刘宏
- 作品数：6 被引量：20H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院阜外心血管医院更多>>
- 发文基金：国家新药研究基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 从糜酶和肾素的转基因研究探索RAS在心肌重塑中的作用
- 2002年
- 心肌肥厚是多种心血管疾病中的一种病理改变,主要表现为心脏重塑包括心肌细胞肥大和间质成分的改变.心脏的结构与功能受到生理因素,血液动力学因素和神经体液因素等多种因素的调控,这些因素异常改变均可使心脏发生生理或病理的改变.在所有这些因素中,以肾素血管紧张素系统(RAS)及其受体最为引人关注.RAS最早作为循环内分泌系统被认识,主要参与血压调节.近年来发现在心脏等组织存在局部RAS,以自分泌,旁分泌和胞内分泌形式参与许多生理和病理过程.RAS在心脏中的作用主要通过可溶性多酶体系的级联反应形成的终末产物AngⅡ和其受体所介导.近年来关于心脏局部RAS在心脏重塑中的作用及机制研究已成为RAS研究的热点问题,但其详细作用机制尚不十分清楚,诸如:1.心脏局部RAS是否真实存在?2.心脏组织AngⅡ形成是否存在糜酶途径,该途径与ACE途径的相对贡献如何?3.糜酶与ACE途径是否存在时相性?4.糜酶对心脏重塑中是否有作用?5.肾素是心脏组织AngⅡ形成的限速因子吗?6.心脏组织中AngⅡ通过何种途径刺激心脏重塑?对上述问题的回答是揭示心脏局部RAS在心脏重塑中机制关键,针对这些研究热点我们从分子、细胞、整体动物模型等多个层次,从动态的观察角度对这些问题进行了探索.
- 陈兰英李鹏何泉姜立群周晓霞陈朋民张鹏华王醒刘嘉丽刘宏
- 关键词：糜酶转基因研究RAS肾素肾素血管紧张素系统心肌重塑
- 血管紧张素转换酶固相化方法的选择
- 2001年
- 分别采用琼脂包埋法、卵清包埋法、海藻酸钙包埋法、明胶 -戊二醛包埋法、溴化氰活化连接法和苯甲磺酰氯结合方法对血管紧张素转换酶进行固相化研究 ,发现苯甲磺酰氯结合法用于血管紧张素转换酶固相化效果最好。此实验是在低水活度条件下 ,利用苯甲磺酰氯在丙酮和吡啶存在的条件下活化SepharoseCL 4B凝胶侧链基团上的羟基 ,形成具有高反应活性的苯甲磺酰基团 ,在pH7 8的 0 2mol/LHEPES HCl缓冲系统中 ,4℃反应 12h ,将酶与凝胶连接在一起。 2 5mgACE与 5g活化琼脂糖凝胶在这种条件下反应 ,所得固相酶活力为 10 86U/mg ,蛋白固相率达到 6 6 % ,酶活力固相率为 5 3 3%。固相酶 4℃保存 3个月 ,活力剩余 80 % ,2 0℃保存 1个月酶活残留 6 1%。同样条件下 ,溶液酶活力分别只剩余 6 2 %和 19% ,由此可见血管紧张素转换酶经固相化后稳定性明显提高。
- 刘宏陈兰英
- 关键词：血管紧张素转换酶SEPHAROSE固相化
- 血管紧张素转换酶纯化与性质研究被引量：16
- 2000年
- 为了深入了解猪肺血管紧张素转换酶 (angiotensin converting enzyme,ACE)的性质和功能 ,对猪肺 ACE的分离纯化以及部分酶学性质进行了研究 .猪肺组织匀浆经 1 .6～ 2 .6mol/L硫酸铵分级沉淀等步骤后 ,利用亲和胶进行亲和层析分离 .2 0 0 g猪肺组织中提纯出 0 .79mg ACE,比活力 38.8U/mg,SDS- PAGE电泳鉴定为一条带 ,分子量约 1 80 k D,等电点 (p I)为 p H4.5,糖含量约 2 3.6% ,氨基酸组成分析发现猪肺 ACE分子中含有 1 346个氨基酸 ,其中酸性氨基酸含量较高 ,碘乙酸的修饰结果表明猪肺 ACE中巯基基团未参与酶的催化反应 .酶反应动力学结果显示 ,ACE催化 Fa PGG底物反应时的最适 p H大约为 p H 7.6,反应活化能 Ea=4.37× 1 0 4 J/mol,酶活性部位附近的组氨酸和具有类似 α-氨基性质的氨基酸可能参与了 ACE催化反应 .有关猪肺 ACE的基本生化性质、氨基酸组成以及酶学性质的结果 ,为今后深入研究奠定了基础 .
- 刘宏陈兰英
- 关键词：血管紧张素转换酶分离纯化酶学性质
- Lisinopril和Losartan对乳鼠心脏成纤维细胞AT1受体基因表达水平和ACE活力的影响
- 2000年
- 为了解两种降压药物 -血管紧张素转换酶 (angiotensin converting enzyme,ACE)抑制剂(lisinopril)和血管紧张素 型受体 (AT1 R)拮抗剂 (losartan)在心脏间质组织中的作用 ,进行了药物对乳鼠心脏成纤维细胞 AT1 R基因表达和血管紧张素转换酶活力影响的实验 .用 RT- PCR方法检测体外培养乳鼠心脏成纤维细胞 AT1 R基因的表达 .结果显示 ,losartan在 1 0 -7～ 1 0 -4 mol/L浓度范围内对心肌成纤维细胞 AT1 R基因表达有激活作用 ,其中 1 0 -5mol/L浓度激活作用最强 ;1 0 -5mol/L losartan对 AT1 R基因表达呈现明显的时间依赖性变化 ,当加入 1 h后 ,AT1 R基因表达量增加 2倍 ,随后出现一过性下降 ,2 4 h时回升并维持在一较高水平 .与 losartan相比 ,lisinopril对 AT1 R基因的表达无明显影响 .酶活实验结果显示 ,lisinopril明显抑制心肌成纤维细胞中的ACE活力 ,随时间延长 ,酶活力逐渐恢复 (1 2 .6× 1 0 -3 U/mg) ;而 losartan则对酶活力的影响不明显 ,仅是在 1 2 h后 ,ACE活力才略有升高 .实验结果证明 ,在心脏成纤维细胞中存在有 ACE和AT1 R,并且后者受 losartan以浓度和时间依赖方式的调节 .
- 刘宏陈兰英
- 关键词：心脏
- 血管紧张素转换酶的固相化与性质被引量：3
- 2000年
- 目的为从天然肽类混合物中分离血管紧张素转换酶（ angiotensin converting enzyme, ACE）抑制活性物质，对固相化 ACE（固相酶）进行研究。方法在低水活度条件下利用苯甲磺酰氯活化 Sepharose CL- 4B凝胶侧链基团上的羟基，形成高反应活性的苯磺酰基团，通过与 ACE上的氨基反应将酶固定于琼脂糖凝胶。结果固相化 ACE的反应 pH范围较宽，最适反应 pH比溶液酶（自由酶）增加 0.6个单位，达到 8.8。分别在 pH9.0和 pH6.5条件下处理 24 h，固相酶活力保留 82％和 68％，溶液酶只剩下 64％和 39％。两种酶均在 50℃左右活力最大，温度继续升高溶液酶迅速失活。分别在 40℃和 50℃处理 2 h，固相酶剩余活力为 82％和 34％，溶液酶为 52％和完全失活。 20℃放置 1个月，固相酶剩余活力为 61％，而溶液酶只有 20％。结论 ACE固相酶在 pH和温度稳定性方面强于溶液酶。
- 刘宏陈兰英
- 关键词：血管紧张素转换酶固相酶酶稳定性
- 亲和层析法分离纯化猪肺血管紧张素转换酶被引量：4
- 2000年
- 亲和胶合成实验以双环氧化合物 1,4 丁二醇 2 缩水甘油醚 (1,4 butanedioldiglycidylether)为活化体及连接臂 ,在硼氢化钠 (NaBH)存在的碱性条件下 ,将载体SepharoseCL%D 4B与雷诺普利 (lisinopril)共价连接在一起 ,成功合成亲和层析胶 ,并利用亲和层析胶对猪肺血管紧张素转换酶 (angiotensinconvertingenzyme ,ACE)进行分离提纯 .猪肺组织匀浆经 1 6～ 2 6mol/L硫酸铵分级沉淀、透析平衡、亲和柱分离等步骤 ,从 2 0 0 g猪肺中提纯得到 0 79mgACE蛋白 ,酶活力回收 11 9% ,比活力 38 8U/mg .与层析前的酶液比较 ,亲和层析一步提纯可达 2 6 4倍 ;与肺匀浆液比较提纯达 80 8倍 .SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳可见 ,提纯的猪肺ACE为一条带 ,分子质量约为
- 刘宏陈兰英
- 关键词：纯化血管紧张素转换酶亲和层析法
