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刘芝亮

作品数:15 被引量:40H指数:4
供职机构:中国水产科学研究院黄海水产研究所更多>>
发文基金:山东省自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家鲆鲽类产业技术体系建设项目更多>>
相关领域:农业科学生物学更多>>

文献类型

  • 8篇期刊文章
  • 6篇会议论文
  • 1篇学位论文

领域

  • 8篇农业科学
  • 3篇生物学

主题

  • 12篇半滑舌鳎
  • 7篇活性
  • 6篇原核表达
  • 6篇活性分析
  • 5篇激素
  • 4篇克隆
  • 4篇基因
  • 3篇体外
  • 3篇组织表达分析
  • 3篇GH
  • 3篇IGF
  • 2篇原核
  • 2篇孕激素
  • 2篇孕激素受体
  • 2篇生长激素
  • 2篇生物活性
  • 2篇石斑
  • 2篇石斑鱼
  • 2篇受体
  • 2篇七带石斑鱼

机构

  • 14篇中国水产科学...
  • 7篇上海海洋大学
  • 1篇中国海洋大学
  • 1篇青岛市海洋与...
  • 1篇青岛贝宝海洋...

作者

  • 15篇刘芝亮
  • 14篇徐永江
  • 13篇柳学周
  • 9篇王妍妍
  • 7篇史宝
  • 4篇李晓晓
  • 3篇王珊珊
  • 2篇陈圣毅
  • 2篇刘新富
  • 1篇温海深
  • 1篇李春广
  • 1篇王珊珊
  • 1篇武宁宁

传媒

  • 5篇渔业科学进展
  • 5篇2013年全...
  • 1篇中国水产科学
  • 1篇海洋与湖沼
  • 1篇水产学报
  • 1篇鱼类种子工程...

年份

  • 1篇2015
  • 1篇2014
  • 12篇2013
  • 1篇2012
15 条 记 录,以下是 1-10
排序方式:
半滑舌鳎生长轴关键基因的重组表达及对生长与生殖的调控机制研究
本文以我国鲆鲽类主导养殖品种—半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Günther)为研究对象,运用分子克隆、原核表达和Western blotting等技术手段成功构建了半滑舌鳎GH、IGF-I和IG...
刘芝亮
关键词:半滑舌鳎胰岛素生长因子生长发育生殖周期
文献传递
七带石斑鱼类胰岛素生长因子-Ⅰ成熟肽的克隆及原核表达与活性分析
陈圣毅刘新富徐永江刘芝亮柳学周史宝王妍妍
半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Günther)生长激素体外重组表达及活性分析被引量:1
2014年
根据半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Günther)生长激素(GH)基因的c DNA全长序列设计引物克隆得到其全长552个碱基成熟肽序列。利用RT-PCR方法将扩增片段克隆到原核表达载体p ET-28a上,实现了GH成熟肽在大肠杆菌BL21(DE3)中的融合表达。融合蛋白分子量为26 k Da,在IPTG诱导4h时目的蛋白表达量最高,占细菌总蛋白的41.5%,主要以包涵体形式存在。Western-blotting分析表明GH融合蛋白可特异性地被6×His抗体识别。诱导表达后的菌液沉淀经纯化和复性后,获得大小为26 k Da的纯化GH融合蛋白。以ELISA方法检测纯化后的GH融合蛋白显示其具有免疫学活性。本研究为认识半滑舌鳎生长轴的调控机制提供了基础资料。
柳学周刘芝亮徐永江王妍妍李春广
关键词:半滑舌鳎GH原核表达活性分析
半滑舌鳎生长激素体外重组表达及活性分析
柳学周刘芝亮徐永江
半滑舌鳎GH与IGF-Ⅰ对卵巢发育的调控作用及机制研究
徐永江柳学周刘芝亮
半滑舌鳎膜孕激素受体基因克隆与组织表达分析被引量:8
2013年
采用同源克隆和末端快速扩增(RACE)方法,首次获得全长为1319bp的半滑舌鳎膜孕激素受体(mPRα)的cDNA序列;将推断的氨基酸序列与其他物种mPRα氨基酸序列进行多重比较分析,发现存在7个跨膜区域。使用MEGA4.0临位相联法和ClustalX方法对mPRα的氨基酸序列进行聚类分析和序列相似度分析。结果表明,半滑舌鳎mPRα与漠斑牙鲆、大西洋绒须石首鱼以及青鳉等鱼类的mPRα聚为一支,亲缘关系较近,相似度较高,分别为94%、93%和90%;而与高等哺乳动物人和牛相似性均为53%,亲缘关系较远。应用半定量RT-PCR技术分析了mPRαmRNA在性成熟雌性半滑舌鳎不同组织的表达,结果表明,mPRαmRNA组织表达具有广泛性,但表达量存在差异,在脑、肾、脾和卵巢等组织表达丰富,在肝、胃和肌肉组织表达较弱。
史宝李晓晓柳学周徐永江王珊珊刘芝亮王妍妍
关键词:半滑舌鳎基因克隆
重组GH和IGF-Ⅰ对半滑舌鳎幼鱼生长的调控作用及机制
徐永江柳学周刘芝亮
半滑舌鳎促性腺激素α亚基cDNA的克隆及组织表达特征被引量:5
2013年
采用同源克隆和末端快速扩增(RACE)方法,从半滑舌鳎脑垂体中克隆了促性腺激素α亚基(CGα)全长cDNA(GenBank序列登录号:JQ364953).半滑舌鳎CGα基因全长685bp,其开放阅读框384bp,编码含127个氨基酸的蛋白,N端33个氨基酸为信号肽.半滑舌鳎CGα成熟肽与其他脊椎动物CGα成熟肽结构特征相似,具有10个半胱氨酸残基和两个N-糖基化位点.CGα成熟肽序列分析表明,半滑舌鳎CGα与鲽形目和鲈形目鱼类CGα同源性为60%~70%,与鲤形目鱼类CGα同源性为55%~60%.实时荧光定量RT-PCR结果表明,半滑舌鳎CGα mRNA在被检测的12个组织中均有表达,除头肾和脾脏、脾脏和肝脏间表达量差异不显著外,其他组织间表达量差异显著(P<0.05);CGα mRNA在垂体组织中大量表达,其次是鳃、肾脏、肌肉、卵巢和脑组织,而在心脏、头肾、肝和脾等组织中表达量很低.本研究为进一步探讨促性腺激素在半滑舌鳎繁殖生理中的作用机制奠定基础.
李晓晓柳学周史宝徐永江王珊珊刘芝亮王妍妍
关键词:半滑舌鳎CDNA克隆
半滑舌鳎类胰岛素生长因子-Ⅰ的原核表达及活性分析被引量:8
2013年
根据半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Güther)类胰岛素生长因子-Ⅰ(IGF-I)基因的cDNA序列,设计引物扩增编码IGF-I成熟肽序列,此序列由210个碱基组成,包括B-C-A-D 4个功能域。利用PCR方法将扩增片段克隆到原核表达载体pET-28a上,得到重组质粒,将重组质粒导入到大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导产生N端含6个组氨酸的融合蛋白。以SDS-PAGE电泳检测和SigmaScan软件分析获得的多肽,结果表明:IGF-I融合蛋白大小为11.4 kD,IPTG诱导3 h时目的蛋白表达量最高,占细菌总蛋白的58.5%,1 L菌液表达目的蛋白40.7 mg,主要以包涵体形式存在。利用Western-blotting方法验证融合蛋白可特异性的被6×His抗体识别。诱导表达后的菌液沉淀经6 mol/L盐酸胍变性、Ni2+离子亲和柱纯化和尿素梯度复性,获得大小为11.4 kD的纯化蛋白。细胞增殖实验表明,IGF-I融合蛋白可显著促进乳腺癌细胞MDA231细胞的增殖,具有生物学活性。本研究通过原核表达技术获得了体外重组的具有生物活性的半滑舌鳎IGF-I融合蛋白,结果可为半滑舌鳎生长调控技术研究提供基础资料。
刘芝亮徐永江柳学周史宝王妍妍
关键词:半滑舌鳎IGF-I原核表达生物活性
半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Günther)IGF-Ⅱ的体外重组表达被引量:1
2015年
为在蛋白水平认识半滑舌鳎类胰岛素生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)的生理功能,将IGF-Ⅱ成熟肽序列克隆到原核表达载体p ET-28a中,成功构建了重组半滑舌鳎IGF-Ⅱ/p ET28a质粒,导入到E.coli BL21(DE3)菌株后经IPTG诱导,获得了大小为11.4 k Da的重组IGF-Ⅱ蛋白,N端含6个组氨酸,可特异性地被6×His抗体识别。重组IGF-Ⅱ蛋白在最优诱导条件37℃诱导2 h,目的蛋白表达量占重组表达菌总蛋白的43.7%,重组蛋白主要以包涵体存在。将获得的重组蛋白包涵体经变性、纯化和复性后,获得了纯化的IGF-Ⅱ重组蛋白,其可在体外显著促进人乳腺癌MDA231细胞的增殖,表明IGF-Ⅱ重组蛋白具有体外细胞水平的生物活性。本研究结果可为认识鱼类IGF-Ⅱ生理功能及半滑舌鳎生长调控机制提供理论支撑。
徐永江柳学周张凯武宁宁刘芝亮李春广
关键词:半滑舌鳎原核表达生物活性
共2页<12>
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