步分析PCMV gB蛋白的生物学特性,建立PCMV抗体血清学检测方法。对PCMV gB基因优势抗原表位区进行了PCR扩增,将回收的目的片段连接入pET32a(+)表达载体,转化入E.coli Rosetta(DE3),构建了重组表达菌E.coli Rosetta-pET32a(+)-gB,经IPTG诱导表达了gB优势抗原表位区重组蛋白。对重组蛋白进行纯化后,通过Western-blot试验验证了重组蛋白的反应原性,并免疫家兔制备了多克隆抗体。结果表明,该重组蛋白大量可溶性表达,且具有良好的反应原性。琼脂扩散试验及Western-blot检测表明,多克隆抗体效价达到1∶8,且能与gB优势抗原表位区重组蛋白特异性结合。证实,成功制备了PCMV gB优势抗原表位区重组蛋白多克隆抗体。; 江一帆刘骁廖珊朱玲周远成; 关键词：多克隆抗体

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廖珊