夏高晓
- 作品数：10 被引量：6H指数：1
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金长江学者和创新团队发展计划广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 植烷酸氧化酶真核表达载体的构建及其细胞内定位
- 2010年
- 目的构建小鼠植烷酸氧化酶(Phyh)真核表达载体,并观察其在NIH3T3细胞中的表达定位情况。方法提取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过RT-PCR扩增得到Phyh编码序列,将其克隆到真核表达载体pcDNA3上;对阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定,利用脂质体转染方法转染NIH3T3细胞;使用细胞免疫化学技术对重组质粒pcDNA3/HA-Phyh在NIH3T3细胞中的表达及蛋白定位进行分析。结果 PCR、双酶切和测序鉴定表明,pcDNA3/HA-Phyh真核表达质粒构建正确;转染实验发现,该质粒能够在NIH3T3细胞中表达,表达产物主要定位在细胞质中。结论成功构建了带HA标签的小鼠Phyh真核表达载体,该载体能够在哺乳动物细胞NIH3T3中表达,为进一步研究Phyh的细胞内生物学功能提供了一个重要的工具。
- 孙明晶胡水旺夏高晓姜勇
- 关键词：蛋白定位
- 小鼠肝脏细胞质膜蛋白质组的提取和二维液相色谱分离
- 2008年
- 目的提取小鼠肝脏细胞质膜蛋白并建立一种利用二维液相色谱法分离细胞质膜蛋白质组的方法。方法采用差速离心结合蔗糖密度梯度离心分离和富集分小鼠肝脏细胞质膜蛋白,样品经脱盐及用起始缓冲液置换后,进行一维色谱聚焦分离,然后收集pH8.5～4.0之间的组分进行二维反相高效液相色谱分离,最后将获得的二维UV图通过ProteoVue软件转换成UV/pI图谱。结果成功提取了肝脏细胞质膜蛋白,并通过二维液相色谱成功建立了小鼠肝脏细胞质膜蛋白的二维UV/pI图谱,收集了一维色谱聚焦分离的pH8.5～4.0区间的16个组分,并将每个组分分进行二维色谱分离后转换为UV/pI图谱。结论为进一步全面研究小鼠肝脏细胞质膜蛋白功能和疾病差异蛋白质组研究打下了基础。
- 李红梅陈丽夏高晓赵明哲胡水旺姜勇
- 关键词：二维液相色谱蛋白质组肝脏
- 小鼠肝细胞核磷酸化蛋白质组的提取和双向电泳分离
- 2009年
- 目的提取小鼠肝细胞核磷酸化蛋白并利用双向凝胶电泳分离小鼠肝细胞核磷酸化蛋白。方法提取小鼠肝细胞核蛋白并利用金属磷酸盐亲和层析树脂纯化出磷酸化蛋白后,进行一维等电聚焦分离和二维聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,并挑选其中一个蛋白斑点进行质谱分析。结果成功提取了肝细胞核磷酸化蛋白,通过双向凝胶电泳分离技术成功建立了小鼠肝细胞核磷酸化蛋白质组图谱。质谱鉴定结果证实被挑选蛋白斑点是小鼠核磷酸化蛋白。结论磷酸化蛋白纯化技术结合二维凝胶电泳分离技术是研究肝细胞核磷酸化蛋白质组的有效方法,为进一步全面研究和鉴定小鼠肝细胞核磷酸化蛋白的功能打下了基础。
- 夏高晓李红梅陈丽赵明哲胡水旺王继刚孙明晶邓鹏刘靖华姜勇
- 关键词：磷酸化蛋白质组双向凝胶电泳肝脏质谱
- 内毒素休克小鼠肝脏细胞质膜差异蛋白质组的二维液相色谱分析被引量：1
- 2008年
- 目的:建立和优化肝脏细胞质膜蛋白质研究的方法系统,并对正常组小鼠和内毒素休克小鼠组肝脏细胞质膜蛋白质进行二维液相色谱分离,分析两者之间的差异表达谱.方法:BALB/c小鼠20只随机分为正常组和内毒素休克小鼠组(10只,LPS刺激3h,LPS剂量为35mg/kg),n=10.采用差速离心结合蔗糖密度梯度离心法分离和富集两组肝脏细胞质膜蛋白,分别将两组样品按蛋白质PI进行一维的色谱聚焦分离,然后每个PI组分再按蛋白质的疏水性经二维HPLC分离,利用ProteoVue软件将UV光吸收图谱转换成PI对疏水性的胶样图谱,再利用DeltaVue软件分析两组肝脏质膜蛋白质组的表达差异.结果:图像分析显示两组比值在≥2.0及≤0.5的差异蛋白点共有24个,与正常组比较,在内毒素休克小鼠的肝脏质膜蛋白中有16个蛋白点表达上调,8个蛋白点表达下调.结论:正常组和内毒素休克小鼠组的肝脏质膜蛋白质组有明显差异.
- 李红梅陈丽夏高晓赵明哲胡水旺姜勇
- 关键词：内毒素休克
- 转甲状腺素蛋白真核表达载体的构建及其细胞内定位被引量：3
- 2009年
- 目的构建转甲状腺素蛋白(TTR)的真核表达载体,观察其在NIH3T3细胞中的表达及定位。方法提取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过RT-PCR扩增得到TTR编码序列,将该编码序列克隆到带有血凝素(HA)标记的载体pcDNA3-HA上,构建质粒pcDNA3-TTR-HA。重组质粒通过PCR、酶切测序等证明构建正确后经脂质体转染NIH3T3细胞,固定并染色后通过荧光显微镜观察该融合蛋白的表达及定位。结果重组质粒经鉴定证明构建正确。转染实验发现,该质粒能够在NIH3T3细胞中表达,表达产物主要分布在细胞质中。结论成功构建带HA标签的TTR真核表达载体,该载体能在哺乳动物细胞中有效表达并正确定位,为深入研究TTR在细胞内的相关生物学功能奠定了基础。
- 胡水旺孙明晶夏高晓陈丽赵明哲姜勇
- 关键词：前白蛋白基因表达
- 半定量RT—PCR检测内毒素休克小鼠肝脏组织S100A9的表达被引量：1
- 2009年
- 目的：分析S100A9基因在内毒素休克小鼠肝脏组织中的表达情况。方法：20只SPF级BALB／c小鼠随机分为正常组（10只）和内毒素休克组（10只，LPS刺激3小时，LPS剂量为35mg／k）；采用RT—PCR方法检测两组肝脏组织中S100A9mRNA的表达水平。结果：S100A9mRNA在内毒素休克小鼠肝脏中表达增强，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：S100A9基因表达上调在内毒素休克的发生发展中可能起重要作用。
- 李红梅陈丽夏高晓
- 关键词：S100A9内毒素休克
- 绿色荧光标记C-反应蛋白的原核表达和毛细管电泳检测被引量：1
- 2008年
- 目的:表达纯化重组的His-EGFP-CRP蛋白,通过毛细管电泳技术对该重组蛋白的生物活性进行评价。方法:用pET14b/EGFP-hCRP原核表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达的重组蛋白通过亲和色谱纯化、梯度透析,获得复性的His-EGFP-CRP蛋白;并用高效毛细管电泳(HPCE)技术对复性的蛋白进行检测,了解蛋白质的等电点及活性。结果:转化实验发现,该质粒pET14b/EGFP-hCRP在BL21(DE3)中能够被诱导表达;通过包涵体变性溶解、亲和色谱纯化可获得纯度较高的His-EGFP-CRP蛋白;HPCE分离发现复性后的His-EGFP-CRP蛋白峰为多个,其在电泳液pH值低于6时易检出,His-EGFP-CRP与THP-1细胞裂解物孵育后的检测峰增多。结论:成功地在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达重组蛋白His-EGFP-CRP,通过包涵体变性溶解及亲和色谱纯化获得该重组蛋白,复性后的His-EGFP-CRP等电点接近于6,以单体或多聚体等结构形式存在,具有结合活性,能与细胞内相关分子结合成复合物,可应用于CRP功能和内化机制的研究。
- 陈腾祥夏高晓陈丽刘亚伟刘靖华姜勇
- 关键词：C反应蛋白基因表达蛋白质复性
- 小鼠肝细胞线粒体磷酸化蛋白质组的初步研究
- 2009年
- 目的提取小鼠肝细胞线粒体磷酸化蛋白并利用双向凝胶电泳技术对其进行分离。方法提取小鼠肝细胞线粒体蛋白并利用金属磷酸盐亲和层析树脂富集磷酸化蛋白后,进行一维等电聚焦分离和二维聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,质谱鉴定感兴趣的蛋白点。结果成功提取了小鼠肝细胞线粒体磷酸化蛋白,并通过双向凝胶电泳分离技术成功建立了小鼠肝细胞线粒体磷酸化蛋白质组图谱。结论磷酸化蛋白纯化技术与二维凝胶电泳分离技术的结合是研究亚细胞器磷酸化蛋白质组的有效方法,为进一步全面鉴定和研究线粒体磷酸化蛋白的功能打下了基础。
- 陈丽李红梅夏高晓赵明哲胡水旺王继刚徐佳刘靖华邓鹏姜勇
- 关键词：磷酸化蛋白质组
- 内毒素休克早期小鼠肝脏细胞核差异磷酸化蛋白质组的鉴定
- 脓毒症（sepsis）是感染引起的全身炎症反应征候群,其严重并发症——感染性休克（septic shock）是创伤、烧伤和手术后病人最主要的死亡原因之一。统计表明,临床半数的脓毒症是由于革兰氏阴性菌（Gram-negat...
- 夏高晓
- 关键词：磷酸化蛋白质组细胞核内毒素休克
- 文献传递
- 小鼠固醇载体蛋白2原核表达载体的构建与表达纯化
- 2010年
- 目的构建小鼠固醇载体蛋白2(SCP-2)融合蛋白表达载体,并在原核细胞内表达及纯化获得具有活性的融合蛋白,为进一步研究SCP-2的生物学功能提供基础。方法提取BALB/c小鼠肝脏组织总RNA,通过RT-PCR扩增得到鼠SCP-2编码序列,然后将该编码序列克隆到带有His标记的载体pET14b上,重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确后转化大肠埃希菌BL21(DE3),用异丙基β-D硫代半乳糖(IPTG)诱导融合蛋白表达,用镍离子亲和层析的方法纯化融合蛋白并进行复性,然后切取分子量正确的条带用SDS-PAGE及质谱技术进行鉴定。结果重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定证明载体构建正确。融合蛋白表达纯化后获得了分子量约59kD的融合蛋白,符合预期大小,并经质谱分析证明该融合蛋白的表达正确。结论成功构建了带His标签的SCP-2原核表达载体,并成功表达及纯化出该融合蛋白,为深入研究SCP-2的相关生物学功能提供了一个重要的工具。
- 胡水旺孙明晶夏高晓邓鹏姜勇
- 关键词：基因表达
