吕丽慧
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：天津科技大学生物工程学院工业微生物教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- DsbC-K2S融合表达载体的构建及其诱导表达
- K2S是纤维蛋白酶原的截短突变体,是一种安全、有效的溶解血栓药物.采用基因工程手段生产具有生物活性的K2S,将可以大大提高其产量并有效降低生产成本.本实验利用PCR法扩增获得K2S编码基因,克隆至pET40b质粒DsbC...
- 田文静罗学刚井晓兰吕丽慧王楠姜勇张同存
- 文献传递
- 乳糖诱导瑞替普酶在大肠杆菌中的可溶性表达被引量：4
- 2011年
- 目的构建瑞替普酶(rPA)大肠杆菌基因工程菌,优化乳糖诱导表达条件,并获得活性重组蛋白。方法通过PCR扩增得到rPA编码基因,将该基因片段克隆到载体pET40b中,转化E.coli BL21。优化确定乳糖诱导浓度、时间、温度等参数,将诱导表达后获得的菌体细胞通过超声破碎裂解后利用镍柱亲和色谱进行分离纯化,重组目的蛋白经Xa因子切割去除DsbC融合标签后释放获得rPA产物,最后利用纤维蛋白平板法对其溶栓活性进行检测。结果 rPA重组质粒构建成功,利用终浓度30 mmol/L的乳糖于30℃诱导5 h可以获得很好的表达效果,重组蛋白的表达量、可溶性及酶活与IPTG诱导产物基本接近;经纯化后的rPA目的蛋白可表现出明显的溶栓活性。结论本研究为进一步利用大肠杆菌系统表达生产高活性重组rPA提供了一定的参考依据。
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- 关键词：瑞替普酶DSBC乳糖大肠杆菌
