吴玉璐
- 作品数：8 被引量：26H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家生猪现代产业技术体系建设项目国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪流行性腹泻病毒RT-PCR鉴别诊断试剂盒及其应用
- 本发明公开一种猪流行性腹泻病毒RT-PCR鉴别诊断试剂盒，所述试剂盒包含：针对PEDV弱毒疫苗株ORF3基因第245～294位核苷酸序列缺失区设计的一对引物，该对引物的上下游引物分别位于所述ORF3基因缺失区两端的保守区...
- 童光志周艳君吴玉璐
- 文献传递
- 猪流行性腹泻病毒N基因的表达及抗原性分析被引量：10
- 2013年
- 为深入了解仔猪腹泻的病因,本研究在不同发病猪场采集了115份临床样品,通过RT-PCR方法对猪流行性腹泻病毒(PEDV)进行检测,结果显示总阳性率为81.7%。进一步从部分样品中对PEDV的N基因进行克隆和序列分析,结果显示采集的临床样品中各分离株之间的氨基酸同源性高达99%以上,与代表性病毒株CV777的氨基酸同源性为97.4%～98.1%,表明目前流行的PEDV其N基因仍然相对保守的。同时,构建了重组表达载体pGEX-N,经诱导表达显示该重组蛋白呈可溶性表达,重组蛋白大小约为81 ku,western blot分析结果表明该重组蛋白能够被PEDV阳性猪血清特异性识别。将纯化后的重组N蛋白作为包被抗原,对20份已知背景的临床猪血清抗体进行ELISA检测,结果显示有9份血清为抗体阳性,11份血清呈抗体阴性,与应用RT-PCR方法鉴定抗原的结果符合率为85%。本研究表达的重组N蛋白具有良好的抗原性,可以将其作为PEDV血清学诊断的候选抗原。
- 吴玉璐朱建平杨莘王亚欣徐彦召虞凌雪于海刘光清童光志周艳君
- 关键词：猪流行性腹泻病毒重组N蛋白抗原性分析
- 猪流行性腹泻病毒RT-PCR鉴别诊断试剂盒及其应用
- 本发明公开一种猪流行性腹泻病毒RT-PCR鉴别诊断试剂盒，所述试剂盒包含：针对PEDV弱毒疫苗株ORF3基因第245～294位核苷酸序列缺失区设计的一对引物，该对引物的上下游引物分别位于所述ORF3基因缺失区两端的保守区...
- 童光志周艳君吴玉璐
- 文献传递
- 猪流行性腹泻病毒遗传变异分析及诊断方法的建立
- 猪流行性腹泻(Porcineepidemicdiarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemicdiarrheavirus,PEDV)引起的以严重的肠炎、呕吐和水样腹泻为特征的猪的一种急性肠道传...
- 吴玉璐
- 关键词：猪流行性腹泻病毒单克隆抗体
- 文献传递
- 猪流行性腹泻病毒RT-PCR鉴别诊断方法的建立被引量：12
- 2013年
- 【目的】利用RT-PCR技术建立一种在临床上便于区分猪流行性腹泻病毒(PEDV)自然感染与疫苗免疫毒株的方法。【方法】根据GenBank公布的PEDV ORF3基因序列,在其存在基因缺失区两端的保守区域设计特异性引物,对近两年采集的仔猪腹泻样品进行检测,分析流行毒株的ORF3基因,选择部分阳性样品利用鉴定引物进行RT-PCR扩增,优化其反应体系、Tm值等条件,进行鉴别诊断方法的特异性、敏感性试验,并对大量临床样品进行检测验证。【结果】从新发仔猪腹泻临床样品中克隆获得了11株PEDV的ORF3基因,序列分析显示新分离的9株ORF3基因不存在缺失,属于自然感染野毒,其与疫苗株的核苷酸同源性为95.8%—97.1%。建立的鉴别诊断方法可以特异性扩增PEDV的ORF3基因,其中获得的PEDV自然感染毒株基因片段大小约300 bp,而弱毒疫苗株则为250 bp左右;该鉴别诊断方法与其他猪源病毒无交叉扩增,其敏感性可达到100TCID50/0.1mL,对仔猪腹泻临床样品检测结果显示,PEDV自然感染的阳性率为65.4%。【结论】初步建立了基于PEDV ORF3基因的RT-PCR鉴别诊断方法,该方法可以用于区分自然感染的野毒和弱毒疫苗免疫毒株,为PEDV的疫情诊断和流行病学监测提供了一种特异、快速的检测方法。
- 吴玉璐程群虞凌雪侯怡轩王康刘光清童光志周艳君
- 关键词：猪流行性腹泻病毒ORF3基因RT-PCR
- 猪流行性腹泻病毒N基因表达及抗原性分析
- 近两年在我国爆发的仔猪腹泻疫情对养猪业造成了重大的影响,为了深入了解仔猪腹泻的病因,本研究在不同发病猪场采集了115份临床样品,通过RT-PCR方法对猪流行性腹泻病毒(PEDV)进行了检测,结果显示总阳性率为81.7％....
- 吴玉璐杨莘虞凌雪姜一峰童武童光志周艳君
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒强/弱毒感染PAM细胞生物学特性比较分析被引量：1
- 2012年
- 为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)强、弱毒株在PAM细胞上的增殖特性,本研究在体外分离培养了健康猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM),然后分别用高致病性PRRSV强毒HuN4株和弱毒疫苗HuN4-F112株感染PAM细胞,细胞病变观察和间接免疫荧光检测结果显示,二者在体外均可以感染PAM细胞,其中强毒HuN4株感染PAM细胞CPE较为明显。在两个毒株感染PAM细胞后12、24、36、48、60h分别收获病毒感染的细胞,利用抗PRRSV N蛋白单抗进行Western blot分析检测病毒核蛋白在不同时间表达量的变化,结果表明,强毒株在感染PAM细胞的早期,N蛋白合成表达量明显高于弱毒疫苗株,而弱毒疫苗株在感染Macr-145细胞早期,N蛋白的合成量则明显优于强毒株。比较HuN4株与HuN4-F112株在PAM细胞和Marc-145细胞的生长曲线,结果显示强、弱毒在PAM细胞和Marc-145细胞生长趋势存在明显差异,其中强毒HuN4株在PAM细胞上增殖能力明显强于弱毒株,而弱毒HuN4-F112株在Marc-145细胞上的增殖能力明显强于其在PAM细胞上的增殖能力,表明PRRSV强毒株对靶细胞PAM的感染能力较强,弱毒疫苗株对其感染能力相对较弱。本研究为深入了解PRRSV强毒株与弱毒疫苗株的致病性差异提供了理论依据。
- 朱建平周艳君王亚欣虞凌雪吴玉璐童武姜一峰朱礼倩于海童光志
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒肺泡巨噬细胞生物学特性
- 猪流行性腹泻病毒M基因的表达及鉴定被引量：5
- 2012年
- 为了更好的研究近两年在我国爆发的猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)疫情,本实验室收集不同发病地区的临床样品进行猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea,PEDV)RT-PCR检测,并挑选8个阳性样品对其M基因进行扩增,克隆和测序。序列比对的结果显示,8个分离株与14个参考株之间的核苷酸以及氨基酸同源性分别是96.5%～99.9%和96.0%～100%,表明目前流行的PEDV其M基因是相对保守的。同时,我们将ZZ-1株的M基因克隆于原核载体pGEX-6p-1,转入菌株BL21中后获得了大量表达,重组蛋白大小约为50 kDa。利用PEDV阳性猪血清对纯化后的重组M蛋白进行Western blot分析,结果表明重组表达的M蛋白与临床阳性猪血清具有良好的免疫反应性。
- 吴玉璐虞凌雪程群王康于海刘光清童光志周艳君
- 关键词：猪流行性腹泻病毒M蛋白原核表达
