卢长明
- 作品数：118 被引量：522H指数：13
- 供职机构：中国农业科学院油料作物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生一般工业技术更多>>
- 影响农杆菌转化效率的植物因子H2A1基因的克隆、序列分析及其植物表达载体的构建被引量：4
- 2007年
- 拟南芥组蛋白H2A1是影响农杆菌T-DNA整合到宿主基因组的关键因素之一。与其它H2A组蛋白一样,它含有1个保守的H2A结构域。本研究利用PCP技术从拟南芥中成功扩增到H2A1基因组序列的全长。产物纯化后克隆到pBI121(Kmr),从而构建了H2A1的植物表达载体pBI121-H2A1。PCR和DNA测序证实载体构建成功。最后用电击法将该重组质粒导入根癌农杆菌LBA4404菌株中形成工程菌。此表达载体的构建为进一步研究H2A1的功能和提高外源基因在植物中稳定表达水平奠定了基础。
- 邹智吴刚卢长明
- 关键词：根癌农杆菌植物表达载体
- 油菜种子特异表达启动子pNapB和pFAE1的结构与功能比较研究被引量：7
- 2008年
- 启动子是基因在转录水平上的一种重要调控元件。本研究通过同源序列法从甘蓝型油菜品种中油821中分离到油菜基因NapB和FAE1的上游启动子序列pNapB和pFAE1,其中pNapB长1136bp,pFAE1长1420bp。两种启动子的核苷酸序列都含有种子特异表达启动子的顺式作用元件,包括RY重复、G-box和E-box等,但两种启动子顺式作用元件的序列分布不同。将pNapB和pFAE1两个启动子分别与报告基因GUS融合并通过农杆菌介导法导入烟草,得到大量转基因烟草植株。对T1代转基因烟草进行组织化学分析,比较了不同启动子的组织表达特异性。结果表明,两种启动子都只在种子中起作用,属于典型的种子特异性表达启动子,但是它们作用的时间和空间分布以及作用强度明显不同。pNapB启动子比pFAE1作用开始的时间早,持续时间长,在早期作用比pFAE1强,但pFAE1启动子在种子发育中期启动速度快,成熟种子的GUS染色深度在两种启动子间差别不大。
- 肖娜武玉花肖玲吴刚卢长明
- 关键词：GUS转基因烟草
- 转基因油菜筛查检测策略研究被引量：10
- 2012年
- 根据收集到的国内外已商业化转基因油菜品种的基因元件信息,构建了油菜转基因检测分子特征矩阵,在分析基因元件使用频率的基础上,建立了转基因油菜的筛查检测策略。研究发现,利用P-CaMV35S、P-FMV35S和bar这三个元件组合,对现有转基因油菜品种的筛查检出率可达100%。将P-CaMV35S、P-FMV35S、bar、CP4-EPSPS、PAT和T-NOS组合,每个转化事件可检出至少两次,增加了检测的可靠性。同时,分析了不同转化事件中同名基因元件的序列差异,进一步验证了分子特征矩阵筛查方法的可行性。
- 张丽武玉花吴刚曹应龙李均卢长明
- 关键词：转基因油菜转基因检测筛查方法矩阵分析PCR
- 转基因油菜Topas 19/2事件外源插入载体旁侧序列及其应用
- 本发明公开了一种转基因油菜Topas 19/2事件外源插入载体旁侧序列及其应用，涉及生物工程技术领域中转基因油菜的检测。本发明以转基因油菜品种Topas 19/2为材料，利用Invitrogen公司GenomeWalke...
- 卢长明吴刚武玉花肖玲
- 文献传递
- 以油菜脂肪酸延长酶基因fae1为靶标RNAi载体的构建被引量：13
- 2004年
- 通过基因工程手段抑制脂肪酸延长酶基因fae1的表达,以阻止芥酸合成,培育不受高芥酸窜粉影响的低芥酸品种。利用GenBank中的fae1基因序列AF490462为模板设计引物和多聚酶链式反应(PCR)从白菜、甘蓝和甘蓝型油菜的12个不同品种中扩增出长1007bp的fae1基因片段,通过对fae1基因片段DNA序列的测定和序列比较,找到长度为428bp高度保守区作为RNA干涉(RNAi)的靶标区。根据RNA干涉(RNAi)双向表达载体设计原则,将428bpfae1基因片段以正反两个方向插入双向表达载体pMCG161中,两个片段用一个wax基因的内含子连接,植物筛选标记基因采用bar基因,从而构建以油菜fae1基因为靶标的RNAi载体。
- 肖玲卢长明
- 关键词：油菜酶基因BAR基因低芥酸白菜RNA干涉
- 油菜脂肪酸延长酶基因fae1片段的克隆与SNP分析被引量：15
- 2005年
- 脂肪酸延长酶基因fae1是调控油菜芥酸合成的关键基因。本研究利用GenBank中的fae1基因序列AF490462为模板设计引物,通过多聚酶链式反应(PCR)从白菜、甘蓝和甘蓝型油菜(包括2个人工合成种)的12个不同品种中扩增出长1007bp的fae1基因片段。PCR产物经与克隆载体pGEM-Tvector连接和序列测定,获得12个品种的fae1基因片段的DNA序列。对来自12个不同品种的fae1基因序列进行比较分析表明:fae1基因具有高度序列保守性,扩增长度均为1007bp,核苷酸序列相似度达98%以上,氨基酸序列的保守性更高。在1007bp的区间内共发现23个SNP(singlenucleotidepolymorphism)位点,其中有11个单核苷酸变异导致了编码氨基酸的改变。人工甘蓝型油菜和天然甘蓝型油菜的fae1基因片段未发现明显差异。发现了高芥酸品种与低芥酸品种的fae1基因、以及A基因组与C基因组的fae1基因特有SNP位点。
- 肖玲卢长明
- 关键词：油菜基因克隆SNP芥酸
- 转基因油菜Rf2事件外源插入载体旁侧序列及其应用
- 本发明公开了一种转基因油菜Rf2事件外源插入载体旁侧序列及其应用，涉及生物工程技术领域中转基因油菜的检测。本发明以转基因油菜品种Ms1Rf2为材料，获得Rf2事件外源插入载体旁侧序列，序列为SEQ NO.1。其中第1-2...
- 卢长明吴刚武玉花肖玲
- 文献传递
- 转基因油菜RF1的外源基因插入位点分析与事件特异性检测方法研究被引量：12
- 2008年
- 采用基因组步移和巢式PCR方法研究了转基因油菜雄性不育恢复系RF1外源基因插入位点序列特征,并根据此特征建立了RF1转化事件特异性检测方法。从RF1基因组DNA中分离到外源基因插入位点的左边界旁侧序列798bp,包括335bp的插入载体序列和463bp的旁侧基因组序列。根据已发表的RF1右边界旁侧序列的信息,发现外源T-DNA在向油菜基因组整合的过程中,在整合位点处有75bp的基因组序列丢失。根据分离的RF1左边界旁侧序列,建立了RF1事件特异性定性检测方法,扩增片断大小为284bp。利用建立起来的RF1事件特异性定性检测方法可以准确的将转基因油菜RF1与其它的转基因油菜品种区分开,检测灵敏度达到5个拷贝(0.013%)。该事件特异性检测方法具有高度的特异性和良好的灵敏性,为转基因油菜品种RF1的身份识别提供了有效的方法。
- 聂淑晶武玉花吴刚肖玲卢长明
- 关键词：GMO
- 转基因植物中标记基因定性PCR检测方法研究被引量：10
- 2011年
- 为了建立以标记基因为检测靶标的高效定性检测方法,本研究系统地分析了目前申请商业化的转基因植物中标记基因的应用频率,选取了应用频率高或在未来应用潜力大的标记基因neomycin phosphotransferaseII(NPTII)、phosphinothricin acetyltransferase(PAT)、5-enolpyrul-shikimate-3-phosphate synthase(CP4-EPSPS)、phosphinothricin acetyltransferase(bar)、hygromycin phosphotransferase II(HPTII)、β-glucuronidase(GUS)和phospho-mannose isomerase(PMI)作为检测靶标,建立了这七个基因的普通PCR和实时荧光PCR检测方法。该研究建立的普通PCR方法和实时荧光PCR方法特异性强、灵敏度高、重现性好,适用于农产品中转基因成分的大规模筛查检测,而且应用实时荧光PCR方法可大大提高检测效率,降低检测过程中样品交叉污染和环境污染的几率。
- 岳运锋吴刚武玉花卢长明
- 关键词：标记基因实时荧光PCR
- 温度控制转基因植物外源基因表达的研究
- 利用温度控制外源基因表达可以使转基因植物的外源基因按照人类的需要在特定的时间和空间发挥作用,它不但可以提高性状表达的准确性而且可以通过减少外源蛋白的积累,提高转基因生物的安全性。本研究的目的是探索利用油菜的热休克蛋白HS...
- 陈桂敏吴刚曹应龙武玉花肖玲卢长明
- 文献传递
