刘雪华
- 作品数：10 被引量：9H指数：2
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- miR-20b过表达对P19细胞增殖和细胞分化的影响
- 朱莎莎刘雪华余章斌朱春李萌萌韩树萍胡晓山朱金改彭宇竹
- miR-30c对P19细胞增殖、凋亡及通过shh信号通路对细胞分化功能的影响
- microRNA（miRNA,miR）是一类小分子非编码单链RNA,长约22个核苷酸,广泛存在于植物、线虫以及人类的细胞中,目前认为miRNA可以通过与靶基因m RNA3’UTR区域结合,介导靶基因m RNA的降解或抑制...
- 刘雪华
- 关键词：P19细胞过表达SHH信号通路心脏发育
- 文献传递
- 室间隔缺损相关的长链非编码RNA TUC40-的生物信息学及表达谱分析
- 2016年
- 目的探讨TUC40-在人和小鼠心脏胚胎发育过程中是否发挥作用。方法应用生物信息学网站NCBI、UCSC、Uniprot及软件Clustal、DNAMAN、MEGA 6等,对TUC40-及其编码片段uc.40-进行分析;采用链特异性逆转录实时定量聚合酶链反应检测TUC40-与其正义链产物Pbx1 mRNA在小鼠胚胎心脏发育关键时间点的表达谱。结果 Uc.40-于核苷酸序列、基因组位置及转录因子结合位点3个水平在人和小鼠具有保守性。TUC40-与Pbx1 mRNA在小鼠心脏胚胎发育过程中呈现负性趋势。结论 Uc.40-的多水平保守性提示了TUC40-功能的保守性。TUC40-可能是通过调控Pbx1,在人和小鼠的心脏胚胎发育中发挥作用。
- 李慧娟蒋犁余章斌韩树萍刘雪华
- 关键词：长链非编码RNA生物信息学保守性表达谱室间隔缺损
- miR-19b沉默对P19细胞分化及线粒体功能的影响被引量：2
- 2015年
- 目的:通过沉默微小RNA-19b(miR-19b)研究miR-19b对P19细胞分化及线粒体功能的影响。方法:转染miR-19b沉默质粒与空载质粒进入P19细胞建立起稳定的细胞系;线粒体功能分析用以检测细胞凋亡;诱导分化P19细胞,实时定量荧光PCR检测miR-19b沉默后细胞分化关键基因表达水平。结果:Target Scan 5.1软件及双荧光素酶报告基因系统共同证实,Wnt1为miR-19b在P19细胞中发挥作用的靶点(P<0.05);测定第0、4、6、8、10、12天c Tn T、NKX2.5、GATA4等基因的核酸表达量显示,心肌分化相关标志基因逐渐增高,miR-19b沉默组明显低于对照组(P<0.05);于分化第10天检测线粒体功能,发现miR-19b沉默组线粒体DNA拷贝数的相对含量高于对照组,其活性氧水平显著低于对照组,ATP水平也高于对照组(均P<0.05)。结论:miR-19b沉默可抑制细胞凋亡,抑制心肌细胞分化。
- 刘雪华朱莎莎余章斌朱春李萌萌韩树萍胡晓山朱金改彭宇竹
- 关键词：P19细胞线粒体分化
- 长链非编码RNAs与心脏发育及心血管系统相关疾病的关系被引量：1
- 2014年
- 长链非编码RNAs(lncRNAs)是生物体内转录本长度超过200 nt的RNA分子,它们并不编码蛋白,但参与了X染色体沉默,基因组印记以及染色质修饰,转录激活,转录干扰以及核内运输等多种重要的调控过程。近年研究表明,lncRNAs与心脏发育及心血管系统相关疾病密切相关,一些特异的lncRNAs有可能为心血管系统相关疾病的诊断和治疗提供新的靶点和研发新的药物。
- 刘雪华余章斌
- 关键词：心脏发育
- microRNA-30c沉默对P19细胞增殖及分化的影响
- 2015年
- 目的通过沉默microRNA（miRNA）-30c研究miRNA-30c对P19细胞增殖及分化功能的影响。方法将成功构建的miRNA-30c沉默质粒（miRNA-30c沉默组）与空载质粒（阴性对照组）通过lip02000法分别转染P19细胞，荧光表达观察质粒转染效率；通过杀稻瘟菌素Blasticidin筛选出miRNA．30c沉默稳定表达的P19细胞株；使用双荧光素酶报告基因间接验证成功沉默稳定表达的P19细胞株；细胞增殖（CCK-8）法检测细胞增殖活性；使用二甲基亚砜（DMSO）诱导P19细胞分化；倒置显微镜观察细胞分化形态变化；使用聚合酶链反应检测心肌分化标志基因（cTnT、NKX2．5、GATA4）的核酸表达水平。结果通过荧光表达观察到质粒成功转染入P19细胞；双荧光素酶报告基因提示miRNA-30c沉默显著解除了miRNA-30c对靶基因Gf口的抑制作用，细胞株成功建立（P〈0．001）；P19细胞分化过程中，倒置显微镜观察到miRNA-30c沉默组跳动心肌细胞的数量及频率均低于阴性对照组；检测心肌标志物发现miRNA-30c沉默组心肌细胞分化数量、标志基因表达均显著低于阴性对照组（P均〈0．05）。结论miRNA-30c沉默可以显著抑制P19细胞增殖功能，并抑制其向心肌细胞的分化，为其用于心脏发育的进一步研究奠定基础。
- 刘雪华朱莎莎余章斌朱春李萌萌韩树萍胡晓山朱金改彭宇竹
- 关键词：细胞增殖分化
- miR-30c过表达对斑马鱼早期心脏发育的影响
- 徐晶李萌萌刘雪华余章斌朱春韩树萍胡晓山朱金改
- miR-20b过表达对P19细胞增殖和细胞分化的影响被引量：2
- 2014年
- 目的探讨miR-20b过表达对P19细胞增殖和细胞分化的影响。方法将包含鼠miR-20b成熟序列的慢病毒载体及空载体分别感染P19细胞,通过嘌呤霉素筛选2周,建立稳定过表达鼠mR-20b的P19细胞系。用Real-time PCR的方法验证稳定细胞表达株。用CCK-8方法检测稳定感染miR-20b过表达慢病毒和空载体的P19细胞间细胞增殖的差别。将稳定感染的两组细胞以无血清培养液37℃孵育24小时使细胞停留于G0期,而后恢复血清培养,取不同时间点的细胞,使用流式细胞仪检测两组间细胞周期的差别,从而间接验证CCK-8的结果。以1%二甲基亚砜(DMSO)将两组稳定感染的P19细胞诱导分化为心肌细胞,Real-time PCR检测心肌分化相关标志基因的表达,并用光镜观察分化过程中的形态变化。结果建立了稳定表达miR-20b的P19细胞系,与空载体组相比,miR-20b过表达可抑制P19细胞的增殖,促进心肌分化相关标志基因的表达(P<0.05,P<0.01或P<0.001)。结论 miR-20b过表达可显著抑制P19细胞的增殖,并具有促进P19细胞向心肌细胞分化的作用。
- 朱莎莎刘雪华余章斌朱春李萌萌韩树萍胡晓山朱金改彭宇竹
- 关键词：P19细胞细胞增殖心肌分化
- miR-30c过表达对斑马鱼早期心脏发育的影响
- 2016年
- 目的探究miR-30c过表达对斑马鱼早期心脏发育的影响。方法于斑马鱼胚胎1细胞受精卵期，显微注射3个不同浓度梯度的miR-30c模拟物以实现过表达。通过计数在不同时间点斑马鱼胚胎的病死率及心率、显微镜观察斑马鱼大体形态及心包水肿情况，以及胚胎整体原位杂交等方法，评价miR-30c过表达对斑马鱼早期心脏发育的影响。结果与野生型对照组比较，随着过表达浓度的提高，斑马鱼胚胎的病死率逐渐增高，至8μmol／L浓度时，斑马鱼受精后96h病死率已达80％。而同时，作为评价心脏功能重要指标的心率逐渐下降。此外，随着过表达浓度的递增，斑马鱼心包水肿的程度越来越高，且此种心包水肿随着时间的推移越来越严重。之后，通过胚胎整体原位杂交的方法，观察心脏部位特异性基因的表达，发现过表达miR-30c的斑马鱼中，标记心房肌及心室肌探针的表达范围都有所扩大，心脏环化受到抑制，且心脏房室通道瓣膜处的基因表达缺失。结论miR-30c过表达影响斑马鱼的早期心脏发育。
- 徐晶李萌萌刘雪华余章斌朱春韩树萍胡晓山朱金改
- 关键词：斑马鱼心脏发育
- MicroRNA-19b过表达通过Wnt／β-catenin通路对P19细胞的影响被引量：4
- 2014年
- 目的MicroRNA（miR）-19b是通过芯片筛选出与心脏发育高度相关的-种miRNA，本研究旨在研究miR-19b通过Wnt／β-catenin信号通路对P19细胞的影响。方法生物信息学软件预测miR-19b潜在靶基因；双荧光素酶报告基因验证miR-19b是否作用于Wnt的预测靶点；脂质体2000转染miR-19b过表达质粒与空载质粒进入P19细胞；CCK-8法检测细胞增殖活性；磷脂酰丝氨酸外翻分析检测细胞凋亡；Westernblot检测Wntl表达水平；实时定量-聚合酶链反应（PCR）检测miRNA-19b表达水平。结果TargetScan5．1软件预测Wntl为miR-19b在P19细胞中发挥作用的潜在靶点，双荧光素酶报告基因进行了验证，miR-19b过表达显著降低了靶基因Wnt的活性（P〈0．05）；miR-19b过表达降低了wnt信号通路中Wntl和B—catenin的表达水平，两者水平表达一致，于第2天至第10天均有统计学差异（P均〈0．05）。与空载对照组相比，miRNA-19b可促进P19细胞的增殖（各时间点P〈0．05），并且抑制其凋亡（P〈0．05）。结论miR-19b可能通过Wnt／β-catenin信号通路促进P19细胞的增殖，抑制凋亡，为其以后用于心脏发育的进一步研究奠定基础。
- 刘雪华秦大妮朱莎莎李萌萌余章斌韩树萍胡晓山朱金改朱春彭宇竹
- 关键词：MICRORNAP19细胞WNT通路
