卫其巍
- 作品数：7 被引量：4H指数：1
- 供职机构：南京农业大学植物保护学院更多>>
- 发文基金：江苏省基础研究计划国家教育部博士点基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 逆转录环介导等温扩增技术快速检测大豆花叶病毒被引量：4
- 2014年
- 大豆花叶病毒（Soybean mosaic virus，SMV）是一种在世界很多国家广泛分布并极具破坏性的植物病毒，导致大豆严重减产和种质衰退，每年都会给很多国家带来巨大的农业经济损失，为此，建立了一种逆转录环介导等温扩增（ Reverse-transcription loop-mediated isothermal amplification, RT-LAMP）全新的SMV检测技术，利用该技术可以快速、准确与有效地检测大豆植株和种子中携带的SMV。根据GenBank数据库中大豆花叶病毒的外壳蛋白基因序列，设计并筛选到了SMV RT—LAMP特异性引物组，应用该引物组优化了RT—LAMP反应参数，灵敏度实验结果表明，RT-LAMP检测SMV比普通RT—PCR灵敏度高10～100倍。结合RNA粗提法，建立了一步法RT—LAMP快速、灵敏地检测到植物叶片中的SMV。加入荧光染料SYBR Green Ⅰ则可在反应管中直接观察检测结果，实现了检测的可视化。该RT-LAMP技术还可灵敏地检测到大豆种子中携带的SMV。RT-LAMP检测方法第一次应用于SMV的检测，具有灵敏度高、速度快和特异性强的优点，可应用于实验室和田间大豆样品SMV的快速检测。
- 张雯娜李晋玉田金艳卫其巍智海剑陶小荣
- 关键词：大豆花叶病毒大豆
- 大豆花叶病毒的一步法环介导逆转录等温扩增检测方法
- 本发明公开了大豆花叶病毒的一步法环介导逆转录等温扩增检测方法。使用本发明所述的引物组进行RT-LAMP反应，将反应产物于1%TBE琼脂凝胶中电泳或用荧光染料SYBR GreenI对扩增产物的可视化；反应呈阳性，表明存在大...
- 陶小荣张雯娜卫其巍
- 文献传递
- 大豆花叶病毒的一步法环介导逆转录等温扩增检测方法
- 本发明公开了大豆花叶病毒的一步法环介导逆转录等温扩增检测方法。使用本发明所述的引物组进行RT-LAMP反应，将反应产物于1%TBE琼脂凝胶中电泳或用荧光染料SYBR GreenI对扩增产物的可视化；反应呈阳性，表明存在大...
- 陶小荣张雯娜卫其巍
- 一种黄瓜绿斑驳花叶病毒的RT-LAMP快速检测试剂盒及检测方法
- 本发明一种黄瓜绿斑驳花叶病毒的RT-LAMP快速检测试剂盒及检测方法，其中该方法包括：植物病毒总RNA的提取，RT-LAMP反应和电泳检测或荧光染料检测，确定植物是否带病。本发明根据CGMMV的外壳蛋白基因保守区域设计了...
- 陶小荣李靖玉卫其巍张雯娜吴鉴艳
- 文献传递
- 在中国大豆品种上创建ALSV诱导的基因沉默体系
- 2022年
- 【目的】在中国大豆品种上建立以苹果潜隐球形病毒(apple latent spherical virus,ALSV)为载体的基因沉默体系,为中国大豆品种的基因功能和遗传育种提供一种简便、省时、易操作的技术体系。【方法】构建以农杆菌介导接种的ALSV病毒侵染性克隆载体。从大豆品种威廉姆斯82(Williams 82)中特异扩增327 bp的八氢番茄红素脱氢酶(GmPDS)基因cDNA片段,插入病毒载体pALSV2。通过农杆菌浸润法将病毒载体导入模式植物本氏烟(Nicotiana benthamiana),17 d后富集病毒粒子,摩擦接种大豆第一轮真叶,以接种病毒空载作为对照组,持续观察测试大豆植株系统叶表型,并结合逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)或荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ALSV衣壳蛋白基因(CP)和GmPDS的表达水平。【结果】ALSV﹕GmPDS接种大豆品种威廉姆斯82和南农1138-2,20 d后,前者系统叶未见白化表型,而后者系统叶出现明显的白化表型;qRT-PCR检测结果表明,发生白化的南农1138-2植株中GmPDS的表达水平显著降低,未出现白化表型的威廉姆斯82中GmPDS的表达水平没有出现显著变化。在此基础上,采用相同的方法,测试了ALSV在其他9种大豆品种中诱导GmPDS的沉默效率,发现在南农47、安豆203、祥斗4号、中黄13、山宁29、齐黄34等大豆品种上接种ALSV﹕GmPDS后植株系统叶均产生白化表型,而菏豆12、中黄311和山宁16等3个品种的GmPDS均不能诱导有效沉默。【结论】构建了农杆菌介导的ALSV病毒载体,利用本氏烟扩繁富集ALSV病毒,将提纯的病毒粒体摩擦接种大豆真叶,在多个中国大豆品种上成功建立了基因沉默体系。
- 董永鑫卫其巍洪浩黄莹黄莹冯明峰窦道龙窦道龙陶小荣
- 关键词：大豆
- 一种黄瓜绿斑驳花叶病毒的RT-LAMP快速检测试剂盒及检测方法
- 本发明一种黄瓜绿斑驳花叶病毒的RT-LAMP快速检测试剂盒及检测方法，其中该方法包括：植物病毒总RNA的提取，RT-LAMP反应和电泳检测或荧光染料检测，确定植物是否带病。本发明根据CGMMV的外壳蛋白基因保守区域设计了...
- 陶小荣李靖玉卫其巍张雯娜吴鉴艳
- 大豆种子中菜豆荚斑驳病毒的RT-LAMP检测和大豆花叶病毒表达载体的构建
- 大豆是一种富含优质蛋白、无胆固醇油脂、多种糖类碳水化合物和微量物质的杂粮作物，是饲料、油料和蛋白质的重要来源，也是用地、养地和保持生态平衡的重要作物。本研究以大豆为中心，在大豆上开展病毒病快速检测技术的研究和植物病毒表达...
- 卫其巍
- 关键词：大豆种子菜豆荚斑驳病毒大豆花叶病毒
- 文献传递
