姚君 作品数:30 被引量:105 H指数:7 供职机构: 暨南大学第二临床医学院 更多>> 发文基金: 广东省自然科学基金 深圳市科技计划项目 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
门静脉海绵样变性大鼠模型制作方法的探讨及体会 被引量:7 2010年 目的通过门静脉部分缩窄法建立大鼠门静脉海绵样变性(CTPV)动物模型,探索适宜的制模条件并为下一步研究其临床诊断和治疗方法提供可靠、稳定的模型动物。方法采用Sprague-Dawley(SD)大鼠80只,根据使用的不同直径的钝头针均分为4组:假手术组、19G组、21G组和23G组,除假手术组外,其余3组分别用19G、21G和23G直径的钝头针行大鼠门静脉部分缩窄术以建立CTPV动物模型。术后6周,同时采用门静脉测压、门静脉造影、门静脉及其周围组织病理学检查评估门静脉高压及海绵样变形成情况。结果假手术组无大鼠死亡,19G组、21G组和23G组在制模术后48 h内死亡的大鼠分别为2、4和16只。假手术组和19G组大鼠制模术后6周未形成门静脉高压;门静脉造影显示门静脉通畅,无曲张与扩张;病理学检查显示门静脉管腔无增大、内皮细胞光滑、中膜平滑肌层无增厚、外膜完整。21G组和23G组制模术后6周门静脉压力均升高,CTPV形成;门静脉造影显示门静脉周围侧支循环形成;病理检查显示多个管腔大小不一、外形不规则血管腔,管腔之间为较狭窄的纤维性间隔,其内可见脂肪细胞、散在的淋巴细胞及肥大细胞,门静脉管腔增大、血管内膜受损、内皮细胞脱落、中膜平滑肌增厚和血栓形成。结论门静脉部分缩窄法可以复制出类似CTPV的大鼠模型。21G钝头针更适宜CTPV大鼠模型的制作,该模型动物死亡率低,且成模率较高,比较稳定。 王建尧 刘磊 王斌 陈芳 毛建雄 姚君 曹娟关键词:门静脉海绵样变性 SPRAGUE-DAWLEY大鼠 动物模型 抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对脓毒症小鼠肠粘膜核因子-κB和细胞因子表达的影响 2011年 目的观察抗小鼠Toll样受体2胞外段(mTLR2ECD)单表位抗体TSP-2对脓毒症小鼠肠粘膜核因子-κB(NF-κB)和细胞因子表达的影响。方法将雄性BALB/c小鼠随机分成4组:假手术组、模型组、TSP-2治疗组和正常兔IgG治疗组。采用盲肠结扎穿孔术制作脓毒症小鼠模型,分别于术后6、12和24 h取回肠组织,HE染色,免疫组织化学方法检测小鼠肠粘膜组织NF-κB的表达,实时荧光定量RT-PCR法检测TNF-α和IL-6 mRNA的表达,ELISA法检测小鼠肠粘膜TNF-α和IL-6蛋白表达水平。结果模型组NF-κB表达水平较假手术组显著上升;TSP-2治疗组NF-κB表达水平较模型组显著下调;模型组各时间点TNF-α和IL-6水平均高于假手术组(P<0.05);TSP-2治疗组与模型组相比,TNF-α和IL-6水平明显降低(P<0.05),TNF-α和IL-6 mRNA水平也低于模型组(P<0.05)。正常兔IgG治疗组与模型组比较,结果无统计学意义(P>0.05)。结论抗体TSP-2能抑制脓毒症小鼠肠道NF-κB的活化,并下调致炎细胞因子TNF-α和IL-6水平,对脓毒血症引起的肠道炎症起到一定的控制作用,并延缓脓毒血症的病情发展。 黄恩平 姚君 杨翠兰 罗深秋关键词:脓毒症 TOLL样受体2 TSP-2 核因子-ΚB 细胞因子 表达IL-24蛋白的重组双歧杆菌抑制结肠癌NF-κB信号通路的研究 2016年 目的目前结肠癌的治疗仍无突破性进展。本研究观察表达IL-24蛋白的重组双歧杆菌对大肠癌细胞NF-κB P65信号通路的抑制作用。方法采用分子克隆技术,先改建好在双歧杆菌高效表达的分泌型原核表达载体pBBADs,然后将人IL-24基因克隆到表达载体上,采用电穿孔法转化长双歧杆菌,获得携带IL-24基因的的重组双歧杆菌(BL-IL-24)。对BL-IL-24进行RT-PCR法行IL-24基因鉴定。结果 BL-IL-24的IL-24基因鉴定为621kb。鉴定最佳诱导表达时间为24h,BL-IL-24蛋白表达为21kb。BL-IL-24组和BL0组分别与PBS组,NF-κB p65、IL-6表达水平明显降低(P<0.05)。BL-IL-24与BL0组对比,NF-κB P65及IL-6表达水平降低(P<0.05)。结论 BL-IL-24的重组双歧杆菌结合了双歧杆菌及IL-24的双重治疗优势,通过抑制大肠癌细胞NF-κB P65及IL-6表达水平,从而,大肠癌有明显的治疗作用,为大肠癌的治疗提供新的治疗方法。 姚君 王建尧 王立生 宋洋 李迎雪关键词:双歧杆菌 基因鉴定 肠癌细胞 结肠癌 IL-24 蛋白 白藜芦醇对溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜细胞因子表达的影响 被引量:16 2010年 目的探讨白藜芦醇(Resveratro)l对溃疡性结肠炎(UC)治疗的可能机制。方法采用葡聚糖硫酸钠(Dextran sulfate Sodium,DSS)制作UC小鼠模型,小鼠随机分4成组:正常对照(NC)组、模型(MD)组、低剂量(RLD)、高剂量(RHD)白藜芦醇治疗组。造模7d同时给予干预治疗,停用造模药物并后续治疗7d。记录分析疾病活动指数(DAI),14d后处死小鼠,取结肠行HE染色;利用实时荧光定量RT-PCR法检测IL-10、TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA的表达,ELISA法测小鼠肠黏膜IL-10、TNF-α、IL-6和IL-1β蛋白水平。结果低、高剂量白藜芦醇治疗组小鼠第5~14天DAI明显低于模型组(P<0.05);模型组IL-10表达明显低于正常组(P<0.05),其TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA和蛋白表达则高于正常组(P<0.05);低、高剂量白藜芦醇治疗组结肠IL-10mR-NA表达和蛋白水平明显高于模型组(P<0.05),其TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA和蛋白水平则低于模型组(P<0.05);高剂量白藜芦醇治疗组IL-10mRNA表达和蛋白水平明显高于低剂量组(P<0.05),其TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA和蛋白水平则低于低剂量组(P<0.05)。结论白藜芦醇可以提高抗炎细胞因子IL-10的水平并降低致炎细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β的水平,通过抗炎和降低肠道过度的免疫反应,对UC发挥治疗作用。 姚君 王立生 王建尧 李迎雪 荀安营 魏晓霞 冯聚玲关键词:白藜芦醇 IL-10 IL-1Β 双歧杆菌对溃疡性结肠炎小鼠外周血和肠系膜淋巴结CD4^+ CD25^+ Foxp3^+调节T细胞表达的影响 被引量:9 2011年 目的探讨双歧杆菌治疗溃疡性结肠炎与CD4+ CD25+ Foxp3+调节T细胞的相关可能机制。方法采用DSS制作UC小鼠结肠炎模型,随机分成3组:正常对照(NC)组,模型(MD)组,双歧杆菌治疗(BbT)组。造模7 d后,给予双歧杆菌后续治疗7 d。评估小鼠疾病活动指数(DAI),结肠行HE染色及病理学评分(HDS);流式细胞仪检测外周血和肠系膜淋巴细胞中表达CD4+ CD25+ Foxp3+的Treg细胞的百分比率。结果 BbT组的DAI明显低于模型组(P<0.05);MD组HDS明显高于正常组(P<0.05);BbT组的HDS明显低于模型组(P<0.05);模型组外周血和肠系膜淋巴细胞CD4+ CD25+ Foxp3+Treg细胞占CD4+T细胞的百分率明显低于正常组(P<0.05);BbT组结肠外周血和肠系膜淋巴细胞CD4+ CD25+ Foxp3+Treg细胞占CD4+T细胞的百分率明显高于模型组(P<0.05)。结论双歧杆菌可以提高CD4+ CD25+ Foxp3+Treg数量,调节机体和肠道免疫功能,对UC发挥了一定的治疗作用。 姚君 王立生 师瑞月 王建尧 李迎雪 张茹 莫镜关键词:溃疡性结肠炎 双歧杆菌 CD25+ 双向凝胶电泳在先天性肛门直肠畸形中的初步应用 2013年 目的:寻找先天性肛门直肠畸形患儿直肠末端组织中异常表达的蛋白质。方法:通过二维凝胶电泳分离先天性肛门直肠畸形患儿直肠末端组织及正常新生儿直肠末端组织,用Image Master2D Platium 6.0软件比较电泳图谱中的异常蛋白质点。结果:筛选出19个表达差异的蛋白质点,其中有12个蛋白质点表达上调,7个蛋白质点表达下调,差异具有统计学意义。结论:先天性肛门直肠畸形可以导致血清中多种蛋白的异常表达。这些差异表达的蛋白可以为先天性肛门直肠畸形的进一步研究提供了依据。 王建尧 刘磊 姚君 叶明 王斌 叶晓硕 冯奇 宋雪倩 邹沙芹 朱思聪关键词:新生儿 先天性肛门直肠畸形 蛋白组学 二维凝胶电泳 阿魏酸钠对溃疡性结肠炎小鼠肠道NF-kB表达和活性的影响 被引量:3 2015年 目的:探讨阿魏酸钠(sodium ferulate, SF)对溃疡性结肠炎治疗的可能相关机制。方法:小鼠随机分4成组空白对照(NC)组、模型(MD)组、低剂量(SFLD)、高剂量(SFHD)阿魏酸钠治疗组,NC组采用正常饮用水饲养,采用5%葡聚糖硫酸钠(Dextran sulfate Sodium, DSS)制作UC小鼠模型,造模7 d成模后分为MD组、SFLD组和SFHD组,予药物干预治疗后续7 d。记录分析疾病活动指数(DAI)及脾脏指数(Spleen Index SI),取结肠组织行HE染色;Western blot检测结肠NF-KB表达水平;ELISA法测小鼠肠粘膜NF-kB活性。结果:SFLD组、SFHD组小鼠第8~14 d DAI明显低于MD组(P<0.05);SFLD组、SFHD组小鼠第14 d SI明显低于MD组(P<0.05);MD组SI明显高于NC组(P<0.05);SFLD组、SFHD组结肠NF-kB表达和活性明显低于MD组;MD组结肠NF-kB表达和活性明显高于NC组(P<0.05);MD组NF-kB表达和活性明显高于NC组(P<0.05)。结论:阿魏酸钠可以通过降低结肠NF-kB表达及活性;抑制脾脏代偿性增大,从而减轻肠道的炎症反应及抑制脾脏的免疫反应,改善UC全身炎症状态及免疫应答,对UC发挥治疗作用。 姚君 王建尧 王建尧 王立生 李迎雪 张茹关键词:溃疡性结肠炎 阿魏酸钠 NF-KB TSP-2对小鼠溃疡性结肠炎NF-κB DNA结合活性和表达的影响 被引量:5 2013年 目的研究抗小鼠Toll样受体2(Toll-like receptor 2)胞外段(mTLR2ECD)单表位抗体TSP-2对溃疡性结肠炎小鼠肠粘膜核因子NF-κB DNA结合活性和表达的影响。方法将实验小鼠随机分为4组:正常对照组、模型组、TSP-2治疗组和兔IgG组,其中模型组、TSP-2治疗组和兔IgG组均给予5%葡聚糖硫酸钠7 d以制备溃疡性结肠炎小鼠模型,停用造模药后TSP-2治疗组和兔IgG组给予后续干预治疗7 d。计算溃疡性结肠炎疾病活动指数(DAI),14 d后处死小鼠,取结肠行HE染色;利用ELISA法测小鼠肠粘膜NF-κB P65 DNA结合活性;用Western blot法测定NF-κB p65蛋白水平,并进行统计学分析。结果模型组NF-κBp65 DNA结合活性明显高于对照组(P〈0.05);模型组NF-κB P65蛋白表达明显高于NC组(P〈0.05);TSP-2治疗组小鼠第10~14天DAI明显低于模型组(P〈0.05);TSP-2治疗组NF-κB p65 DNA结合活性明显低于MD组(P〈0.05);TSP-2治疗组NF-κBp65蛋白表达水平显著低于模型组(P〈0.05);兔IgG组与模型组比较,实验结果无统计学意义(P〉0.05)。结论 TSP-2可以明显抑制NF-κB表达和活性,通过调节肠道过度的免疫反应和抗炎作用,在溃疡性结肠炎治疗中发挥作用。 赖明广 王立生 姚君 魏铖关键词:溃疡性结肠炎 TSP-2 NF-ΚB 携带IL-10基因的双歧杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠血浆及结肠组织NO和VEGF-A表达影响 被引量:6 2016年 目的观察携带IL-10基因的双歧杆菌对溃疡性结肠炎(UC)小鼠血浆及结肠组织一氧化氮(NO)与血管内皮生长因子A(VEGF-A)表达的影响,进一步探讨携带IL-10基因的双歧杆菌治疗UC的相关机制。方法筛选出能稳定表达具有生物活性hIL-10蛋白的BL-hIL-10菌株。用5%DSS诱导UC小鼠模型,50只小鼠分为正常对照组、UC模型组、BL治疗组、BL0治疗组和BL-hIL-10治疗组,每组10只。计算小鼠DAI、HE染色评估结肠组织病理学变化;ELISA法测小鼠血浆及结肠组织IL-13、VEGF-A和NO的含量。结果 (1)BL-hIL-10可以降低UC小鼠DAI,减轻UC小鼠结肠组织炎症程度。(2)BL-hIL-10能降低UC小鼠血浆和结肠组织NO、VEGF-A和IL-13水平。结论口服BL-hIL-10对UC小鼠的治疗作用可能与抑制NO产生及下调VEGF-A表达有关。 黄云辉 张定国 杨根华 姚君 李迎雪关键词:溃疡性结肠炎 双歧杆菌 白介素13 重组人白介素10对低氧条件下人单核细胞凋亡变化规律的影响 被引量:6 2011年 目的研究低氧条件下,重组人白介素10(rhIL-10)对人单核细胞白细胞(THP-1)凋亡和caspase-3活性变化规律的影响。方法悬浮培养THP-1细胞株,分为正常对照组(常规培养);低氧(5%O2,5%CO2,90%N2)培养THP-1,rhIL-10以10、50、100 ng/mL的浓度干预,分为低氧对照组,rhIL-10低、中、高剂量干预组;培养12、24、48、72 h,离心收集细胞,化学比色法检测细胞核内caspase-3活性,48 h核荧光染色荧光显微镜观察,分析荧光强度,行统计学分析。结果凋亡蛋白caspse-3相对活性,12 h各组差异无统计学意义(P>0.05);24 h低氧对照组及低、中剂量rhIL-10干预组与正常对照组比较升高(P<0.05),高剂量rhIL-10干预组与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),rhIL-10干预各组与低氧对照组比较降低(P<0.05);48 h低氧对照组和rhIL-10干预低、中、高剂量组与正常对照组比较升高(P<0.05),低、中、高剂量rhIL-10干预组与低氧对照组比较明显降低(P<0.05);72 h低氧对照组、低剂量rhIL-10干预组与正常组比较升高(P<0.05),其余各组差异无统计学意义(P>0.05);缺氧凋亡峰值见于48 h。取48 h行各组凋亡细胞核Hoechst荧光染色,灰度值分析低氧对照组和低、中、高剂量rhIL-10干预组与正常对照组比较升高(P<0.05);低、中、高剂量rhIL-10干预组与低氧对照组比较降低(P<0.05)。结论缺氧可促进单核细胞凋亡,rhIL-10可一定程度地抑制人单核细胞凋亡,这些变化可能与各器官急性缺氧性疾病有密切相关性。 姚君 王立生 王建尧 李迎雪 朱惠明 师瑞月 张茹 莫镜 张利国关键词:低氧 凋亡 人单核细胞 CASPASE-3