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人脐带间充质干细胞移植治疗系统性红斑狼疮被引量：6: 2015年; 背景:系统性红斑狼疮是一种以多器官或多系统病变和血清中出现多种自身抗体为特征的自身免疫性疾病,目前缺乏有效的治疗方案,而理论上间充质干细胞可用于治疗系统性红斑狼疮。目的:观察人脐带间充质干细胞移植治疗系统性红斑狼疮小鼠的疗效。方法:分离培养人脐带间充质干细胞,并用深红色荧光DiR标记细胞。实验小鼠分5组:正常对照组(C57BL小鼠),模型对照组(C57BL/lpr小鼠),低、中、高剂量脐带间充质干细胞治疗组(C57BL/lpr小鼠),每组10只。各治疗组通过尾静脉注射低、中、高剂量(2×106,1×106,0.5×106个)脐带间充质干细胞,每周1次,连续3周,治疗结束采血测抗核抗体、抗组蛋白抗体、抗双链DNA抗体变化,定量PCR检测OPG和Foxp3基因表达的变化。结果与结论:细胞移植3次后,外周血抗核抗体、抗组蛋白抗体、抗双链DNA抗体均明显下降,CD4+CD25+T细胞明显升高,OPG和Foxp3基因表达也明显升高,接近正常对照组,与模型对照组相比差异均有显著性意义(P<0.01)。结果表明人脐带间充质干细胞能使C57BL/lpr小鼠的各项相关指标恢复到C57BL正常鼠水平,以高剂量治疗组效果最明显。; 阮光萍姚翔刘菊芬王金祥胡媛媛李自安杨建勇庞荣清潘兴华; 关键词：干细胞系统性红斑狼疮人脐带间充质干细胞

新型慢病毒转染四种细胞及在体内示踪的研究被引量：1: 2017年; 目的探讨最佳的生物标记方法示踪细胞,更好地观察细胞移植后在体内的归巢情况。方法本实验室用一种新型慢病毒(e GFP+PURO Lentivirus)转染了四种细胞,确定了四种细胞的最佳感染复数,细胞转染成功后,用最佳浓度的嘌呤霉素筛选,获得四种稳定的GFP阳性表达细胞株。所用的细胞包括人脐带间充质干细胞(h UC-MSC),树鼩脐带间充质干细胞(TS-UC-MSC),人胚肾细胞(293T),C57BL小鼠骨髓间充质干细胞(C57-BMSC)。结果用新型慢病毒(e GFP+PURO Lentivirus)成功转染四种常用细胞,转染成功率100﹪,细胞成功标记上GFP荧光,并确定了最佳的嘌呤霉素使用浓度,确定了不同细胞的感染复数。最终确定TS-UCMSC的最佳感染复数为240,h UC-MSC的最佳感染复数为150,293T的最佳感染复数为100,C57-BMSC的最佳感染复数为50。用带荧光的C57-BMSC细胞回输C57BL小鼠体内,冰冻切片在肝中找到标记细胞,在脾、肺、肾、心未找到标记细胞,说明外来细胞主要在肝脏中代谢。结论在细胞移植治疗时,细胞成功标记上GFP能在动物体内进行示踪,良好的细胞示踪方法可以很好地反映所研究细胞在体内外的动向。; 刘菊芬阮光萍李自安王金祥庞荣清潘兴华; 关键词：绿色荧光蛋白质类慢病毒属转染间质干细胞荧光抗体技术

一种鸡卵清提取液细胞培养基及其制备方法: 本发明公开了一种鸡卵清提取液细胞培养基，按照体积百分比由以下组分构成：65％-75％的DMEM/F-12 1:1培养基，5％-15％胎牛血清和15％-25％鸡卵清提取液。本发明还提供一种鸡卵清提取液细胞培养基的制备方法，...; 阮光萍潘兴华姚翔刘菊芬王金祥; 文献传递

人脐带间充质干细胞移植治疗系统性红斑狼疮: 背景系统性红斑狼疮是一种以多器官或多系统病变和血清中出现多种自身抗体为特征的自身免疫性疾病,目前缺乏有效的治疗方案,而理论上间充质干细胞可用于治疗系统性红斑狼疮.目的观察人脐带间充质干细胞移植治疗系统性红斑狼疮小鼠的...; 阮光萍姚翔刘菊芬王金祥胡媛媛李自安杨建勇庞荣清潘兴华

鸡蛋白提取液诱导细胞后干细胞蛋白芯片分析: 2015年; 目的:分析鸡蛋白提取液与细胞共培养是否能升高干细胞蛋白的表达,使细胞向干细胞转化。方法:用四种细胞,做一个普通培养,一个50%鸡蛋白提取液共培养,培养3 d后,收集细胞,冻于-80℃,送公司做干细胞蛋白芯片检测。结果:C57-BMSC有3个蛋白发生了统计学意义的改变,TS-UC-MSC有1个蛋白发生了统计学意义的改变,293T有1个蛋白发生了统计学意义的改变,293T-GFP有1个蛋白发生了统计学意义的改变。结论:50%鸡蛋白提取液共培养细胞后,细胞发生了向干细胞转变的现象。; 阮光萍姚翔刘菊芬王金祥李自安胡媛媛潘兴华; 关键词：细胞诱导

体外传代对版纳微型猪骨髓间充质干细胞绿色荧光蛋白表达的影响被引量：5: 2016年; 目的通过分离扩增版纳微型猪骨髓间充质干细胞(BMSCs)观察传代对慢病毒转染的绿色荧光蛋白(GFP)表达的影响。方法采集4月龄版纳微型猪的骨髓,在DMEM/F12培养液中分离间充质干细胞(MSCs),并根据其形态学、抗原标志表达和分化潜能给予鉴定。MSCs与GFP慢病毒载体共培养,荧光显微镜观察GFP的表达,流式细胞仪检测传代后MSCs GFP表达率的变化。标记后传代至1、2、3、4代细胞间比较用非参数检验。结果采用直接培养骨髓,可以分离到高表达CD13、CD29、CD90、CD105的MSCs,并可诱导分化为脂肪、骨和软骨细胞。MSCs与携带GFP的慢病毒载体共培养3天即可观察到GFP的表达,最佳转染复数(MOI)值为50,最佳共培养时间为6 d。传代后MSCs GFP表达率呈下降趋势[1代转染率(42.3±2.25)%、2代转染率(41.6±2.65)%、3代转染率(41.4±3.75)%和4代转染率(38.2±4.75)%],但传至4代GFP表达率的变化差异无统计学意义(P>0.05)。结论采用含有10%胎牛血清的DMEM/F12培养液可以从版纳微型猪骨髓中分离到MSCs,GFP慢病毒转染是标记MSCs的有效方法,连续传代4代不会显著影响GFP的表达。; 余璞龙海霍金龙王强李自安王金祥刘菊芬潘兴华庞荣清; 关键词：骨髓间质干细胞细胞培养技术生物学标记

人脐带间充质干细胞对猕猴糖尿病治疗效果的研究被引量：4: 2017年; 目的通过用人脐带间充质干细胞(huMSCs)治疗猕猴糖尿病模型观察其血糖的变化。方法猕猴9只,分为对照组3只和模型组6只,模型组通过高糖高脂饮食及静脉注射链尿佐菌素(STZ)诱导成糖尿病模型,两组间比较用t检验。12周时再分为模型对照组3只和治疗组3只,治疗组每只每周静脉回输huMSCs 1×10~6个/kg,连续3周,每周检测各组血糖变化,三组间比较用方差分析。结果两组猕猴高糖高脂饮食喂养第8周时模型组空腹血糖值[(22.00±3.00)mmol/L]与对照组[(4.75±0.20)mmol/L]相比差异有统计学意义(t=9.94,P<0.01)。40周时1只猕猴因糖尿病死亡,病理切片证实心、肝、脾、肺、肾和胰腺均有病变,符合糖尿病特征。huMSCs治疗后,3周血糖连续下降,到第4周对照组、模型组、治疗组空腹血糖分别为(4.85±0.35)mmol/L、(18.20±1.00)mmol/L、(4.09±0.50)mmol/L,3组差异有统计学意义(F=388.10,P<0.01)。两两比较结果表明对照组和模型组比较差异有统计学意义(t=24.173,P<0.01),模型组与治疗组比较差异有统计学意义(t=25.549,P=0.014)。结论 STZ联合高糖高脂饲料能成功诱导出猕猴糖尿病模型,用huMSCs能有效降低血糖,使糖尿病猕猴恢复正常血糖,方法简便。; 阮光萍刘菊芬李自安王金祥庞荣清潘兴华; 关键词：猕猴属糖尿病病理切片间质干细胞移植

山羊胎肝内定位注射不同体积间充质干细胞对胎羊发育的影响被引量：2: 2018年; 目的探索山羊胎肝内定位注射不同体积间充质干细胞(MSC)对胎羊发育的影响。方法以B超探查10只疑似怀孕的母山羊,观察胎羊数量、胎羊性别,确定胎肝位置。怀孕约3个月时,在B超引导下穿刺至胎肝,注射不同体积和不同数量的雄性山羊骨髓MSC悬液到胎肝实质区域,精心护理并观察穿刺母羊是否流产。结果借助B超探查10只疑似怀孕母羊中的6只怀孕,可以发现胎心跳动和胎肝血流并确定胎肝的位置,在B超引导下能够准确注射MSC悬液至胎肝实质区域,注射1 ml MSC悬液,不会引起流产,安全可行;而注射同等细胞数量的4 ml MSC悬液,则导致穿刺山羊流产。结论 B超显影可确诊山羊怀孕和确定胎肝位置,胎肝内注射1 m山羊骨髓MSC悬液不会导致胎羊流产,MSC数量不变而体积增加至4 ml时易导致胎羊流产。; 黄小昆龙海苏锡雄苏锡雄李自安杨艾梅王强李自安王金祥余璞庞荣清王强; 关键词：超声引导定位注射山羊

Notch1基因沉默抑制骨髓源性脂肪祖细胞向成熟脂肪细胞分化: 2016年; 目的探讨Notch1对骨髓源性脂肪祖细胞（BMAPCs）向脂肪细胞分化的影响。方法无菌取sD大鼠股、胫骨骨髓制作细胞悬液，差速贴壁法培养，流式分析检测细胞表面标志表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（real-timeqPCR）检测脂肪相关基因和Notch信号分子表达。Notch1基因沉默实验分为空载体组和Notch1小RNA干扰组。Westernblotting检测干扰效率；STEMPRO Adipogenesis Differentiation Kit行细胞成脂诱导。结果BMAPCs表达CD34、CD44、CD45及CD90，且表达6种脂肪相关基因及Notch信号分子；成脂诱导促进Notch1mRNA表达（P〈0．01）；Notch1小RNA干扰抑制Notch1蛋白表达（P〈0．05）。Notch1小RNA干扰组的Cebpa、Lpl和Ppqγ、Slc2a4与Fabp4 mRNA表达均较对照显著降低，而pread1mRNA表达显著增加（P〈0．05-P〈0．01）；Notch小RNA干扰显著抑制脂肪细胞百分率（P〈0．05）。结论Notch1基因沉默抑制BMAPCs向成熟脂肪细胞分化。; 王金祥王小华白盈盈周芳蔡学敏刘菊芬李自安余争平朱光旭潘兴华

干细胞转染CMV-Luciferase-PGK-Puro慢病毒后化学发光成像: 2016年; 目的研究用化学发光成像的方法观察脐带间充质干细胞转染CMV-Luciferase-PGK-Puro慢病毒后的情况,代替活体成像仪的可行性。方法用CMV-Luciferase-PGK-Puro慢病毒转染树鼩脐带间充质干细胞,用最适浓度的嘌呤霉素筛选,存活的细胞用6孔板的3个孔培养,贴壁后,3个孔依次加入底物D-荧光素钾盐,用化学发光成像仪拍照,再用软件进行活体成像转换。将转染成功的细胞注入麻醉后的树鼩皮下,树鼩静脉注射底物。结果细胞加入底物后有生物发光,发光强度随底物作用时间延长而减弱。树鼩皮下也观察到发光细胞。结论 CMV-Luciferase-PGK-Puro慢病毒能成功转染树鼩脐带间充质干细胞,转染成功的细胞用于动物模型治疗后,可进行活体成像,观察细胞在动物体内的分布。; 阮光萍刘菊芬李自安王金祥吕燕波庞荣清潘兴华; 关键词：树鼩转染

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刘菊芬

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